酶法檢測糖化白蛋白分析性能和室內(nèi)質(zhì)控性能評價(jià)*

胡 婷 索明環(huán) 王偉佳 陳 穎 胡耀宗 王 霞 田 原 蕭金麗

中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，廣東省中山市 528403

糖化白蛋白(Glycated albumin,GA)是血中葡萄糖與血漿中白蛋白發(fā)生非酶促反應(yīng)的產(chǎn)物。相對血漿中其他蛋白而言，白蛋白的半衰期較長并且濃度最高，所以最容易被糖化。糖化白蛋白反映患者檢測前2～3周的平均血糖水平，主要用于監(jiān)測糖尿病患者短期的血糖水平并指導(dǎo)臨床治療方案的調(diào)整。與糖化血紅蛋白相比，GA反映的是更短期的血糖波動(dòng)，且對于存在貧血、血紅蛋白變異體等影響紅細(xì)胞壽命的糖尿病患者，GA更能反映真正的血糖控制情況[1-2]。本研究對日本旭化成GA測定試劑盒主要分析性能進(jìn)行了評價(jià)，同時(shí)對其室內(nèi)質(zhì)控性能進(jìn)行了評價(jià)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 研究對象 標(biāo)本來源于2020年1—11月在我院住院、門診患者或健康體檢者。隨機(jī)選擇健康體檢人群中既往無糖尿病、高血壓、血脂異常、冠心病及卒中病史，BMI為18.5～24.9且肝腎功能、血常規(guī)、尿常規(guī)等結(jié)果正常的表觀健康人，男10名，女10名，年齡18～60歲。

1.2 儀器和試劑 儀器為西門子全自動(dòng)生化分析儀，型號ADVIA2400。試劑為日本旭化成制藥株式會(huì)社生產(chǎn)的Lucica GA-L糖化白蛋白測定試劑盒,配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品(試劑批號：1805A；校準(zhǔn)品批號：1805A/1807A；質(zhì)控品批號：1805A)。實(shí)驗(yàn)前嚴(yán)格按照廠家操作規(guī)程進(jìn)行儀器的維護(hù)保養(yǎng)和校準(zhǔn)，以確保儀器處于良好的狀態(tài)。

1.3 方法

1.3.1 精密度評價(jià)：參考CLSI EP15-A2文件[3]，選取2份不同濃度的新鮮血清標(biāo)本，GA濃度分別約為0.627g/dl和1.689g/dl，每天分析一批，每批重復(fù)測定3次，連續(xù)測定5d。

1.3.2 正確度評價(jià)：參考CLSI EP15-A2文件[3]，使用廠商提供的另一個(gè)批號校準(zhǔn)品(1807A)進(jìn)行正確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，測定校準(zhǔn)品3次，取均值，然后與配套校準(zhǔn)品的標(biāo)示值比較，計(jì)算偏倚。

1.3.3 分析測量范圍(AMR)實(shí)驗(yàn)：參考CLSI EP6-A文件[4],收集GA的高值血清樣本，用生理鹽水稀釋高值血清，按體積比1L、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、1H，配成6個(gè)濃度梯度的血清，并對各濃度梯度血清測定2次，計(jì)算平均值，在1個(gè)分析批次內(nèi)完成。線性范圍評價(jià)血清:高值患者血清GA濃度3.50g/dl，白蛋白濃度4.85g/dl。

1.3.4 臨床可報(bào)告范圍(CRR)實(shí)驗(yàn)：參照試劑說明書，進(jìn)行稀釋回收試驗(yàn)。選擇3份高值標(biāo)本，用生理鹽水對標(biāo)本進(jìn)行稀釋，檢測結(jié)果與稀釋后的預(yù)期值比較，計(jì)算稀釋回收率。

1.3.5 生物參考區(qū)間驗(yàn)證：參考CLSI C28-A2文件，測定健康體檢人群GA濃度，驗(yàn)證是否與廠家聲明的參考區(qū)間一致。

1.3.6 室內(nèi)質(zhì)控性能評價(jià)實(shí)驗(yàn)：功效函數(shù)圖是一種為分析批失控概率(誤差檢出概率和假失控概率) 與該批發(fā)生隨機(jī)或系統(tǒng)誤差大小關(guān)系的圖，即表示統(tǒng)計(jì)功效與分析誤差大小(ΔSEc 和 ΔREc) 的關(guān)系，則可篩選出更適合于每個(gè)不同試驗(yàn)指標(biāo)的質(zhì)控方法，并能夠預(yù)測質(zhì)控方法可否達(dá)到預(yù)想的質(zhì)量目標(biāo)[5-6]。以室內(nèi)質(zhì)控的累積變異系數(shù)(CV)作為項(xiàng)目的不精密度，以全球室內(nèi)質(zhì)控室間比對同方法學(xué)組的均值為靶值計(jì)算偏倚(Bias)，選擇10%為總允許誤差，借助操作過程規(guī)范圖和西格瑪度量圖設(shè)計(jì)室內(nèi)質(zhì)控方法[7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用Microsoft Excel 2003和伯樂質(zhì)控管理系統(tǒng)Unity Real Time進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，線性回歸采用簡單線性回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 精密度實(shí)驗(yàn) 西門子全自動(dòng)生化分析儀ADVIA2400采用液態(tài)酶法檢測不同濃度的新鮮血清標(biāo)本，批內(nèi)精密度和總不精密度均小于廠家聲明的批內(nèi)和總不精密度，已核實(shí)批內(nèi)精密度與總不精密度與廠家聲明的一致，結(jié)果可以接受，詳見表1。

表1 GA精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 正確度實(shí)驗(yàn) 檢測與當(dāng)前檢測系統(tǒng)校準(zhǔn)的校準(zhǔn)品不同批號的配套校準(zhǔn)品，測定值分別為1.619、1.629、1.623，取其均值1.624g/dl，校準(zhǔn)品標(biāo)識值1.63g/dl，計(jì)算二者的相對偏倚為-0.37%，<5%(1/2允許總誤差)，正確度性能得到驗(yàn)證。

2.3 分析測量范圍實(shí)驗(yàn)(AMR) GA的預(yù)期值和實(shí)測值無明顯離群值，最佳擬合方程為一次多項(xiàng)式?；貧w方程Y=0.990X+0.010，R2為0.999，見圖1。直線回歸結(jié)果得知:相關(guān)系數(shù)為0.999，在0.97～1.03之間，斜率為0.990,與1之間無顯著差異；截距為0.010,與0之間無顯著差異。說明預(yù)期值與測量值之間相關(guān)性極好,該方法在實(shí)驗(yàn)所涉及的濃度范圍內(nèi)(0～3.50g/dl)成線性,與廠商提供的線性范圍0.0～3.60g/dl相符。

圖1 GA分析測量范圍驗(yàn)證試驗(yàn)

2.4 臨床可報(bào)告范圍(CRR) 標(biāo)本經(jīng)過稀釋后，確定最大稀釋倍數(shù)為10，回收率均落在90%～110%的最大稀釋倍數(shù)，故其可報(bào)告的臨床范圍(CRR)是：0～36g/dl，可以滿足臨床的需求，見表2。

表2 GA稀釋回收率測定結(jié)果

2.5 生物參考區(qū)間驗(yàn)證 20名健康個(gè)體GA檢測結(jié)果:0.44～0.65g/dl，ALB-GA檢測結(jié)果：4.4～5.1g/dl，均在廠家提供的參考區(qū)間內(nèi)。

2.6 室內(nèi)質(zhì)控性能評價(jià)實(shí)驗(yàn) 操作過程規(guī)范圖(見圖2)和西格瑪度量圖(見圖3)，可見GA每天測定質(zhì)控品個(gè)數(shù)2，選擇1-5S單質(zhì)控規(guī)則即可滿足Ped>90，Pfr<5,西格瑪為7.5。

圖2 GA操作過程規(guī)范圖

圖3 GA西格瑪度量圖

3 討論

GA作為一種新的糖尿病診斷監(jiān)測新指標(biāo)，它在多種病理狀態(tài)下能更可靠地反映血糖控制的真實(shí)水平，這對病情的評估、療效的評價(jià)和預(yù)后的判斷具有極其重要的臨床意義[1-2]，其聯(lián)合其他指標(biāo)對臨床的診斷意義更大[8-9]。GA的檢測方法有很多，包括陽離子交換層析法、電泳法、親和層析法和免疫學(xué)方法等，這些方法雖然較靈敏，但設(shè)備要求高、代價(jià)高昂、操作煩瑣等。目前認(rèn)為液態(tài)酶法檢測GA具有簡便、特異性高、微量、快速等特點(diǎn)，更適于實(shí)驗(yàn)室推廣應(yīng)用[10]。

本研究參考CLSI-EP文件和相關(guān)文獻(xiàn)，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，評價(jià)西門子全自動(dòng)生化分析儀ADVIA2400酶法檢測GA的分析性能[3-4]。主要對酶法測定GA的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報(bào)告范圍以及參考區(qū)間驗(yàn)證等分析性能指標(biāo)進(jìn)行了評價(jià)。結(jié)果顯示：該法的精密度良好，GA濃度為0.627g/dl和1.689g/dl時(shí)批內(nèi)精密度和總的精密度，均低于基于生物學(xué)變異的精密度(CV<2.6%),也低于廠家提供的近似濃度的精密度(CV<3%)。正確度驗(yàn)證采用日本旭化成公司提供的另一批號校準(zhǔn)品，其校準(zhǔn)物質(zhì)具有可靠的溯源性，相對偏倚為-0.37%，<1/2的總允許誤差，正確度得到驗(yàn)證。分析測量范圍(AMR)是收集無黃疸、脂血和溶血高值新鮮患者標(biāo)本進(jìn)行分析驗(yàn)證，GA在0～3.5g/dl范圍內(nèi)存在線性關(guān)系，該結(jié)果顯示儀器測定的線性范圍在廠家提供的范圍內(nèi)，涵蓋了醫(yī)學(xué)決定水平。說明書聲明的稀釋回收率為90%～110%,三份高值樣本當(dāng)稀釋度達(dá)1∶9時(shí)，回收率在可接受范圍內(nèi)，確定最大稀釋度為1∶9,AMR上限乘以最大稀釋度即為臨床可報(bào)告范圍(CRR)上限，為36g/dl，結(jié)合功能靈敏度為0U/L，故本檢測系統(tǒng)測定GA的臨床可報(bào)告范圍為0～36g/dl。當(dāng)患者標(biāo)本測定結(jié)果高于AMR上限時(shí)，必須稀釋后重測，但不能超過最大稀釋倍數(shù)，稀釋后測定值必須大于測量低限，否則結(jié)果不可靠。對廠家提供的生物參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，20個(gè)結(jié)果均在其范圍內(nèi)，說明該范圍有效，可用于本實(shí)驗(yàn)室。

功效函數(shù)圖驗(yàn)證候選質(zhì)控規(guī)則的性能特征Y 軸為誤差檢出率(Ped)，X 軸為臨界誤差大小，Y 軸的截距則為假失控率(Pfr)。確定 Ped和 Pfr 后，確定質(zhì)控方案，即質(zhì)控規(guī)則及控制測定個(gè)數(shù)[5-6]。結(jié)合操作過程規(guī)范圖和西格瑪度量圖設(shè)計(jì)符合的室內(nèi)質(zhì)控方法，從而提高誤差檢出概率(Ped),降低假失控概率(Pfr)。本研究借助伯樂全球室內(nèi)質(zhì)控軟件利用室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行分析，以2020年1—11月的GA室內(nèi)質(zhì)控(L、H)的累積變異系數(shù)(CV)作為項(xiàng)目的不精密度，以全球室內(nèi)質(zhì)控室間比對同方法學(xué)組的均值為靶值計(jì)算偏倚，選擇10%為總允許誤差，得出該項(xiàng)目的操作過程規(guī)范圖和西格瑪度量圖。本研究發(fā)現(xiàn)，GA每天測定質(zhì)控品個(gè)數(shù)2，選擇1-5S單質(zhì)控規(guī)則即可滿足Ped>90，Pfr<5,西格瑪為7.5。

綜上所述，西門子全自動(dòng)生化分析ADVIA2400酶法檢測GA的主要分析性能基本滿足臨床實(shí)驗(yàn)室要求，室內(nèi)質(zhì)控性能佳，可為實(shí)驗(yàn)室提供可靠的結(jié)果，值得應(yīng)用。