ELISA聯(lián)合TRUST在梅毒螺旋體感染患者中的診斷效果及效能ROC曲線研究

職建軍

(安陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心 人事科，河南 安陽(yáng) 455000)

梅毒是由梅毒螺旋體感染所引起的性傳染疾病，可引起人體多系統(tǒng)損害，破壞正常組織功能，嚴(yán)重威脅著患者的生命安全[1]。梅毒血清學(xué)檢查對(duì)梅毒早期診斷、控制梅毒傳播具有重要作用。因此，全面認(rèn)識(shí)和了解梅毒抗體檢測(cè)對(duì)指導(dǎo)臨床診斷和療效觀察具有重要意義[2]。臨床主要有兩類檢驗(yàn)方法，即非梅毒螺旋體血清學(xué)實(shí)驗(yàn)和梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)[3]。甲基胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST) 檢測(cè)屬于非梅毒螺旋體血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果的特異性相對(duì)較差，易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 屬于梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)。為提高臨床檢測(cè)的準(zhǔn)確性，本研究以梅毒螺旋體感染患者為對(duì)象，探討ELISA 聯(lián)合TRUS 對(duì)梅毒螺旋體感染的診斷價(jià)值。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2019年1月至2019年10月疑似梅毒螺旋感染患者50例作為研究對(duì)象，其中男28例，女22例；年齡25 ～65 歲，平均(32.25±5.53) 歲；病情分期：15例Ⅰ期患者、24例Ⅱ期患者、8例Ⅲ期患者，3例潛伏期患者。所有患者均進(jìn)行TRUST、ELISA 和TPPA 檢驗(yàn)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2 方法

疑似梅毒螺旋體感染患者，均經(jīng)TRUST、ELISE 及聯(lián)合檢測(cè)，并以梅毒旋體明膠顆粒檢測(cè)(TPPA) 作為金標(biāo)準(zhǔn)，確診前患者均行ELISA 和TRUST 檢測(cè)，具體方法如下。

ELISA：(1) 儀器與設(shè)備。ELISA 試劑盒來(lái)源于上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司，采用雙抗體夾心法檢測(cè)，為降低檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)的誤差，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作。(2)檢測(cè)方法。①檢測(cè)前患者需空腹8 h 以上，于次日清晨抽取外周靜脈血2 mL，采用血液離心儀將標(biāo)本血液分離10 min，轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，取最上層血清備用；②將0.05 mL 的碳酸鹽包被緩沖液(pH 值為9.6) 加入血清中稀釋；③將稀釋后的血液標(biāo)本置入聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中孵化，每個(gè)反應(yīng)孔中置入0.1 mL 樣本并用保鮮膜密封好，在-4℃的環(huán)境下進(jìn)行孵育；④孵育后，取出聚苯乙烯板，清除溶液，用緩沖液反復(fù)清洗3 遍，將待檢標(biāo)本置入反應(yīng)孔中，在37℃恒溫箱中孵育60 min，孵育結(jié)束后，反復(fù)沖洗3 遍；⑤制作陽(yáng)性及陰性對(duì)照孔，將0.1 mL酶標(biāo)抗體置入反應(yīng)孔中，進(jìn)行孵育60 min，孵育后清洗，將0.1 mL TMB 溶液進(jìn)行孵育30 min，孵育結(jié)束后，將0.05 mL 2M 硫酸加入反應(yīng)孔中進(jìn)行觀察。

檢驗(yàn)完畢后進(jìn)行TRUST 檢測(cè)，TRUST 試劑盒來(lái)源于上海浩然生物技術(shù)有限公司。

TPPA 檢測(cè)：抽取患者清晨空腹外周血2 mL，血清分離后，采用TPPA 試劑盒檢測(cè)，試劑盒來(lái)源于上海浩然生物技術(shù)有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)

以TPPA 檢測(cè)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)， 對(duì)比ELISA、TRUST 及聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果的診斷符合率。比較ELISA 和TRUST 及聯(lián)合檢測(cè)的靈敏性、特異性。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 18.0 軟件處理，計(jì)數(shù)資料采用n(%)表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用±s表示，行t檢驗(yàn)；繪制ROC 曲線，分析ELISA、TRUST 在梅毒螺旋體感染患者中的診斷效能，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ELISA 檢測(cè)、TRUST 檢測(cè)及二者聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果的診斷符合率比較

疑似梅毒螺旋體感染患者均經(jīng)TPPA 檢查確診，確診49例，確診率為98.00%。ELISA 檢測(cè)確診47例，診斷符合率為95.92%(P＞0.05)；TRUST 檢測(cè)確診41例，診斷符合率為83.67%(P＜0.05)；ELISA 聯(lián)合TRUS 檢測(cè)確診49例，與金標(biāo)準(zhǔn)診斷符合率為100.0%(P＞0.05)。見表1。

表1 ELISA檢測(cè)、TRUST檢測(cè)及其兩者聯(lián)合檢測(cè)診斷符合率與TPPA檢查結(jié)果比較[n(%)]

2.2 ELISA 檢測(cè)、TRUST 檢測(cè)及其兩者聯(lián)合檢測(cè)在梅毒螺旋體感染患者中的診斷效能

ROC 曲線結(jié)果( 見圖1) 表明：ELISA 聯(lián)合TRUST用于梅毒螺旋體感染患者中靈敏度、特異度均高于ELISA 和TRUST 單一檢測(cè)(χ2=5.392、6.782，P=0.021、0.018)。見表2。

表2 ELISA檢測(cè)、TRUST檢測(cè)及其兩者聯(lián)合檢測(cè)在梅毒螺旋體感染患者中診斷效能

圖 1 ELISA 檢測(cè)、TRUST 檢測(cè)及其兩者聯(lián)合檢測(cè)在梅毒螺旋體感染患者中診斷 ROC 曲線

3 討 論

梅毒是一種慢性性傳播疾病，可侵犯多個(gè)器官，如未及時(shí)治療可引起神經(jīng)系統(tǒng)、心血管疾病，甚至危及患者生命。梅毒的病原體是梅青螺旋體，梅毒的傳染源是梅毒患者，主要傳染途徑是性傳播，其次是胎盤傳播、血液傳播[5]。梅毒的早期癥狀不明顯，具有藏匿性，因此需要實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)進(jìn)行診斷。早期診斷有利于控制病情的發(fā)展和傳播，提高治療效果及預(yù)后[6]。

目前，臨床對(duì)于梅毒的檢驗(yàn)以TPPA 方法為主，TPPA 是梅毒血清學(xué)檢查的梅毒特異性抗體反應(yīng)，在判定陽(yáng)性的情況下，需結(jié)合其他的檢查結(jié)果以及臨床癥狀進(jìn)行綜合判斷。臨床將TPPA 檢測(cè)結(jié)果作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是該方法檢測(cè)周期較長(zhǎng)，價(jià)格昂貴，不適合大量樣本的篩查[7]。ELISA 是一種新型檢測(cè)方法，近年來(lái)，被廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)中，檢測(cè)原理是將抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，產(chǎn)生顯色反應(yīng)，通過(guò)顯色情況判斷檢測(cè)的陽(yáng)性或陰性結(jié)果[8]。該檢驗(yàn)方法取樣少、便于操作，可實(shí)現(xiàn)樣本的自動(dòng)化檢驗(yàn)，適用于大量樣本的篩查，使用酶標(biāo)儀做判斷可提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[9]。ELISA檢測(cè)方法中雙抗體夾心法的臨床診斷準(zhǔn)確性最高，雙抗體夾心法是用特異性抗原制作的酶結(jié)合物，具有很高的檢驗(yàn)特異性，從而減少假陰性結(jié)果，提高臨床檢驗(yàn)靈敏性。TRUST 檢測(cè)的靈敏性較低，不使用于早期梅毒的檢測(cè)中[10]。

本研究中，疑似梅毒螺旋體感染患者均經(jīng)TPPA 檢查確診，確診49例，確診率為98.00%。ELISA 檢測(cè)確診47例，診斷符合率為95.92%(P＞0.05)；TRUST檢測(cè)確診41例，診斷符合率為83.67%(P＜0.05)；ELISA 聯(lián)合TRUS 檢測(cè)確診49例，與金標(biāo)準(zhǔn)診斷符合率為100.0%，ROC 曲線結(jié)果表明：ELISA 聯(lián)合TRUST 用于梅毒螺旋體感染患者中靈敏度、特異度均高于ELISA和TRUST 單一檢測(cè)(P＜0.05)，由此說(shuō)明，ELISA、TRUST 用于梅毒螺旋體感染檢測(cè)中具有較高的價(jià)值，且二者聯(lián)合檢測(cè)可獲得較高的靈敏度及特異度。

綜上所述，ELISA 法聯(lián)合TRUST 用于梅毒螺旋體感染患者中能獲得較高的診斷符合率，二者聯(lián)合診斷能提高患者診斷效能，指導(dǎo)臨床診療，值得應(yīng)用。