赤霉素、吲哚乙酸對(duì)貴州雷山綠茶品質(zhì)的影響

李惠林，金 芬，劉文鋒，李 俊，楊奕海，吳從娟，楊正興

（黔東南州雷山縣雷山農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州雷山 557199）

0 引言

茶葉是貴州省重要的支柱產(chǎn)業(yè)之一，省委省政府和各地方政府建立的一系列措施，減少了茶葉種植中農(nóng)藥的使用。同時(shí)，由于病蟲(chóng)害防治和茶葉質(zhì)量的要求，在茶葉種植管理中需要尋找相應(yīng)的替代手段，如使用對(duì)人體危害較小的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（下稱：PGR）等替代品。對(duì)貴州茶園中PGR使用情況進(jìn)行試驗(yàn)，為掌握PGR在茶樹(shù)上使用的發(fā)展趨勢(shì)提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和參考價(jià)值。

本論文選取貴州省銀球茶（綠茶）主要生產(chǎn)地的貴州省雷山縣作為樣本，針對(duì)不同濃度的赤霉素、吲哚乙酸進(jìn)行田間試驗(yàn)，相比不同濃度的赤霉素、吲哚乙酸對(duì)茶葉主要品質(zhì)指標(biāo)（可可堿、咖啡因、氨基酸、兒茶素類）的影響。

1 田間試驗(yàn)

在《農(nóng)藥注冊(cè)試驗(yàn)指南（NY/T788）》和《農(nóng)藥注冊(cè)殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》的指導(dǎo)下進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，并根據(jù)本研究的試驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

本次試驗(yàn)，主要選擇黔東南州雷山縣茶葉種植區(qū)進(jìn)行實(shí)地調(diào)研。依據(jù)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的特點(diǎn)，在2018年春季進(jìn)行殘留試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)為雷山縣腳雄茶業(yè)種植區(qū)。茶園面積約1 000 m2。試驗(yàn)前10天茶樹(shù)應(yīng)經(jīng)過(guò)輕修剪處理。試驗(yàn)前未施用過(guò)PGR。供試的綠茶茶樹(shù)，品種為福鼎華茶2號(hào)（GSCT2），樹(shù)齡為6—9年。

1.1 供試藥物

赤·吲乙·蕓可濕性粉劑。

1.2 試驗(yàn)分區(qū)

試驗(yàn)前茶葉基地一年以上未施用過(guò)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，試驗(yàn)劃分為3個(gè)小區(qū)，每個(gè)試驗(yàn)設(shè)三個(gè)重復(fù)，分別以希臘字母I，II，III標(biāo)記，共分為12個(gè)區(qū)塊。

其中3塊為對(duì)照，對(duì)照組為未噴施供試藥物區(qū)，噴施純凈水，記為CK。其它9塊為噴藥處理區(qū)塊，每個(gè)處理設(shè)置三次重復(fù)試驗(yàn)。分別設(shè)置減半濃度處理區(qū)，記為處理①區(qū)；推薦濃度處理區(qū)，記為處理②區(qū)；加倍濃度處理區(qū)，記為處理③區(qū)。各個(gè)區(qū)塊間隔設(shè)置緩沖區(qū)，區(qū)塊應(yīng)隨機(jī)排列。

1.3 采樣方式

噴藥后，根據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)塊的茶樹(shù)發(fā)芽情況進(jìn)行發(fā)芽率的實(shí)驗(yàn)記錄，出芽后，采集一芽二葉茶青樣品，用于測(cè)定芽的重量及含水量，同時(shí)拍照記錄形態(tài)；采集一芽二葉1.5 kg，500 g鮮葉直接烘干（烘青樣品）用于理化檢測(cè)。

2 綠茶中主要品質(zhì)指標(biāo)檢測(cè)方法建立

2.1 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司），配有ACQPDA檢測(cè)器；電子天平。

2.2 樣品前處理

樣品粉碎，過(guò)30目篩，稱取1 g（精確至0.001 g）樣品到250 mL錐形瓶中，量取100 mL的90℃超純水至錐形瓶中，蓋塞后立刻放入沸水浴，超聲提取20 min，持續(xù)振搖取出，用流動(dòng)冷水冷卻1 min，加5 g氧化鎂，混勻，沸水浴超聲20 min后取出，冷卻至室溫。上清液轉(zhuǎn)移至100 mL離心管中，4 500 r/min離心5 min，待測(cè)備用。

2.3 測(cè)定條件

C18液相色譜柱（5 μm，150 mm×3.9 mm）；吸光度210 nm；分離度4.8 nm；采樣速率20點(diǎn)/s。流動(dòng)相為超純水＋乙腈溶液（V/V）；梯度洗脫模式；流速0.3 mL/min，按梯度洗脫程序進(jìn)行洗脫。

2.4 檢測(cè)方法的建立與優(yōu)化

本試驗(yàn)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 飲料中咖啡因的測(cè)定》（GB5009.139），對(duì)色譜條件進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化，檢測(cè)波長(zhǎng)由僅能測(cè)定咖啡堿的275 nm，優(yōu)化為可涵蓋更多品質(zhì)指標(biāo)的210 nm。得到更廣泛的檢測(cè)范圍。

本方法的線性范圍在221 ng/mL～438 μg/mL之間。檢出限：0.7 ng（以三倍基線噪音信號(hào)確定）；取樣量1 g，檢出限16 mg/kg，定量限50 mg/kg。品質(zhì)指標(biāo)分離情況較好，出峰情況對(duì)比如圖1。

圖1 綠茶中主要品質(zhì)指標(biāo)出峰情況

3 對(duì)貴州雷山綠茶中營(yíng)養(yǎng)成分的影響

通過(guò)綠茶中營(yíng)養(yǎng)成分指標(biāo)檢測(cè)方法對(duì)貴州雷山綠茶中主要品質(zhì)指標(biāo)（可可堿Theobromine，咖啡因Caffine，茶氨酸L-Theanine）進(jìn)行試驗(yàn)。通過(guò)色譜圖計(jì)算各品質(zhì)指標(biāo)在茶葉中的含量，重復(fù)進(jìn)樣兩次，取平均值，得出下表1和表2。

表1 不同赤霉素、吲哚乙酸濃度處理后茶葉中三種營(yíng)養(yǎng)成分的影響

表2 不同赤霉素、吲哚乙酸濃度處理后茶葉中兒茶素類含量的影響

本研究利用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，參照田間試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法分析得知，圖表中刪除線的數(shù)據(jù)為異常值，不參與最終結(jié)果計(jì)算。根據(jù)數(shù)據(jù)討論在四種不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑施用濃度（CK、①、②、③）和三個(gè)區(qū)塊重復(fù)（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）之間是否有交互影響，從不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑施用濃度來(lái)討論對(duì)茶葉中品質(zhì)指標(biāo)是否存在顯著差異性。

若P<0.05，說(shuō)明差異源間存在顯著差異，若P<0.01，則差異源之間的差異非常顯著，見(jiàn)表3。

表3 赤霉素、吲哚乙酸濃度對(duì)茶葉中品質(zhì)指標(biāo)的影響的方差分析

4 結(jié)語(yǔ)

赤霉素、吲哚乙酸濃度對(duì)表沒(méi)食子兒茶素EGC含量的增長(zhǎng)有顯著影響，對(duì)綠茶中茶氨酸（L-Theanine）的含量的增長(zhǎng)有非常顯著的影響。相較之下，對(duì)于如：綠茶中可可堿（Theobromine）、綠茶中兒茶素（C）、綠茶中咖啡因（Caffine）、綠茶中表兒茶素沒(méi)食子酸酯（ECG）、綠茶中表兒茶素（EC）、綠茶中表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）的作用不夠明顯。

在茶葉生產(chǎn)過(guò)程中，可以通過(guò)施用赤霉素、吲哚乙酸等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，促進(jìn)茶葉中水分的增加，從而有效增量，增效，增強(qiáng)經(jīng)濟(jì)效益。同時(shí)通過(guò)對(duì)茶氨酸、表沒(méi)食子兒茶素的作用，改善茶葉滋味的鮮度等，從而提高茶葉的口感。