激光多普勒血流儀評(píng)價(jià)鹿茸對(duì)于動(dòng)脈硬化大鼠的影響

李子娟 韓杰 王雁彬 李廷荃

摘要：目的 利用激光多普勒血流儀評(píng)價(jià)鹿茸對(duì)于動(dòng)脈硬化大鼠的療效。方法 肢體缺血手術(shù)、高脂飼料喂養(yǎng)制作大鼠下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥模型。分別在給藥后0、7、14、28d對(duì)各組大鼠進(jìn)行多普勒檢測(cè)，觀察各時(shí)期大鼠血流灌注恢復(fù)程度;同時(shí)進(jìn)行體溫的監(jiān)測(cè)。結(jié)果 各給藥組各時(shí)期下肢溫度及LDPI指數(shù)均有不同程度的升高（P<0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中同時(shí)期對(duì)比鹿茸高劑量組升高最為顯著，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，其之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 根據(jù)激光多普勒血流儀顯示鹿茸促進(jìn)了動(dòng)脈硬化大鼠的血流恢復(fù)，且與給藥濃度具有一定相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：激光多普勒;動(dòng)脈硬化;鹿茸;血流恢復(fù)

中圖分類號(hào)：R285?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號(hào)：1007-2349（2021）07-0072-04

Evaluation of the Effect of Velvet Antler on Arteriosclerosis Ratsby Laser Doppler Blood Flow Meter

LI Zi-juan1， HAN Jie1， WANG Yan-bin2， LI Ting-quan2

（1. Shanxi University of Traditional Chinese Medicine， Taiyuan 030024， China;2. The Affiliated Hospital of Shanxi University of Traditional Chinese Medicine， Taiyuan 030024， China）

【Abstract】Objective： To evaluate the curative effect of velvet antler on arteriosclerosis rats by using laser Doppler blood flow meter. Methods： Limb ischemia surgery and high-fat feed were used to make a rat model of lower extremity arteriosclerosis obliterans. Doppler detection was performed on the rats in each group at the 0， 7th， 14th and 28th day after the administration to observe the recovery degree of the blood perfusion of the rats in each period and at the same time， the body temperature was monitored. Results： The lower extremity temperature and LDPI index increased to different degrees in each period of each administration group （P<0.05）， and the differences were statistically significant. The increase was the most significant in the high-dose velvet antler group during the same period， followed by the middle-dose velvet antler group and again by the low-dose velvet antler group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： According to the display of the laser Doppler blood flow meter， the velvet antler can promote the recovery of blood flow in arteriosclerotic rats， and is related to the concentration of administration.

【Key words】Laser Doppler; Arteriosclerosis; Velvet Antler; Blood Flow Recovery

動(dòng)脈硬化性閉塞癥（arteriosclerosis obliterans，ASO）是指由于動(dòng)脈硬化造成的內(nèi)膜增厚、管腔狹窄或閉塞，導(dǎo)致相應(yīng)區(qū)域供血不足的一系列疾病。表現(xiàn)在下肢則為下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥（arteriosclerosis obliterans of the lower extremities，ASOLE），臨床癥狀有下肢皮溫降低、間歇性跛行、疼痛，易引起肢體末端壞疽，甚至有截肢死亡的風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，75 歲以上人群中ASO的發(fā)病率高達(dá)15%～20%，普通人群發(fā)病率為3%～10%，以老年男性患者居多，給患者帶來極大痛苦的，也給家庭及社會(huì)帶來巨大負(fù)擔(dān)[3]。隨著中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展，中醫(yī)中藥在對(duì)本病的治療上取得的顯著成效，許多研究前期表明，激光多普勒技術(shù)能較為客觀的反應(yīng)藥物對(duì)于動(dòng)脈硬化的療效[4]，遂本項(xiàng)目則用激光多普勒技術(shù)結(jié)合對(duì)大鼠下肢溫度的監(jiān)測(cè)來初步評(píng)價(jià)鹿茸對(duì)于動(dòng)脈硬化大鼠的療效。

1 材料

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)雄性SD大鼠36只，2月齡，體重250～300 g，由山西省中醫(yī)藥研究院提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：1103221911003889。

1.2 飼料制備 高脂飼料（80.3%基礎(chǔ)飼料、15%豬油、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、4%膽固醇）

1.3 藥物與試劑 鹿茸采用馬鹿茸，購自北京同仁堂（集團(tuán)）有限責(zé)任公司，用普通粉碎機(jī)粗粉后再用氣流超微粉碎機(jī)制成微粉（粒徑小于10μm），溫水調(diào)，攪拌均勻，即用即配。維生素D3針劑（哈爾濱摩天農(nóng)科獸藥有限責(zé)任公司）。

1.4 主要儀器 電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司 CPA）;多普勒（HADECO公司 日本 ES-100V3）;離心機(jī)（Beckman Coulter公司 美國 Microfuge 20R）。

2 方法

2.1 分組 采用隨機(jī)數(shù)字表法分為6組：正常組、模型組、假手術(shù)組、鹿茸低劑量組、鹿茸中劑量組、鹿茸高劑量組，每組6只。

2.2 下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥模型制作 （1）將SPF級(jí)SD雄性大鼠以5%水合氯醛溶液（7mL/kg）腹腔麻醉，隨后取平臥位，固定于手術(shù)臺(tái)，左側(cè)腹股溝備皮。（2）碘伏消毒左側(cè)腹股溝區(qū)域后，于此處行一長(zhǎng)約1.5cm縱切口，暴露血管鞘，分離股動(dòng)脈及其分支，齒鑷沿股動(dòng)脈走形鉗夾約30s，分別結(jié)扎并離斷左側(cè)股動(dòng)脈的分支。（3）用0號(hào)線縫合皮下組織及皮膚，背部皮下注射生理鹽水10mL補(bǔ)液抗休克治療，觀察大鼠各項(xiàng)生命體征平穩(wěn)后放回鼠籠。（4）給予30萬單位青霉素肌肉注射3天，以預(yù)防感染。（5）高脂飼料喂養(yǎng)12周;⑥予維生素D3（30萬u/kg）右下肢肌肉注射，1個(gè)月1次。

2.3 給藥方法 鹿茸低、中、高計(jì)量組灌胃給藥（0.143 g·kg-1·d-1、 0.286 g·kg-1·d-1、0.572 g·kg-1·d-1）。LY294002 組腹腔注射（1 mg·kg-1·d-1）;正常組、模型組及假手術(shù)組給予等容量蒸餾水。

2.4 檢測(cè)指標(biāo)

2.4.1 一般狀態(tài) 觀察大鼠一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)，毛色，活動(dòng)靈敏度等。

2.4.2 下肢溫度 分別在用藥0、7、14、28 d監(jiān)測(cè)大鼠下肢溫度。

2.4.3 下肢血流灌注恢復(fù)程度 用藥0、7、14、28 d，以5%水合氯醛溶液（7 mL/kg）對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠行腹腔麻醉，用激光多普勒血流儀測(cè)定下肢血流灌注。操作時(shí)探頭盡量與下肢皮膚貼合，施力方向盡量與皮膚垂直，被檢測(cè)的下肢皮膚組織受壓應(yīng)盡量保持著力均勻。LDPI 指數(shù)（LDPI index）=缺血下肢血流/未缺血下肢血流。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 25.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)用（x±s）表示。2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠一般狀態(tài) 空白組、假手術(shù)組大鼠精神良好，毛色光澤，活動(dòng)靈敏;模型組、給藥組大鼠在最初1個(gè)月增長(zhǎng)迅速，后增長(zhǎng)速度減緩，其精神萎靡，活動(dòng)欠靈敏，毛色暗淡。

3.2 鹿茸干預(yù)下各時(shí)期各組大鼠下肢溫度 見表1。縱向相比，給藥0d時(shí)模型組及各給藥組之間溫度無明顯差異（P>0.05），均顯著低于空白組及假手術(shù)組（P<0.05）;給藥7d時(shí)，給藥組溫度均有所上升，顯著高于模型組（P<0.05），顯著低于空白組及假手術(shù)組（P<0.05），其中鹿茸高劑量組上升最多，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，之間均有顯著差異（P<0.05）;給藥14d時(shí)，給藥組溫度較7d有所上升，顯著高于模型組（P<0.05），顯著低于空白組及假手術(shù)組（P<0.05），其中仍為鹿茸高劑量組上升最多，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，之間均有顯著差異（P<0.05）;給藥28d時(shí)，給藥組溫度較14d有所上升，顯著高于模型組（P<0.05），鹿茸高劑量組與空白組及假手術(shù)組無顯著差異（P>0.05），鹿茸中劑量組與鹿茸低劑量組仍顯著低于空白組及假手術(shù)組（P<0.05），鹿茸低劑量組顯著低于鹿茸中劑量組（P<0.05）。見圖1，橫向相比，空白組、假手術(shù)組、模型組各時(shí)期均無明顯差異（P>0.05），而給藥組溫度在逐步上升，且鹿茸高劑量組上升最為明顯，28d時(shí)可達(dá)到空白組及假手術(shù)組水平，其次為鹿茸中劑量組，最后為鹿茸低劑量組。

3.3 鹿茸干預(yù)下各時(shí)期各組大鼠的下肢血流灌注恢復(fù)程度 見表2，橫向相比，給藥0d時(shí)，與空白組及假手術(shù)組相比，模型組及給藥組患側(cè)血流術(shù)后立即減少，LDPI指數(shù)達(dá)到最低值（P<0.05）;給藥7d時(shí)，給藥組LDPI指數(shù)均有升高，其中鹿茸高劑量組升高做多，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，之間均有顯著差異（P<0.05）;給藥14d時(shí)，各給藥組較7d時(shí)LDPI指數(shù)有所上升，鹿茸高劑量組仍上升最多，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，之間均有顯著差異（P<0.05）;給藥28d時(shí)，各給藥組較14d時(shí)LDPI指數(shù)有所上升，鹿茸高劑量組可基本與空白組及假手術(shù)組持平，之間無顯著差異（P>0.05），其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，各給藥組之間存在顯著差異（P<0.05）。見圖2，橫向相比，空白組、假手術(shù)組、模型組各時(shí)期均無明顯差異（P>0.05），而給藥組溫度在逐步上升，且鹿茸高劑量組上升最為明顯，28d時(shí)可達(dá)到空白組及假手術(shù)組水平，其次為鹿茸中劑量組，最后為鹿茸低劑量組。

4 討論

動(dòng)脈硬化閉塞癥（ASO）是由于血管動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不斷擴(kuò)大和繼發(fā)血栓引起動(dòng)脈管腔狹窄甚至閉塞，出現(xiàn)患肢慢性或急性的缺血癥狀[5]。因此，改善缺血區(qū)域血流灌注促進(jìn)血管新生就成為治療的重要步驟之一。鹿茸具有補(bǔ)腎、填精、益髓的功效，可促進(jìn)血液的生成和運(yùn)行，而鹿茸的主要成分鹿茸多肽對(duì)表皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞有顯著的促進(jìn)增殖作用，可以加速瘡面愈合，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖分化及遷移，促進(jìn)病變部位的血管生成[6]。

近年來，微循環(huán)檢測(cè)方法在下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥的應(yīng)用越來越被推崇，其中激光多普勒血流測(cè)定是一種無損傷性的快速組織血流測(cè)量方法，其可以連續(xù)、實(shí)時(shí)檢測(cè)組織微循環(huán)粗流量[7]，其中前期數(shù)名學(xué)者應(yīng)用LDPI指數(shù)來觀察動(dòng)脈硬化閉塞的治療療效，發(fā)現(xiàn)LDPI值較治療前增加顯著，同時(shí)臨床評(píng)分顯著下降[8]，從而證實(shí)的療法的療效。因此，激光多普勒LDPI指數(shù)在判斷下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥中的血流灌注恢復(fù)程度中有很好的實(shí)用價(jià)值，目前已較為廣泛的應(yīng)用于臨床中。

本研究中，各給藥組在給藥7、14、28d LDPI指數(shù)均有顯著上升，其中鹿茸高劑量組上升程度最為顯著，在給藥28d時(shí)基本可達(dá)空白組及假手術(shù)組水平;而鹿茸中劑量組上升對(duì)比鹿茸高劑量組效果稍遜色，在給藥同時(shí)期，鹿茸中劑量組的LDPI指數(shù)均顯著低于鹿茸高劑量組;鹿茸低劑量組上升程度對(duì)比鹿茸中劑量組亦顯遜色，在給藥同時(shí)期，鹿茸低劑量組的LDPI指數(shù)均顯著低于鹿茸中劑量組。同時(shí)，下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥其中一個(gè)臨床表現(xiàn)為下肢皮溫的降低，本實(shí)驗(yàn)同時(shí)監(jiān)測(cè)大鼠各時(shí)期各組下肢溫度得出各組各時(shí)期變化與LDPI指數(shù)變化水平基本一致，從而得出結(jié)論：鹿茸對(duì)于下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥大鼠療效顯著，且其療效水平與給藥濃度密切相關(guān)，鹿茸高劑量組的療效優(yōu)于鹿茸中劑量組及鹿茸低劑量組的療效，但具體鹿茸對(duì)于下肢動(dòng)脈硬化閉塞大鼠的作用具體機(jī)制還需實(shí)驗(yàn)后期對(duì)于關(guān)鍵蛋白檢測(cè)來進(jìn)行探討驗(yàn)證。

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（收稿日期：2021-04-19）

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81874474）

第一作者簡(jiǎn)介：李子娟（1996-），女，在讀研究生，研究方向：中醫(yī)藥防治心血管系統(tǒng)疾病的研究。

通信作者：李廷荃，E-mail：ltqnsfc@163.com