念珠菌IgG抗體與1-3-β-D 葡聚糖檢測對侵襲性念珠菌病的診斷價值

鄧杰倫，袁 余，鄧 勁，馬 瑩

(四川大學(xué)華西醫(yī)院 實(shí)驗醫(yī)學(xué)科，四川 成都610041)

侵襲性念珠菌病(Invasive Candidiasis)是念珠菌侵犯至人體深部組織器官引起的感染性疾病[1]。念珠菌血癥是臨床表現(xiàn)為念珠菌感染并且血培養(yǎng)念珠菌陽性的一種侵襲性真菌病。近些年來，由于抗生素的不合理使用、各種生命支持技術(shù)的廣泛應(yīng)用以及獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的流行等原因，念珠菌感染有明顯增高的趨勢[2]，念珠菌引起的感染在血源性感染中位居第4位，在導(dǎo)管相關(guān)性感染中居第3位，即便使用了抗真菌藥物，其死亡率仍高達(dá)40%[3]。有文獻(xiàn)報告，在ICU病房所有細(xì)菌和真菌感染中，念珠菌血癥占14%以上[4]，而念珠菌血癥的病死率可達(dá)70%[5]以上。血培養(yǎng)是目前真菌血流感染診斷的實(shí)驗室金標(biāo)準(zhǔn)，但假陰性率高達(dá)50%，且需3-5 d才能得到結(jié)果[6]，由于敏感性低，培養(yǎng)時間長，往往延誤了真菌感染的診斷和治療，是造成真菌感染高病死率的主要原因之一[7]。因此，提高深部真菌感染診斷水平，尋找一種操作簡便、檢測快速、敏感性高、特異性好的早期預(yù)測深部念珠菌感染的方法極其重要。目前臨床常用的血清學(xué)檢測方法為1-3-β-D 葡聚糖試驗(真菌G實(shí)驗)[8-9]，可以輔助診斷IC[10]。但1-3-β-D葡聚糖檢測現(xiàn)作為常規(guī)的IC血清學(xué)檢測，其干擾因素較多，如一些惡性血液病患者治療過程中，中性粒細(xì)胞減少以及患者在檢測前的抗真菌藥物的預(yù)防性使用等，很大程度上影響了真菌G試驗的檢測結(jié)果。因此，研究和改進(jìn)檢測真菌的抗原，抗體和代謝產(chǎn)物的血清學(xué)方法，已成為了熱點(diǎn)[11]。目前，已有研究顯示念珠菌抗體的檢測對于IC的輔助診斷也具有較高的價值[12]。國外數(shù)年前已有相關(guān)產(chǎn)品上市，但該檢測在國內(nèi)的應(yīng)用有限。目前國內(nèi)也有了商品化的念珠菌IgG抗體檢測試劑盒，但其應(yīng)用價值尚待更多的臨床資料確認(rèn)。本研究擬通過對血清樣本中念珠菌IgG抗體和1，3-B-D葡聚糖的檢測，為念珠菌抗體檢測的診斷價值積累臨床資料，同時觀察比較此兩種方法對IC的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 樣本來源確診組為四川大學(xué)華西醫(yī)院2017年3月-2018年5月血培養(yǎng)念珠菌陽性，且臨床診斷為侵襲性念珠菌病的患者血清34例，包括31例血流感染，2例腹水，1例膽汁，其中白色念珠菌14例，熱帶念珠菌7例，光滑念珠菌6例，近平滑念珠菌5例，克柔念珠菌1例，葡萄牙念珠菌1例；對照組為排除真菌感染的住院患者血清22例，共計樣本56例。

1.2 試劑與儀器真菌G試驗試劑盒和MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)為北京金山川科技有限公司產(chǎn)品；念珠菌IgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)由丹娜(天津)生物有限公司提供；酶標(biāo)儀為伯樂公司的iMark。

1.3 試驗方法56例血清標(biāo)本均采用ELISA法檢測念珠菌IgG抗體濃度，用動態(tài)顯色法檢測1-3-β-D 葡聚糖含量。所有操作步驟和結(jié)果判斷均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件處理.兩種檢測方法間的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 念珠菌IgG抗體檢測結(jié)果

34例確診組中24例念珠菌IgG抗體陽性，10例陰性；22例對照組樣本中1例念珠菌IgG抗體陽性，21例陰性，見表1。

表1 念珠菌IgG抗體檢測結(jié)果

2.2 真菌G實(shí)驗檢測結(jié)果

34例確診組中，真菌G實(shí)驗陽性13例，陰性21例；22例對照組樣本中，真菌G實(shí)驗陽性5例，陰性17例，見表2。

2.3 念珠菌IgG抗體檢測和真菌G實(shí)驗的方法比較

念珠菌IgG檢測和真菌G實(shí)驗的敏感性和特異性比較用χ2檢驗，兩種方法的敏感性(P=0.007)，特異性(P=0.003)，陽性預(yù)測值(P=0.007)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，念珠菌IgG抗體檢測在敏感性,特異性以及陽性預(yù)測值均優(yōu)于真菌G實(shí)驗，見表3。

表2 真菌G實(shí)驗檢測結(jié)果

表3 念珠菌IgG抗體檢測、真菌G實(shí)驗以及兩種方法聯(lián)合診斷性能比較

3 討論

近年來,侵襲性念珠菌病(invasivecandidia-sis,IC)和侵襲性曲霉病(invasiveaspergillosis,IA)的發(fā)生有明顯的增長趨勢。同時,隱球菌、某些地方性真菌病的發(fā)病率也呈上升趨勢[13]。這類感染往往缺乏特征性的臨床癥狀和影像學(xué)指征,雖然有針對這些病原菌的有效治療方法,但患者的死亡率仍很高，部分原因是因為沒能早期診斷及時治療。早期準(zhǔn)確的診斷有助于侵襲性念珠菌病的成功治愈。但目前 IC 的實(shí)驗室診斷仍是急需解決的課題。目前常用的診斷方法包括：真菌顯微鏡檢查和培養(yǎng)、血清學(xué)診斷、核酸檢測和組織病理學(xué)檢查等[14]，但由于念珠菌復(fù)雜的生物學(xué)特性及各檢測方法的局限性，目前還沒有一個方法能滿足臨床診斷需求。所以臨床迫切需要一種更準(zhǔn)確，更簡便和快速的檢測方法。抗體檢測因操作方法簡便、特異性高、試劑穩(wěn)定，在念珠菌的輔助診斷中具有潛力。對IC患者血清中抗體進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在侵襲性感染早期，病人體內(nèi)與侵襲性感染有關(guān)的優(yōu)勢抗原的IgG抗體水平升高[15]。2008年美國 Clancy 等研究小組用 15 種重組念珠菌蛋白抗原對 60 例確診侵襲性念珠菌病患者血清進(jìn)行 IgG抗體檢測，結(jié)果顯示，抗15種抗原的IgG抗體在侵襲性念珠菌病患者中的檢出率為85%-98.3%，13種抗原的IgG抗體檢出率達(dá)到 90%以上,結(jié)果提示：侵襲性念珠菌感染病人的特異IgG 抗體水平升高，適用于作為 IC 診斷的參考指標(biāo)[15-16]。

在本研究中，念珠菌IgG抗體檢測的敏感性為70.6%，特異性為95.5%,而真菌G實(shí)驗敏感性為38.2%,特異性為77.3%，結(jié)果提示念珠菌IgG抗體檢測對于IC輔助診斷的準(zhǔn)確性相對更高，經(jīng)χ2檢驗，念珠菌IgG抗體檢測的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值均優(yōu)于真菌G實(shí)驗。念珠菌IgG抗體檢測在念珠菌感染診斷中具有潛在臨床應(yīng)用價值。當(dāng)然念珠菌IgG檢測也有一些干擾因素，如患者既往念珠菌感染可能會出現(xiàn)假陽性結(jié)果，當(dāng)患者處于免疫功能低下狀態(tài)，抗體水平較低，可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果[12,17]。目前國內(nèi)對于念珠菌IgG抗體檢測也越來越多，主要研究念珠菌烯醇化酶IgG抗體，張迪[11]，廖紅[17]等也將念珠菌烯醇化酶IgG抗體檢測結(jié)果與真菌G試驗結(jié)果進(jìn)行比對，其兩種檢測方法的敏感性和特異性均存在一定的差異。即念珠菌烯醇化酶IgG抗體對IC的診斷效能更優(yōu)于真菌G試驗。

真菌G實(shí)驗是一種新型的抗原檢測方法[9],目前作為臨床輔助診斷IC的方法之一，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床診斷。1-3-β-D葡聚糖是真菌細(xì)胞壁葡萄糖殘中的主要成分，真菌進(jìn)入人體血液或深部組織經(jīng)細(xì)胞吞噬、消化等處理后，葡聚糖可釋放出來，從而使血液及其他體液中1-3-β-D 葡聚糖水平增高。該檢測的優(yōu)勢在于它所能檢測真菌的范圍較廣，相對于真菌培養(yǎng)(2 d以上)更能節(jié)約時間。真菌G實(shí)驗已被美國FDA和歐洲許多國家批準(zhǔn)用于血液、腫瘤等免疫受損者中侵襲性真菌感染的診斷；且需連續(xù)2次G試驗陽性才能作為診斷依據(jù)，卻也沒有給出具體判定數(shù)據(jù)[18]。但其影響因素也較多，如靜脈輸注免球蛋白和白蛋白、長期血液透析、靜脈導(dǎo)管留置、某些抗腫瘤藥物的成分、手術(shù)紗布污染、消毒棉簽污染及某些細(xì)菌感染等因素，可能會導(dǎo)致真菌G實(shí)驗檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果[19]。而造成假陰性的原因可能是臨床抗真菌藥物的預(yù)防用藥或者1-3-β-D葡聚糖在真菌感染中出現(xiàn)的時間短，容易錯過最佳檢測時機(jī)而造成假陰性[17]。本研究中，真菌G試驗結(jié)果與以往文獻(xiàn)[17]報道的G試驗的敏感性和特異性相近。

綜上所述，真菌G實(shí)驗和念珠菌IgG抗體檢測分別檢測抗原和抗體，兩者具有互補(bǔ)性；因此，聯(lián)合檢測可以提高檢測的敏感性。目前，國內(nèi)臨床上尚未開展念珠菌IgG抗體的檢測，已發(fā)表的少數(shù)報道也限于研究。從本課題的結(jié)果來看，念珠菌IgG抗體的檢測對于IC的診斷具有較高的參考價值，可望用于臨床對IC的輔助診斷，但本研究為小樣本量，還需要擴(kuò)大樣本數(shù)量進(jìn)一步確認(rèn)該實(shí)驗的臨床效能。