淺談包含突變位點的生物序列權(quán)利要求的支持性審查

段珊

摘要：本文從一件復(fù)審案例出發(fā)，介紹了其中包含突變位點的生物序列的權(quán)利要求的支持性審查過程。包括用“包含”限定突變位點，是否為開放式限定的評判，以及將經(jīng)突變改造、功能活性得以改善的蛋白所包含的突變應(yīng)用于其他同類蛋白的預(yù)期性尺度的評判。

關(guān)鍵詞：生物序列;支持

前言

我國專利法第 26 條第 4 款規(guī)定，權(quán)利要求應(yīng)當(dāng)以說明書為依據(jù)，即所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員，根據(jù)說明書中的技術(shù)教導(dǎo)及其掌握的本領(lǐng)域中常規(guī)技術(shù)手段能夠得到或概括得出權(quán)利要求所限定的技術(shù)方案，也就是權(quán)利要求需要滿足“支持性”[1]。生物領(lǐng)域本身的復(fù)雜性導(dǎo)致判斷生物序列權(quán)利要求能否得到說明書的支持存在一定的復(fù)雜性和特殊性。以下將結(jié)合一件復(fù)審案例，介紹其支持性的審查過程，以期對相關(guān)領(lǐng)域的支持性審查提供一定的借鑒和參考。

一、案例介紹

基本案情：

案例涉及高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的rAAV載體、組合物及其使用方法。該案的發(fā)明點在于提供了AAV衣殼蛋白，其包含對VP3區(qū)中表面暴露之部分氨基酸或其組合的修飾，還提供了相應(yīng)的rAAV病毒體、核酸分子和rAAV載體，與野生型rAAV載體和病毒體相比，本案的rAAV載體和病毒體具有提高的轉(zhuǎn)導(dǎo)多種目的細胞、組織和器官的效率。

前審階段以權(quán)利要求1-18不符合專利法第26條第4款的規(guī)定為由駁回了本申請，駁回針對的權(quán)利要求1如下：

1. 一種經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白：

（a）其中所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白為經(jīng)修飾的AAV2衣殼蛋白，其包含對應(yīng)于SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K490、K527、K549或K556位置上的谷氨酸（E）氨基酸殘基;

（b）其中所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白為經(jīng)修飾的AAV2衣殼蛋白，其包含對應(yīng)于SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K532位置上的精氨酸（R）氨基酸殘基;

（c）其中所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白為經(jīng)修飾的AAV2衣殼蛋白，其包含對應(yīng)于SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K544和K556位置上的谷氨酸（E）氨基酸殘基;或

（d）其中所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白為經(jīng)修飾的AAV8衣殼蛋白，其包含對應(yīng)于SEQ ID NO：8的野生型AAV8衣殼蛋白之K547或K569位置上的谷氨酸（E）氨基酸殘基;并且

其中包含所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白的載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高于對應(yīng)的未經(jīng)修飾的野生型AAV載體。

駁回決定主要認為本申請未證明對于任意的AAV2或AAV8，只需包含所列舉的任意單點突變，均可獲得使包含所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高于野生型AAV載體的效果。僅能認可SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K527E、K532R、K490E、K549E或K556E;SEQ ID NO：8的野生型AAV8衣殼蛋白之K547E、K569E的單點突變，或SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K544/K556E的雙點突變所獲得的AVV衣殼蛋白能夠得到說明書的支持?；谏鲜隼碛烧J為權(quán)利要求1得不到說明書的支持。

申請人提出了復(fù)審請求，認為對于每一條要求保護的經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白，權(quán)利要求均限定了突變的賴氨酸位點以及相應(yīng)的突變成的氨基酸，對于所限定的突變信息說明書記載了包含這些位點的突變蛋白及其改善的活性。根據(jù)同類蛋白結(jié)構(gòu)、活性上的相似性，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以合理預(yù)期權(quán)利要求1所述經(jīng)突變的AAV衣殼蛋白會具有相比未突變時的相應(yīng)蛋白改善的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。認為權(quán)利要求1可以得到說明書的支持。

復(fù)審合議組則認為權(quán)利要求1中“包含”屬于開放式限定，意味著除權(quán)利要求中所限定的對應(yīng)位置的氨基酸殘基外，AAV2衣殼蛋白上其他位置的氨基酸殘基是不確定的。作為AAV病毒包裝所必需的結(jié)構(gòu)蛋白衣殼蛋白，維持特定的結(jié)構(gòu)功能域?qū)τ谄湔９δ艿陌l(fā)揮是重要的。本申請說明書并未表明任意序列的AAV2衣殼蛋白與權(quán)利要求所限定的這些單突變或雙突變的組合仍能發(fā)揮與本申請SEQ ID NO：2制備的突變蛋白同樣的效果。本領(lǐng)域技術(shù)人員難以預(yù)料不同突變位點的組合會導(dǎo)致多肽的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生怎樣的變化，以及會對衣殼蛋白行使正常的病毒包裝功能產(chǎn)生怎樣的影響。另一方面，從眾多序列、功能不確定的多肽中篩選出具有不影響衣殼蛋白結(jié)構(gòu)和病毒包裝的AAV2衣殼蛋白變體序列，進一步篩選出轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提高的多肽還需要本領(lǐng)域技術(shù)人員付出大量的勞動。故權(quán)利要求1得不到說明書的支持。

最終申請人將權(quán)利要求中的修飾蛋白進一步限定為本申請實施例驗證的具體蛋白，認為修改后的權(quán)利要求可以得到說明書的支持。合議組認為所指出的權(quán)利要求得不到說明書支持的缺陷已不存在，撤銷了駁回決定。

結(jié)語

目前，對于用“包含”或“具有”限定生物序列，通常認為其屬于開放式限定，意味著在所述序列的兩端還可以添加任意數(shù)量、種類的氨基酸或核苷酸殘基，認為這一限定方式得不到說明書的支持。然而，本案權(quán)利要求1是用“包含”限定氨基酸位點，而非氨基酸序列，故在審查實踐中，對上述撰寫方式存在兩種解讀，一種是認為“包含”意味著所限定的蛋白中其他位置的氨基酸殘基是不確定的，一種是認為“包含”意味著僅包含所限定的具體位點的氨基酸殘基突變，其他位置的氨基酸殘基是確定的。本案駁回決定、前置審查意見和復(fù)審?fù)ㄖ獣J為以“包含”的開放式限定其上帶有的突變位點，實質(zhì)上涵蓋了除實施例驗證的具有相對于對應(yīng)野生型AAV載體轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提高以外的其他修飾的AAV載體的技術(shù)方案。以上案例可對判定“包含”限定突變位點的技術(shù)方案能否得到說明書的支持提供一定的借鑒和參考。

此外，對于多數(shù)經(jīng)突變改造功能活性得以改善的蛋白而言，維持特定的結(jié)構(gòu)功能域?qū)τ谄湔９δ艿陌l(fā)揮是重要的，本領(lǐng)域技術(shù)人員難以預(yù)料不同突變位點的組合會導(dǎo)致多肽的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生怎樣的變化，以及對蛋白的最終功能會產(chǎn)生怎樣的影響，在此基礎(chǔ)上進一步篩選出具有改善功能的蛋白還需要本領(lǐng)域技術(shù)人員付出大量的勞動，在未對蛋白的結(jié)構(gòu)信息進行清楚限定的情況下不能得到說明書的支持。

參考文獻

[1]中華人民共和國國家知識產(chǎn)權(quán)局.專利審查指南[M].北京：知識產(chǎn)權(quán)出版社，2010.