金丹平炎膠囊對慢性盆腔炎模型大鼠輸卵管通暢率及炎性因子表達(dá)的影響

王英軍，孫英蓮

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長春 130012）

慢性盆腔炎（chronic pelvic inflammatory disease）是女性常見的生殖道感染性疾病，其臨床表現(xiàn)有瘢痕粘連、下腹部疼痛、盆腔充血、低熱、常合并不孕和異位妊娠等疾病，嚴(yán)重影響女性的生殖健康，增加患者的心理負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此慢性盆腔炎的防治已日益為人們所重視[1,2]。金丹平炎膠囊是由金銀花、黃芪、丹參、牡丹皮、魚腥草、醋延胡索、川楝子和甘草等8味中藥組成的復(fù)方制劑，具有清熱解毒、益氣化瘀之功效，用于慢性盆腔炎引起的下腹部墜脹疼痛及腰骶部酸痛、月經(jīng)不調(diào)和帶下增多等。以往治療盆腔炎常規(guī)以益氣、活血化瘀治療為主，該處方在活血化瘀藥物中應(yīng)用了金銀花，采用清熱解毒法治療慢性盆腔炎，因此，我們希望通過本次研究觀察金丹平炎膠囊對慢性盆腔炎模型大鼠子宮輸卵管通暢情況及炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的影響，進(jìn)而探討金丹平炎膠囊對慢性盆腔炎大鼠的干預(yù)作用和治療作用機(jī)制，為臨床治療慢性盆腔炎提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 金丹平炎膠囊是從金銀花、魚腥草和丹參等8味藥材中分離提取而制成的膠囊劑，由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室提供，內(nèi)容物為棕黃色顆粒，每克相當(dāng)于生藥3.25 g。臨用時以蒸餾水配成所需濃度。婦炎康片由吉林省中研藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字Z22020211。

1.1.2 動物 雌性Wistar大鼠，體重200~240 g，吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號SCXK-（吉）2007-0003。

1.1.3 試劑 苯酚，天津市塘沽區(qū)新發(fā)化工有限公司生產(chǎn)，批號：20120320。阿拉伯樹膠粉，上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站經(jīng)銷，批號：P11012。

1.1.4 儀器 T-1000型電子天平，常熟雙杰測試儀器廠產(chǎn)品；高速低溫離心機(jī)（D3024R），美國賽洛捷克（SCILOGEX）公司生產(chǎn)；ST-360酶標(biāo)儀，上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 建立慢性盆腔炎動物模型 參照文獻(xiàn)[3]，應(yīng)用苯酚膠漿致炎法，取體重220~240 g雌性大鼠60只，用乙醚麻醉，常規(guī)消毒腹部皮膚，于下腹部正中切口約2 cm，暴露雙側(cè)輸卵管，其中10只僅進(jìn)行開腹和關(guān)腹手術(shù)，未進(jìn)行子宮處理。剩余50只大鼠用0.25 mL注射器自子宮分叉處向兩側(cè)卵巢方向緩慢注入25%的苯酚膠漿0.06 mL（液化苯酚5 mL、阿拉伯膠粉1 g、甘油4 mL加蒸餾水至20 mL）造模，注畢分層關(guān)腹，消毒術(shù)區(qū)。

1.2.2 分組及給藥 于造模24 h后將60只大鼠隨機(jī)分成6組，分別為模型對照組、陽性對照組（婦炎康1 g/kg）、金丹平炎膠囊高（1.0 g/kg）、中（0.5 g/kg）、低（0.25 g/kg）3個劑量組，給藥體積均為10 mL/kg，假手術(shù)10只大鼠為正常對照組。每日1次，連續(xù)灌胃給藥21d，假手術(shù)對照組、模型對照組灌服同體積水10 mL/kg。

1.2.3 觀察指標(biāo)及測定 末次給藥后1 h，10%水和氯醛腹腔注射麻醉大鼠，麻醉后腹主動脈采血，3 000 r/min離心15 min，嚴(yán)格按照操作說明書用ELISA法進(jìn)行IL-6、TNF-及suPAR濃度測定，采血后處死大鼠，取出子宮，向子宮兩側(cè)注入美藍(lán)液，檢查子宮輸卵管通暢情況，計算通暢率，結(jié)果見表1。

1.2.4 統(tǒng)計方法 用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。統(tǒng)計計量資料用t檢驗(yàn)，組間比較用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 對苯酚膠漿所致慢性盆腔炎模型大鼠輸卵管通暢作用的影響

由表1結(jié)果可見，婦炎康片1 g/kg組和金丹平炎膠囊1、0.5 g/kg組均能明顯提高輸卵管炎癥模型大鼠子宮輸卵管的通暢率，與模型組比較具有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01）。

表1 金丹平炎膠囊對慢性盆腔炎模型大鼠輸卵管通暢作用的影響Table 1 The effect of Jindanpingyan capsule on tubal patency in rats with the chronic pelvic inflammatory disease

2.2 對慢性盆腔炎模型大鼠血清中IL-6、TNF-及suPAR濃度的影響

表2 金丹平炎膠囊對慢性盆腔炎模型大鼠血清中IL-6、TNF-及suPAR濃度的影響Table 2 The effect of Jindanpingyan capsule on the serum IL-6、TNF-and suPARconcentration in rats with a chronic pelvic inflammation

注：n=10，模型組與對照組比較△△P＜0.01；給藥組與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。Note:n=10,The model group compared with the control group△△P＜0.01;The comparison between the treatment group and the model group*P＜0.05,**P＜0.01.

組別Group suPAR（ng/mL）假手術(shù)組 Shamo peration group 31.5±3.67 12.01±2.34 0.24±0.037模型組 Model group 102.5±8.27△△ 26.3±6.60△△ 0.51±0.052△△婦炎康片 Fuyankang tablet 1 88.7±11.31** 20.3±3.99* 0.42±0.095*劑量（g/kg）Dose IL-6（pg/mL）TNF-（pg/mL）79.8±8.65** 17.7±2.72** 0.38±0.063**金丹平炎膠囊 Jindanpingyan capsule 0.5 91.2±7.32** 19.7±2.92* 0.43±0.08*0.25 95.3±9.13 21.5±3.32 0.46±0.055 1

3 討論

慢性盆腔炎是女性內(nèi)生殖器及其周圍結(jié)締組織和盆腔腹膜發(fā)生的炎癥，是盆腔感染后期持續(xù)存在的慢性炎癥狀態(tài)，以發(fā)病部位的疼痛、腫脹、粘連及增生為主要表現(xiàn)。近年來其發(fā)病率呈逐漸上升的趨勢，嚴(yán)重影響婦女的身心健康，降低生活質(zhì)量，故探討該病的發(fā)病機(jī)理及治療方法，防止其反復(fù)發(fā)作，已成為臨床婦科研究的重點(diǎn)[4,5]。而采用與人類慢性盆腔炎發(fā)病特征相似、接近發(fā)病機(jī)理的動物模型更為重要。苯酚膠漿致炎法造成的子宮增粗、紅腫、充血及與周圍組織粘連等一系列炎性病變與臨床盆腔炎性疾病相似，方法簡單易掌握，造模成功率高，現(xiàn)已成為探討盆腔炎發(fā)病機(jī)制廣為應(yīng)用的動物模型。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，慢性盆腔炎主要是由沙眼衣原體和淋病奈瑟菌感染所致，慢性階段的病理改變?yōu)榧毙耘枨谎走z留的病理改變，并無病原體的存在，且與炎癥因子等的異常改變有關(guān)[6,7]。白介素6（IL-6）是炎癥起始階段的重要致炎因子，是典型的具有炎癥介導(dǎo)活性的細(xì)胞因子，具有多種生物學(xué)活性，能夠傳遞信息，激活與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的增殖與分化，在炎癥反應(yīng)中起重要作用[8]。TNF-是一種參與全身炎癥的細(xì)胞因子，它在免疫調(diào)控、感染與炎癥反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用[9]，是目前認(rèn)為致纖維化的重要細(xì)胞因子[10]。本試驗(yàn)通過對苯酚膠漿所致慢性盆腔炎模型大鼠的研究結(jié)果顯示，模型組大鼠血清中TNF-濃度明顯增高，而TNF-的高表達(dá)促進(jìn)了炎癥因子IL-6的表達(dá)，從而加劇炎癥反應(yīng)，造成盆腔局部粘連和組織充血。經(jīng)治療后，金丹平炎膠囊高、中劑量組及婦炎康片組能夠顯著提高模型大鼠子宮輸卵管通暢率，降低大鼠血清中IL-6、TNF-的濃度且具有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01），兩組比較，金丹平炎膠囊高劑量組略好于婦炎康片。提示金丹平炎膠囊及婦炎康片可能是通過對抗TNF-的表達(dá)抑制炎癥因子IL-6的釋放，調(diào)節(jié)黏附分子的表達(dá)，降低炎性細(xì)胞在局部組織的過度聚集和浸潤，從而抑制慢性炎性粘連形成及抗感染作用，促進(jìn)盆腔組織的修復(fù)。

可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體（suPAR）是近年來發(fā)現(xiàn)的新型炎癥標(biāo)志物，可以與多種配體發(fā)生反應(yīng)，參與細(xì)胞遷移、分化、趨化因子受體調(diào)節(jié)和信號傳遞等[11,12]。suPAR的濃度能反應(yīng)機(jī)體免疫系統(tǒng)的活化水平[13-15]，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，金丹平炎膠囊及婦炎康片均可明顯降低由苯酚膠漿所致慢性盆腔炎模型大鼠血清中suPAR的濃度，具有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01），兩組比較，金丹平炎膠囊高劑量組略優(yōu)于婦炎康片但無統(tǒng)計學(xué)意義，表明金丹平炎膠囊可能是通過參與細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提高機(jī)體免疫活化水平，從而減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng)進(jìn)展，促進(jìn)組織恢復(fù)，起到治療作用。

綜上所述，通過對苯酚膠漿所致慢性盆腔炎模型大鼠的治療，提示金丹平炎膠囊可能是通過抑制IL-6和TNF-釋放，降低suPAR的濃度，提高機(jī)體免疫力，從而減輕炎癥組織粘連，抑制炎癥的發(fā)展。而suPAR在慢性盆腔炎疾病中研究較少，其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。