絲蘭粉對三角魴生長、非特異性免疫及抗氧化指標的影響

■張 麗 蔣文杰 徐嘉茗 馬恒甲 王文基 王秀娟 吳玉波*

(1.臺州學院生命科學學院，浙江臺州 318000；2.杭州市農業(yè)科學研究院，浙江杭州 310024)

三角魴(Megalobrama terminalis，Richardson 1846)是一種較大型的淡水雜食性魚類，由于其營養(yǎng)較佳、肉質鮮嫩，已成為我國淡水養(yǎng)殖的主要品種之一。目前，相關學者已在三角魴養(yǎng)殖技術[1]、苗種培育[2]、營養(yǎng)飼料[3-4]等方面取得較大進展，使我國三角魴產業(yè)規(guī)模不斷發(fā)展壯大，養(yǎng)殖潛力巨大。然而，人工集約化和規(guī)?；B(yǎng)殖導致三角魴生長性能減緩、飼料利用效率不高、免疫力下降等現象，進而導致三角魴養(yǎng)殖的經濟效益降低。研究表明，采用適宜的營養(yǎng)添加劑既能促進養(yǎng)殖魚類的健康生長，又能提高魚產量。

絲蘭粉是以絲蘭為原料，經干燥和研磨得到的固體粉末，主要成分含有絲蘭酚、皂苷、白藜蘆醇和多糖等[5]。研究發(fā)現，在動物養(yǎng)殖過程中，添加絲蘭粉不僅能促進養(yǎng)殖動物的健康生長，也能吸附養(yǎng)殖環(huán)境中的氨、硫化氫等氣體，降低有毒有害氣體的排放，進而促進養(yǎng)殖業(yè)的綠色發(fā)展[6-7]。因此，絲蘭粉被廣泛用于雞、豬等畜禽養(yǎng)殖動物的飼料中[8-9]。目前，有關絲蘭粉在水產養(yǎng)殖中的研究報道相對較少，僅見于羅非魚[10-11]、對蝦[12]、大菱鲆[13]等少數水產養(yǎng)殖動物中。絲蘭粉作為一種新的環(huán)保型植物添加劑，對水產養(yǎng)殖動物生長和健康影響的報道尚不多見。為此，本研究分析了基礎飼料中添加不同含量的絲蘭粉對三角魴幼魚生長、非特異性免疫以及抗氧化指標的影響，全面評估絲蘭粉在水產養(yǎng)殖中的應用效能，旨在為三角魴的健康養(yǎng)殖篩選適宜的飼料添加劑。

1 材料與方法

1.1 實驗原料、實驗飼料與實驗魚

飼料原料主要包括雞肉粉、魚粉、去皮豆粕、棉粕、菜粕、次粉、面粉和魚油等，均由浙江德清鴻利飼料有限公司提供。維生素和礦物質預混物購自帝斯曼公司。絲蘭粉由西安綠天生物科技有限公司提供。根據馬恒甲等[3]設計三角魴實驗基礎飼料（蛋白質33.3%、脂肪7.9%、灰分7.4%和磷1.4%），在基礎飼料配方中添加0（S0）、0.05%（S1）、0.15%（S2）、0.25%（S3）、0.35%（S4）和0.45%（S5）的絲蘭粉，配制成6種等氮等能的三角魴實驗飼料（見表1）。三角魴幼魚由杭州市農業(yè)科學研究院提供。飼養(yǎng)實驗在室外微流水養(yǎng)殖系統中進行（共18個養(yǎng)殖桶，每個養(yǎng)殖桶直徑80 cm，高70 cm，容積350 L）。試驗前，挑選360尾規(guī)格均勻的幼魚放于微流水養(yǎng)殖桶系統中，每個養(yǎng)殖桶放入三角魴幼魚各20尾，暫養(yǎng)7 d。幼魚暫養(yǎng)期間，每天8:00和16:00以對照組飼料S0飽食投喂實驗魚。

表1 三角魴實驗飼料配方(%)

1.2 實驗過程

實驗開始前，首先將暫養(yǎng)的三角魴幼魚停食24 h，每次隨機取15尾幼魚，群體稱重后隨機放入一個養(yǎng)殖桶中。三角魴幼魚的初始體重為（16.0±0.8）g。每個實驗飼料設置3個重復，共用18個養(yǎng)殖桶。飼料投喂的實驗周期為56 d，每天8:00和16:00分別以實驗飼料（S0、S1、S2、S3、S4和S5）飽食投喂三角魴幼魚2次。在微流水養(yǎng)殖系統中連續(xù)充氣（溶解氧＞5.0 mg/L），記錄水溫變化（27.8～33.0℃），光照周期為白天14 h光照和晚上10 h黑暗。養(yǎng)殖實驗結束后，所有實驗魚饑餓24 h，然后將每個養(yǎng)殖桶中的魚依次捕出、計數并群體稱重。從每個養(yǎng)殖桶中取3尾魚，靜脈取血，離心，取上清，然后解剖實驗魚，取肝臟，保存于-20℃下作為分析樣品。

1.3 化學分析

肝臟樣品研磨后離心的上清液和尾靜脈取血離心后的上清液，采用分光光度計比濁法測定溶菌酶活性；堿性磷酸酶和酸性磷酸酶分解磷酸苯二鈉，產生游離酚和磷酸，酚在堿性溶液中與4-氨基安替吡啉作用經鐵氰化鉀氧化生成紅色醌衍生物，根據紅色深淺測定其酶活力的高低，波長為520 nm。采用賴氏法檢測谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶活性；在酸性條件下抗氧化物質可以還原Fe3+-TPTZ產生藍色的Fe2+-TPTZ，在593 nm處讀取吸光度，測定總抗氧化能力(T-AOC)；采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性；采用TBA法檢測丙二醛(MDA)含量。檢測用試劑盒均由南京建成生物科技有限公司提供，檢測步驟按照試劑盒說明書進行。

1.4 數據計算

終末體重（g）=終末魚總重/終末魚尾數

體增重（g）=終末魚總重/終末魚尾數-初始魚總重/初始魚尾數

攝食率（%/d）=100×飼料總投喂量/[（初始魚總重+終末魚總重）/2×試驗天數]

飼料系數=飼料總投喂量/（終末魚總重-初始魚總重）

1.5 統計分析

利用SPSS軟件（版本21.0）進行統計分析。采用單因素方差分析（one-way ANOVA）方法檢驗添加絲蘭粉對成活率、終末體重、體增重、攝食率、飼料系數、肝臟和血清生理生化指標（溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、超氧化物歧化酶、總抗氧化能力、丙二醛）的影響，采用Duncan's多重比較方法檢驗處理間差異，當P＜0.05為差異顯著性水平。

2 結果與分析

2.1 絲蘭粉對三角魴幼魚生長和飼料系數的影響（見表2）

表2 絲蘭粉對三角魴幼魚生長及飼料系數的影響

由表2可知，各實驗組的成活率均大于96%。隨著絲蘭粉添加水平的增加，實驗魚的終末體重和體增重呈現先上升后下降的趨勢。實驗組S3的終末體重和體增重最高，而對照組S0和實驗組S5的終末體重和體增重最低。實驗組S2的攝食率顯著高于對照組S0，而實驗組S1、S3、S4和S5的攝食率與對照組S0之間均無顯著差異，但有增大趨勢。與對照組S0相比，實驗組S2和S3的飼料系數顯著降低（P＜0.05），而實驗組S1、S4和S5的飼料系數與對照組S0之間均無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 絲蘭粉對三角魴肝臟和血清非特異性免疫的影響（見表3、表4）

表3 絲蘭粉對三角魴肝臟非特異性免疫的影響

表4 絲蘭粉添加水平對三角魴血清非特異性免疫的影響

由表3可知，與對照組S0相比，實驗組S1、S2、S3、S4、S5之間肝臟的溶菌酶、堿性磷酸酶、谷丙轉氨酶活性均無顯著差異（P＞0.05）；實驗組S2、S4和S5的酸性磷酸酶活性顯著高于對照組S0（P＜0.05），而實驗組S1和S3的酸性磷酸酶活性與對照組S0之間無顯著差異（P＞0.05）；實驗組S2和S3的谷草轉氨酶活性顯著低于其他實驗組(P＜0.05)。

由表4可知，與對照組S0相比，實驗組S2和S3血清的溶菌酶活性顯著升高（P＜0.05）；隨著絲蘭粉添加水平的增加，實驗魚血清的堿性磷酸酶活力顯著升高（S1組除外）（P＜0.05）；實驗組S1的酸性磷酸酶顯著升高（P＜0.05），而實驗組S2和S3的酸性磷酸酶活性顯著降低（P＜0.05）。實驗組S2、S3和S4血清的谷丙轉氨酶活性顯著低于對照組S0和實驗組S1和S5（P＜0.05）；隨著絲蘭粉添加水平的增加，實驗魚血清的谷草轉氨酶活力呈現先下降后上升的趨勢（P＜0.05）。

2.3 絲蘭粉對三角魴幼魚血清抗氧化力的影響（見表5）

表5 絲蘭粉添加水平對三角魴血清抗氧化力的影響

由表5可知，實驗組S1、S2、S3、S4、S5血清中的SOD活性和T-AOC活性顯著高于對照組S0（P＜0.05）。隨著絲蘭粉添加水平的增加，實驗魚血清的MDA含量呈現先下降后上升的趨勢；對照組S0具有最高的MDA含量，而實驗組S3血清的MDA含量則最低（P＜0.05）。

3 討論

研究發(fā)現，飼料中添加500～1 000 mg/kg絲蘭提取物可以顯著改善斑點叉尾鮰幼魚的生長表現[14]。在羅非魚集約化養(yǎng)殖條件下，750 mg/kg的絲蘭提取物對其生長性能具有明顯的促進作用[15]。本研究中，隨著絲蘭粉添加水平的增加，三角魴幼魚終末體重呈現先增加后下降的趨勢，表明在三角魴基礎飼料中添加0.05%～0.35%的絲蘭粉可顯著增強其生長性能。實驗組S3具有最高的終末體重和體增重，表明在三角魴基礎飼料中添加絲蘭粉的最適劑量為0.25%。絲蘭提取物具有誘食作用，可改善飼料的適口性，并提高水產養(yǎng)殖動物的攝食率[16]。同時，絲蘭提取物也可顯著提高養(yǎng)殖動物對飼料的轉化效率[17]。這與本實驗的研究結果相一致。本實驗中，與對照組S0相比，實驗組S1、S2、S3和S4的攝食率相對較高，而其飼料系數相對較低，表明攝食量的增加及飼料利用效率的提高是三角魴幼魚體終末體重增加的主要原因。

肝功能生理生化指標的高低可反映肝臟的健康狀況。溶菌酶是一種抗菌酶，也是生物體內重要的非特異性免疫因子之一[18]。溶菌酶活力越大，則機體的抗菌能力越強。堿性磷酸酶在解毒代謝方面起著非常重要作用，它廣泛存在于動植物、微生物中[19]。酸性磷酸酶在生物體能量轉化、信號傳遞等過程起到重要作用，可以催化磷酸單酯水解和磷酸基因的轉移。谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶主要分布于機體的肝細胞內，但當機體的肝細胞受到損傷時，谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶則會被釋放入血液循環(huán)中，故可認為機體的轉氨酶活力與肝細胞受損程度呈現正相關性[20]。目前，有關養(yǎng)殖魚類生理生化指標含量的適宜范圍尚無明確的標準，大多數研究結果均采用對照組的數據為參照[9]。本實驗中，實驗組S1、S2、S3、S4、S5肝臟的溶菌酶、堿性磷酸酶、谷丙轉氨酶與對照組無顯著差異，表明絲蘭粉不會對三角魴肝臟的免疫功能造成損傷。而實驗組S2和S3肝臟的谷草轉氨酶顯著低于對照組S0和實驗組S1、S4、S5，表明0.15%～0.25%的絲蘭粉有助于三角魴肝功能的保護。此外，實驗組S2和S3血清的溶菌酶顯著高于其他實驗組，表明0.15%～0.25%的絲蘭粉能顯著提高機體血清的抗菌能力。隨著絲蘭粉添加水平的增加，三角魴血清的堿性磷酸酶活力顯著升高，表明絲蘭粉能顯著提高機體的解毒能力。本實驗中，實驗組S2、S3和S4血清中轉氨酶活性顯著低于對照組S0，表明基礎飼料中補充0.15%～0.35%的絲蘭粉可以使三角魴幼魚肝細胞受損后釋放到血液中的谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶含量變少，這有助于保護肝臟，使其免受損傷。絲蘭粉中富含甾類皂苷、多酚和多糖等生理活性物質，對機體有害菌具有強烈的抑制效果，同時具有免疫刺激活性，促進機體內抗體的生成，刺激機體免疫細胞增殖等功能[21]。由此可見，攝食絲蘭粉可以增強三角魴幼魚的非特異性免疫反應。

超氧化物歧化酶是機體重要的抗氧化酶之一，它能阻斷O2-·對正常細胞造成的損傷，還能及時修復自由基氧化后所產生的氧化損傷[22]。魚體生理的健康狀況可以用機體抗氧化功能來衡量，而抗氧化功能的綜合性指標則可以采用總抗氧化能力來反映[23]。本研究中，添加絲蘭粉后三角魴血清中SOD和T-AOC顯著高于對照組S0，表明絲蘭粉能明顯提高三角魴幼魚清除機體自由基的能力，使機體免受氧化損傷，這與王際英等[13]報道的飼料中添加適當的絲蘭提取物對大菱鲆幼魚抗氧化系統具有明顯增強效果的研究結果相一致。丙二醛具有很強的生物毒性，會破壞正常細胞的結構和功能，它也是機體脂質過氧化物主要成分[24]。本實驗中，實驗組S1、S2、S3、S4、S5血清中的丙二醛含量明顯低于對照組S0，表明絲蘭粉可以減少不飽和脂肪酸被自由基氧化所生成的脂質過氧化代謝產物，具有保護機體免受細胞膜氧化損傷的作用。可見，絲蘭粉對三角魴幼魚的抗氧化系統具有明顯的增強效果。

綜上所述，在三角魴的飼料中添加絲蘭粉可以提高魚體的終末體重和體增重，并增強飼料的適口性和利用效率。當飼料中添加0.15%～0.25%的絲蘭粉后，有利于三角魴幼魚的肝功能的保護，能夠提高血清溶菌酶、堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶活力和總抗氧化能力，并降低谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶活性和丙二醛的含量。