浙江省景寧陸封型香魚卵巢發(fā)育的組織學(xué)

姚子亮 練青平 張任馳 湯長遠 陳淑芬 李麗偉 舒猛俠 葉承義

摘要：采用常規(guī)石蠟切片，H.E染色法研究了浙江省景寧縣陸封香魚（Plecoglossusaltivelis）各期卵巢發(fā)育和組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征。結(jié)果表明：陸封香魚卵巢發(fā)育可分為6個時期。7月份部分性腺為細線狀，屬于Ⅰ期卵巢;7月份和8月份香魚性腺為Ⅰ期或者Ⅱ期，7月份和8月份的平均成熟系數(shù)分別為1.28%和1.45%;9月份，性腺發(fā)育達到Ⅲ期和Ⅳ期，其中大多數(shù)解剖個體為Ⅳ期卵巢，平均成熟系數(shù)為2.59%;10月下旬達到Ⅳ期末—Ⅴ期，成熟系數(shù)也達到最高峰，平均成熟系數(shù)為7.66%。香魚產(chǎn)卵類型為分批產(chǎn)卵類型。

關(guān)鍵詞：陸封型香魚（Plecoglossusaltivelis）;卵巢發(fā)育;組織學(xué)

中圖分類號：S917

香魚（Plecoglossusaltivelis）是一種溯河產(chǎn)卵的洄游性魚類，因背脊上有一條香脂腔道，能發(fā)出香味而得名，隸屬鮭形目（Salmoniformes），胡瓜魚亞目（Osmeroidei），香魚科（plecoglossidae），香魚屬[1-2]。千峽湖水庫位于浙江省麗水市青田縣和景寧縣，是浙江省最大的峽灣型人工湖，2008年建成蓄水，2013年開始，水庫建設(shè)單位進行了香魚人工增殖放流活動，2015年形成了香魚的陸封型群體。目前關(guān)于陸封型香魚研究僅見姜志強等[3]研究了碧流河水庫陸封型香魚生物學(xué)特性;李明云等[4]對浙江寧海黃壇水庫形成陸封種群關(guān)鍵技術(shù)進行了總結(jié)，但對景寧陸封型香魚卵巢發(fā)育的研究未見報道。所以本研究以陸封型香魚卵巢為材料，探討了陸封型香魚卵巢發(fā)育規(guī)律，旨在為實現(xiàn)該魚的人工繁殖提供科學(xué)依據(jù)，同時為陸封型香魚的人工繁殖提供理論指導(dǎo)。

1材料和方法

1.1實驗材料及來源

于2016年3月至2017年10月間從麗水市景寧縣甌江支流小溪上游河段采集香魚共50多尾，體長為6.8～23cm，體質(zhì)量為3.2～118.5g。所取樣本挑選健康無病、發(fā)育正常的個體。對樣本進行生物學(xué)測定后，解剖取其性腺，觀察并記錄性腺的發(fā)育時期、重量，然后切取性腺組織塊，固定于波恩氏液中。

1.2實驗方法

按常規(guī)組織切片方法，取出性腺組織進行脫水、透明、透蠟和石蠟包埋等，切片厚度為6～8μm，用H.E染色，中性樹膠封片，然后在尼康（NikonEclipse80i型）科研級顯微鏡下觀察和攝影，同時對其卵母細胞及核直徑進行顯微測量。性腺分期標準參照文獻[5]。成熟系數(shù)（GSI）按下面公式計算：

GSI=（Mg/Mb）×100%;

式中：GSI為成熟系數(shù)，%;Mg為性腺質(zhì)量，g;Mb為魚體質(zhì)量，g。

2結(jié)果

2.1香魚卵巢和卵母細胞的發(fā)育變化

香魚性腺的位置比較特殊，較為不對稱地排列在腹腔中，左側(cè)性腺位于消化道前部的左邊，稱為前葉，右側(cè)性腺在消化道后部的右邊，稱為后葉。隨著性腺的發(fā)育，左葉往后延長、增大，并包圍腸道;右葉向前延長增大，并向左邊包圍腸道，最后左右兩葉互相回合，形成“指管狀”。性腺的左右兩葉大小和重量也不一樣。其雌雄魚左葉性腺占性腺總重量的60.1%～88.4%。雌魚的卵巢為裸露型（無平滑肌形成的卵巢膜）。血管分布在卵巢的內(nèi)側(cè)面，其外側(cè)面排列為許多蓄卵片（封二圖1-3）。根據(jù)卵子發(fā)生細胞學(xué)特點和性腺解剖觀察，按其形態(tài)、顏色、大小和血管分布等特征，可將香魚卵巢的發(fā)育過程劃分為6個時期。

根據(jù)卵子發(fā)生細胞學(xué)特點和性腺解剖觀察，按其形態(tài)、顏色、大小和血管分布等特征，可將香魚卵巢的發(fā)育過程劃分為6個時期。

Ⅰ期：為原始生殖細胞期。卵巢很小，呈灰白色、透明、細線狀。位于腹腔壁背面前后兩側(cè)，肉眼分辯不出雌雄。此期卵巢從6月開始出現(xiàn)，一直到8月底為止。

Ⅱ期：為增殖期至早期生長期。卵巢為扁平的半葉片狀。前葉比后葉大、寬。稍透明，因腹面分布有微小血管而呈淡紅色或肉色、卵巢外側(cè)面可見分成多頁的蓄卵片。肉眼能認出卵巢，但看不出卵粒。組織學(xué)觀察，主要以第Ⅱ時相卵母細胞為主（封二圖1-1），也有少量的第Ⅰ時相卵母細胞。第Ⅱ時相卵母細胞直徑較大，核仁數(shù)量較多，細胞多呈多邊形或卵圓形。此期卵巢7月到8月可見，但是以8月較為集中。

Ⅲ期：為生長早期。卵巢擴大增厚，開始向腸道方向包卷，乳紅色或帶淡黃。血管較Ⅱ期為粗，分枝增多。肉眼能清楚的分辯出卵粒，但是彼此不容易分離。組織學(xué)觀察，主要以第Ⅲ時相卵母細胞為主，也有少量第Ⅰ、Ⅱ時相卵母細胞（封二圖1-2）。與第Ⅱ時相卵母細胞相比，第Ⅲ時相卵母細胞主要特點是卵膜增厚，出現(xiàn)放射膜。根據(jù)第Ⅲ時相卵母細胞形態(tài)特征和卵徑大小的不同，可將其劃分為早、中、晚3個不同時期。早期：胞質(zhì)的皮質(zhì)部分出現(xiàn)一層大小不一的液泡，此時卵母細胞多為圓形，體積明顯增大，濾泡膜仍為一層（封二圖1-4）;中期：液泡數(shù)量不斷增多，液泡由早期的一層逐漸向中央擴展為多層，此時卵母細胞多為圓形（封二圖1-5）;晚期：液泡幾乎充滿了整個胞質(zhì)內(nèi)，同時在液泡間開始出現(xiàn)細小的卵黃顆粒，卵母細胞體積進一步增大（封二圖1-6）。此期卵巢時間較短，9月部分香魚個體處于此期。

Ⅳ期：為生長晚期。卵巢擴展占體腔的3/5～4/5，有的幾乎充滿體腔，已經(jīng)繞腸大半。血管很多，卵粒飽滿。早期，絕大多數(shù)卵內(nèi)層級較多卵黃，卵巢呈黃色或者淡黃色，卵母細胞不易分離;后期，已經(jīng)長足的卵粒大小均勻，卵內(nèi)充滿卵黃，彼此分離，卵巢呈棕色。成熟系數(shù)增大，最大為22.96%。組織學(xué)觀察，主要以第Ⅳ時相卵細胞為主，有少量第Ⅱ、Ⅲ時相卵母細胞（封二圖1-7）。第Ⅳ時相卵母細胞是處在發(fā)育晚期的初級卵母細胞，根據(jù)卵巢中卵母細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及卵黃物質(zhì)積累程度的不同，也可劃分為早、中、晚3個不同時期。早期：卵母細胞繼續(xù)長大，胞質(zhì)中卵黃顆粒增多，增大，液泡數(shù)相應(yīng)減少，體積也變小，并逐漸被擠到細胞邊緣，細胞核位于細胞中央，為不規(guī)則圓形（封二圖1-8）。中期：卵黃繼續(xù)積累，卵黃顆粒增大，幾乎要充滿核外空間，液泡已被擠至胞膜內(nèi)緣，形成皮質(zhì)液泡層，其內(nèi)含物減少，甚至消失（封二圖2-1、圖2-2）。晚期：此時卵黃顆粒充滿，呈板塊狀，細胞核逐步向動物極移動（封二圖2-3、圖2-4）。在9月中下旬大多數(shù)個體轉(zhuǎn)入Ⅳ期，此期一直持續(xù)到10月下旬。

Ⅴ期：為成熟期。卵巢極為膨大，充滿整個腹腔，左右葉交匯包圍腸道。呈橙黃色。成熟卵較為透明，具光澤，游離在腹腔中，此時，輕壓魚腹，卵就可以流出。組織學(xué)觀察，主要以第Ⅴ時相卵細胞為主，此時卵母細胞達到最大，同時還存在著相當(dāng)數(shù)量的第Ⅳ時相和第Ⅲ時相等不同時相的卵母細胞。（封二圖2-5）。本期卵巢持續(xù)時間較為短，為10月下旬，在產(chǎn)卵場可以捕撈到。

Ⅵ期：為排空期。是產(chǎn)完卵的卵巢，卵巢萎縮、松弛充血。在11月份出現(xiàn)。

2.2香魚卵巢發(fā)育規(guī)律

2016年6月份解剖未觀察到香魚性腺發(fā)育。2016年7月份和8月份解剖觀察到香魚性腺已經(jīng)開始發(fā)育，7月份部分性腺為細線狀，屬于Ⅰ期卵巢。7月份和8月份香魚性腺為Ⅰ期或者Ⅱ期，7月份和8月份的平均成熟系數(shù)分別為1.28%和1.45%。進入9月份，

性腺發(fā)育很迅速，很快達到Ⅲ期（封三圖3-1）和Ⅳ期（封三圖3-2），其中只有部分個體為Ⅲ期卵巢，大多數(shù)解剖個體為Ⅳ期卵巢，9月份的平均成熟系數(shù)為2.59%，范圍為0.46%～7.10%;進入10月份，性腺進一步發(fā)育，在10月下旬達到Ⅳ期末-Ⅴ期（封三圖3-3），成熟系數(shù)也達到最高峰，10月份的平均成熟系數(shù)為7.66%，范圍為1.00%～22.96%。

3討論

3.1香魚的產(chǎn)卵類型

魚類卵巢發(fā)育可以分為三種類型：完全同步型、部分同步型和不同步型。完全同步型是指卵巢內(nèi)的卵母細胞都處于同一發(fā)育階段;部分同步型指卵巢內(nèi)至少由兩種處于不同發(fā)育階段的卵母細胞群組成，它們在一年內(nèi)通常只產(chǎn)卵一次，生殖季節(jié)相當(dāng)短;不同步型，卵巢內(nèi)含有各個發(fā)育階段的卵母細胞，一年內(nèi)產(chǎn)卵多次，生殖季節(jié)相當(dāng)長。本研究認為，在香魚的Ⅴ期卵巢中，除了第Ⅴ時相卵母細胞外，同時還存在著相當(dāng)數(shù)量的第Ⅳ時相和第Ⅲ時相等不同時相的卵母細胞。這說明，香魚卵巢卵母細胞的發(fā)育為非同步性，除主要卵母細胞外，還存在著相當(dāng)數(shù)量的過渡類型卵母細胞，這些過渡細胞在香魚第一次產(chǎn)卵后經(jīng)過一定的時間恢復(fù)，這些卵巢中的第Ⅳ時相卵母細胞發(fā)育成第Ⅴ時相的卵母細胞，在條件適宜（主要水溫、餌料等）的情況下，又可以發(fā)育成熟。綜上所述，香魚產(chǎn)卵類型為分批產(chǎn)卵類型。

3.2香魚產(chǎn)卵時間

2016年和2017年的產(chǎn)卵期均為10月中旬—11月上旬，其中10月下旬為產(chǎn)卵盛期，雄魚精巢發(fā)育成熟（封二圖2-6）。主要產(chǎn)卵場位于麗水市景寧縣甌江支流小溪上游河段。產(chǎn)卵場水質(zhì)清澈、底質(zhì)為砂礫。產(chǎn)卵時間為傍晚至黎明前，白天很少產(chǎn)卵。產(chǎn)出的卵為黏性卵，在水流的沖擊下附在石頭上孵化。產(chǎn)過卵的親魚體色暗黑，消瘦，雄性尤為明顯，不久就會死去。

參考文獻：

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倪勇，朱成德，朱茂曉，等.太湖魚類志[M].上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2005：85-88.

[2]董聿茂，諸葛陽，黃美華，等.淡水魚類.浙江動物志[M].浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1991：44-51.

[3]姜志強，梁兆川，于向前，等.碧流河水庫陸封型香魚生物學(xué)特性的演變[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2001，8（2）：36-39.

[4]李明云，陳炯，苗亮，等.香魚在浙江寧海黃壇水庫形成陸封種群放流增殖的關(guān)鍵技術(shù)及效果[J].中國水產(chǎn)，2014（10）：68-69.

[5]樓允東.鄭德崇.王瑞霞.等.組織胚胎學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社.1994：131-137.

（收稿日期：2021-06-15）