廣西德保黃精炮制前后的液相圖譜變化研究

趙秋華 黃元河 潘喬丹 陸海峰

右江民族醫(yī)學(xué)院,廣西 百色 533000

黃精為百合科植物滇黃精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.黃精PolygonatumsibiricumRed.或多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根莖。按形狀不同，習(xí)稱“大黃精”“雞頭黃精”“姜形黃精”，其性平、味甘，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎的功效[1]。近年來有關(guān)黃精化學(xué)成分研究報(bào)道日趨增多，至今已確定其中主要含有多糖、低聚糖、皂苷、氨基酸等活性成分，其中薯蕷皂苷是黃精屬植物主要成分之一[2]。現(xiàn)代藥理研究表明，黃精具有抗氧化和抗衰老、改善學(xué)習(xí)記憶、降血糖、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗菌抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[3]。蘇仕林[4]對德保黃精進(jìn)行植物學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)由于山地開發(fā)，重采輕護(hù)，黃精資源銳減，而且生產(chǎn)周期長，產(chǎn)量非常有限。本研究通過對比德保黃精炮制后的液相圖譜變化分析，以期為德保黃精藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)一步開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20A高效液相色譜儀，Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm)，sartorius CPA64分析天平，HC-5002S數(shù)控型臺(tái)式超聲波清洗機(jī)，超純水機(jī)。

1.2 材料 黃精藥材(購于靖西端午藥市，采自德保縣)，經(jīng)右江民族醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院黃元河副教授鑒定為百合科植物黃精的根莖。黃酒(紹興女兒紅釀酒有限公司，酒精度%vol：14.0)，薯蕷皂苷元(111539-200001)，購于中國食品藥品檢定研究所。色譜級(jí)乙腈(MACKLIN),色譜級(jí)甲醇(TEDIA),其余試劑為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

2.1.1 色譜條件 島津LC-20A高效液相色譜儀，Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)，以乙腈和水為流動(dòng)相，采用二元梯度洗脫(梯度洗脫程序見表1)，流速1 mL/min，檢測波長200 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20 μL。

表1 梯度洗脫程序

2.2 對照品溶液的制備 精確稱取薯蕷皂苷元適量，加甲醇溶解后配制成0.18 mg/mL的對照品溶液，0.22 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 生品黃精 將黃精除去雜質(zhì)，洗凈，略潤，切厚片，干燥，得生品黃精。將黃精藥材粉碎成粗粉，精確稱取黃精粉末2 g，加入70%乙醇40 mL，超聲提取2次，每次30 min，抽濾，合并濾液，旋干，浸膏加10 mL甲醇定容，放置過夜，0.22 μm微孔濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.3.2 酒黃精 將生品黃精，加入黃酒燜潤(每100 g黃精，用黃酒20 g)， 高壓鍋蒸制2 h，取出稍晾，干燥。將酒黃精粉碎成粗粉，精確稱取黃精粉末2 g，加入70%乙醇40 mL，超聲提取2次，每次30 min，抽濾，合并濾液，旋干，浸膏加10 mL甲醇定容，放置過夜，0.22 μm微孔濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度試驗(yàn) 精密吸取薯蕷皂苷元對照品10 μL，按照2.1.1色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次進(jìn)行測定，測得峰面積RSD為0.46%，表明儀器精密度良好。

2.4.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取生品黃精5份，制備成供試品溶液，按照2.1.1色譜條件，重復(fù)進(jìn)行測定，計(jì)算RSD值，測得峰面積RSD為1.85%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取生品黃精藥材制備成供試品溶液，按照2.1.1色譜條件，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h進(jìn)行測定，測得峰面積RSD為1.74%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 結(jié)果 將德保黃精樣品分別按2.3方法制成供試品溶液，按色譜條件測定。通過色譜圖結(jié)果分析比較，生品黃精檢測出19個(gè)色譜峰，其中3號(hào)為薯蕷皂苷元；酒黃精檢測出20個(gè)色譜峰，其中8號(hào)為薯蕷皂苷元。通過色譜圖綜合對比(色譜圖1 為薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品，在條件探索中發(fā)現(xiàn)其在20 min左右出峰，后面無色譜峰，故保留時(shí)間設(shè)置為30 min，樣品保留時(shí)間設(shè)置為65 min)，生品黃精及酒黃精均含有薯蕷皂苷元，但是炮制后薯蕷皂苷元含量下降，且酒黃精產(chǎn)生了新的色譜峰，生品黃精有的色譜峰在酒黃精中也未檢測到。如圖1所示，生品黃精的7、13、16、17號(hào)峰在酒黃精中未檢測到，生品黃精的3、11號(hào)峰的峰面積明顯變小；另外，酒黃精中產(chǎn)生2、4、5、6、7號(hào)新的色譜峰。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推斷德保黃精炮制前后，化學(xué)成分發(fā)生了變化，有待進(jìn)一步研究，以確定消失或新產(chǎn)生的是何化學(xué)成分。

圖1 薯蕷皂苷元對照品及德保黃精色譜圖

3 討論

3.1 黃精的炮制 黃精生用刺激咽喉，接觸過生黃精或其汁液的皮膚會(huì)產(chǎn)生瘙癢感，故須經(jīng)過炮制后才可用于臨床[5]。有文獻(xiàn)報(bào)道高壓蒸制酒黃精的外觀色澤、質(zhì)地、氣味、口感等性狀與常壓蒸制酒黃精無差異，可以達(dá)到傳統(tǒng)蒸制的要求，而且高壓蒸制酒黃精技術(shù)可顯著節(jié)省炮制時(shí)間，有效提高生產(chǎn)效率[6]，因此本次實(shí)驗(yàn)采取高壓蒸制的方法。通過對比黃精炮制前后色譜圖，推斷黃精炮制后原有的一些色譜峰消失與降低刺激性相關(guān)。

3.2 黃精的液相圖譜變化 黃精藥材在廣西德保以野生為主，采挖后大多泡酒服用。薯蕷皂苷元藥理作用明顯，具有抗腫瘤、抗心血管系統(tǒng)及雌激素樣作用，是合成甾體激素類藥物的前體[7]，被認(rèn)為是黃精發(fā)揮作用的真正有效成分[8]。通過對比生品黃精與酒黃精色譜圖，炮制后薯蕷皂苷元含量下降。有研究認(rèn)為[9]，薯蕷皂苷元是其它許多皂苷元的前體，而通過炮制是否將使其轉(zhuǎn)化為其它皂苷元而使炮制品中薯蕷皂苷元含量下降? 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，此推斷可能性較大，黃精炮制后在降低刺激性副作用的同時(shí)，能增強(qiáng)藥物補(bǔ)脾潤肺、益腎的作用。黃精炮制后藥效增強(qiáng)是否還與黃精中其它成分的含量變化有關(guān)，則有待后續(xù)研究確定。

3.3 黃精的質(zhì)量評(píng)價(jià) 在本實(shí)驗(yàn)中，對比等度洗脫和梯度洗脫的色譜圖，黃精炮制后黃精的色譜峰有變化，表明薯蕷皂苷元含量并不能作為衡量黃精質(zhì)量的唯一標(biāo)準(zhǔn)，黃精中尚有多糖、人參皂苷等多種活性成分。黨艷妮等[10]通過中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(tái)，發(fā)現(xiàn)黃精中已鑒定的39個(gè)化合物，其中18個(gè)具有良好的藥物代謝性質(zhì)的化合物，黃精可通過多成分、多靶點(diǎn)及多通絡(luò)的作用機(jī)制發(fā)揮其抗腫瘤活性。因此對德保黃精進(jìn)行化學(xué)成分檢測和多成分綜合分析，可為德保黃精藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)一步開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。