禿瘡花外用噴劑制劑的篩選試驗(yàn)

張莉敏，常攀峰，馬志宏，孫春香，茍想珍，黨 巖

(甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，甘肅 平?jīng)?744000)

禿瘡花(俗稱紅荗草，勒馬回)是罌粟科(Papaveraceae)禿瘡花屬(Dicranostigma) 的植物，在我國(guó)主要分布于甘肅、西藏、青海、陜西和四川等地。據(jù)文獻(xiàn)記載：味苦、澀、性寒，涼，有小毒；有清熱解毒、消腫止痛、殺蟲(chóng)、治療扁桃體炎、結(jié)核、疥癬、外傷、羊口瘡等疾病。從上世紀(jì)80年代開(kāi)始，我國(guó)許多研究者對(duì)禿瘡花的化學(xué)成分和禿瘡花的藥理作用進(jìn)行了研究。1980年李鎮(zhèn)從禿瘡花中分離出異紫堇堿；1981年暢行若等從禿瘡花中提取了4種結(jié)晶，經(jīng)鑒定分別為：異紫堇堿、原阿片堿、紫堇堿、二十九碳醇；盧賢昭等研究表明，禿瘡花對(duì)結(jié)核病有良好的治愈作用，治愈療效79.5%以上. 陳正山、龔艷妮等的研究證明禿瘡花對(duì)動(dòng)物免疫系統(tǒng)和腫瘤均有作用。

以甘肅隴東特色藥用植物禿瘡花(俗稱紅荗草，勒馬回)為藥材，研制具有抗菌消炎及抗病毒的獸醫(yī)臨床制劑，項(xiàng)目以禿瘡花制劑生物學(xué)功能為指標(biāo)，用物理化學(xué)提純法、細(xì)菌計(jì)數(shù)法和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)等對(duì)制劑進(jìn)行篩選，并開(kāi)展了禿瘡花制劑工藝、藥效學(xué)、藥物代謝動(dòng)力學(xué)以及化學(xué)成分的研究工作和臨床應(yīng)用試驗(yàn)。本文僅就禿瘡花外用噴劑的篩選實(shí)驗(yàn)進(jìn)行論述，其它實(shí)驗(yàn)部分另文發(fā)表。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 電熱培養(yǎng)箱 、電子分析天平等使用甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所中心實(shí)驗(yàn)室儀器。

1.1.2 菌株 副傷寒沙門氏菌為甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)室保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株 。

1.1.3 藥材 禿瘡花采自于甘肅省平?jīng)鍪?，由中?guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所天然藥物實(shí)驗(yàn)室鑒定；連翹、魚(yú)腥草、黃芩、黃柏、金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)采購(gòu)于甘肅省醫(yī)藥公司，由中國(guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所天然藥物實(shí)驗(yàn)室鑒定。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑 牛肉膏 、葡萄糖、蛋白胨、磷酸氫二鉀 、瓊脂 、酚紅 、N aO H 、N aCl購(gòu)自于上海生工 ，其余試劑均為國(guó)產(chǎn)或進(jìn)口分析純 ；禿瘡花唇膚康噴劑B液由甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所制備。

1.2 方法

1.2.1 連翹、魚(yú)腥草、黃芩和黃柏交互作用篩選試驗(yàn) 以正交實(shí)驗(yàn)表L16(45)為水平因素組合進(jìn)行不同制劑配制，將實(shí)驗(yàn)用的副傷寒沙門氏菌株進(jìn)行純化后，接種于THB營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃或24℃培養(yǎng)24 h后，分別用平皿計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)配制成10 000 cfu/mL的菌株懸液；將菌株懸液100 μL,分別加入6 mL各制劑與THB營(yíng)養(yǎng)肉湯按1∶1的比例制備的培養(yǎng)肉湯中,37℃培養(yǎng)16 h后用平皿計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)。最后計(jì)算抑制率。

1.2.2 金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)交互作用篩選試驗(yàn) 在連翹、魚(yú)腥草、黃芩和黃柏交互作用實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以連翹50 g、魚(yú)腥草25 g、黃芩37.5 g和黃柏37.5 g為基礎(chǔ)藥，用上面的正交實(shí)驗(yàn)表L16(45)為水平因素組合進(jìn)行不同制劑配制，將實(shí)驗(yàn)用的副傷寒沙門氏菌株進(jìn)行純化后，接種于THB營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃或24℃培養(yǎng)24 h后，分別用平皿計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)配制成10 000 cfu/mL的菌株懸液；將菌株懸液100 μL,分別加入6 mL各制劑與THB營(yíng)養(yǎng)肉湯按1∶1的比例制備的培養(yǎng)肉湯中,37℃培養(yǎng)16 h后用平皿計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)。最后計(jì)算抑制率。

1.2.3 禿瘡花噴劑相互作用篩選試驗(yàn) 以禿瘡花唇膚康噴劑相互作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表中的配方，進(jìn)行不同配方制劑配制，將不同配方的藥物配成400 mL的水溶液用于實(shí)驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)用的副傷寒沙門氏菌株進(jìn)行純化后，接種于THB營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃或24℃培養(yǎng)24 h后，分別用平皿計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)配制成10 000 cfu/mL的菌株懸液；將菌株懸液100 μL,分別加入6 mL各制劑與THB營(yíng)養(yǎng)肉湯按1∶1的比例制備的培養(yǎng)肉湯中,37℃培養(yǎng)16h后用平皿計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)。最后計(jì)算抑制率。

2 結(jié)果

2.1 連翹、魚(yú)腥草、黃芩和黃柏交互作用篩選試驗(yàn)結(jié)果

從連翹、魚(yú)腥草、黃芩和黃柏交互作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出：從因素上講，連翹>黃芩>黃柏>魚(yú)腥草；從水平上講，連翹的第4水平最好，黃芩的第2水平最好，黃柏的第3水平最好，魚(yú)腥草第3水平最好。根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)的原則，我們選擇連翹50g、魚(yú)腥草25g、黃芩37.5g和黃柏37.5g為進(jìn)一步進(jìn)行禿瘡花唇膚康噴劑A液篩選的比例基礎(chǔ)。

表1 連翹、魚(yú)腥草、黃芩和黃柏交互作用水平因素表 g

表2 連翹、魚(yú)腥草、黃芩和黃柏交互作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.2 金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)交互作用篩選試驗(yàn)結(jié)果

從金銀花復(fù)方中藥外用制劑中的金銀花、板藍(lán)根、甘草和蒼術(shù)交互作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出：從因素上講，金銀花>大青葉>甘草>蒼術(shù)；從水平上講，金銀花的第4水平最好，大青葉的第4水平最好，甘草的第3水平最好，蒼術(shù)第3水平最好但與第2水平差別不大。根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)的原則，結(jié)合連翹、魚(yú)腥草、黃芩、黃柏交互作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果和金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)交互作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們篩選出：連翹3-4份、魚(yú)腥草2-3份、黃芩3-4份、黃柏3-4份、金銀花3-4份、大青葉3-4份、甘草2-3份和蒼術(shù)2-3份為禿瘡花唇膚康噴劑A液的基礎(chǔ)比例配方。

表3 金銀花、大青葉、甘草和蒼術(shù)交互作用水平因素表

表4 禿瘡花唇膚康噴劑A液交互作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.3 禿瘡花噴劑相互作用篩選試驗(yàn)結(jié)果

為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果明顯，本實(shí)驗(yàn)將應(yīng)用濃度進(jìn)行了2倍的稀釋，雖然抑菌率低但能更清楚地看出各配方的抑菌率之間的差異。從禿瘡花唇膚康噴劑相互作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，禿瘡花唇膚康噴劑(禿瘡花唇膚康噴劑A液+禿瘡花唇膚康噴劑B液)抑制副傷寒沙門氏菌的效果比禿瘡花唇膚康噴劑B液和禿瘡花唇膚康噴劑A液好；禿瘡花唇膚康噴劑配方4抑制副傷寒沙門氏菌的作用最好，因此將配方4篩選為禿瘡花唇膚康噴劑的基礎(chǔ)比例配方。

表5 禿瘡花唇膚康噴劑相互作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

3 討論

目前在我國(guó)綠色環(huán)保戰(zhàn)略實(shí)施的背景下，社會(huì)廣泛關(guān)注食品安全，呼喚無(wú)公害產(chǎn)品及綠色畜產(chǎn)品生產(chǎn)，尤其是應(yīng)用于食源性動(dòng)物藥品迅速轉(zhuǎn)向低毒、無(wú)殘留、高效等方面發(fā)展。本項(xiàng)目以傳統(tǒng)中草藥特有的低毒易代謝的藥物成分解決動(dòng)物外用消炎藥物的環(huán)境污染問(wèn)題；以傳統(tǒng)中草藥特有的抗微生物的成分及作用的多樣性和協(xié)同性解決病原微生物的藥物耐藥性問(wèn)題；以傳統(tǒng)中草藥特有的藥物有效成分的安全性和對(duì)動(dòng)物機(jī)體外損組織的免疫調(diào)節(jié)功能解決動(dòng)物皮膚損傷組織細(xì)胞的快速修復(fù)生長(zhǎng)問(wèn)題。

金銀花、蒼術(shù)、連翹、黃芩、黃柏、大青葉、魚(yú)腥草和甘草多是清熱解毒類中草藥，這些中草藥中多含有有機(jī)酸、生物堿、苷類或甙類、多糖、黃酮、甾醇、揮發(fā)油和微量元素等，均有抗微生物和抗炎的作用，同時(shí)這些中草藥之間有較好的協(xié)同作用。上述這些中草藥不僅具有良好抗微生物作用，而且有調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體免疫系統(tǒng)的機(jī)能從而促使動(dòng)物機(jī)體的傷口愈合。中草藥中的成分易于分解代謝，對(duì)人類的綠色環(huán)保和公共衛(wèi)生有重要的意義。試驗(yàn)結(jié)果表明，金銀花、蒼術(shù)、連翹、黃芩、黃柏、板藍(lán)根、魚(yú)腥草、甘草和禿瘡花制劑共用有良好的抗微生物、抗炎和促進(jìn)傷口愈合協(xié)同作用。我所多年從事禿瘡花等中草藥的研究工作，在研制禿瘡花沖劑、針劑、擦劑和口服膠囊的基礎(chǔ)上，研制禿瘡花唇膚康噴劑，以解決獸醫(yī)臨床操作困難，使治療在確保療效的基礎(chǔ)上變的省時(shí)省力。

按中草藥君臣佐使的復(fù)方原則，禿瘡花唇膚康噴劑用清熱解毒抗微生物類藥禿瘡花為君；以清熱解毒抗微生物類藥金銀花、連翹、黃芩為臣，使禿瘡花唇膚康噴劑的解毒抗微生物作用范圍增大和作用效果增強(qiáng)；以清熱解毒抗微生物類藥黃柏、魚(yú)腥草為臣使禿瘡花唇膚康噴劑的抗炎癥抗?jié)兗翱刮⑸镒饔眯Ч鰪?qiáng)；以利濕消炎類藥蒼術(shù)為佐，與黃柏等協(xié)同增強(qiáng)復(fù)方的利濕抑酸抑瘍及保護(hù)粘膜作用，以溫性清熱解毒類藥甘草為使調(diào)和君臣佐藥，使復(fù)方的抗炎康復(fù)作用效果增強(qiáng)及利于藥物有效成分到達(dá)病位和保護(hù)粘膜。