手足口患兒EV71、CoxA16和其他腸道病毒感染情況及基因型分析

宋莓

(平頂山市新華區(qū)疾病預(yù)防控制中心 檢驗(yàn)科，河南 平頂山 467000)

手足口病是以手、足、口出現(xiàn)水皰為特征的病毒感染類疾病，其中以嬰幼兒較為高發(fā)且傳染性較強(qiáng)，嚴(yán)重影響患兒的身體健康[1-2]。目前，多數(shù)研究學(xué)者普遍認(rèn)為手足口病主要由腸道71 型(EV71) 病毒及柯薩奇A16型腸道(CoxA16) 病毒感染引起，EV71 病毒與CoxA16病毒雖存在類似的基因結(jié)構(gòu)，但CoxA16 病毒感染后并發(fā)癥發(fā)生較少，而EV71 病毒感染后易對(duì)患兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生影響，對(duì)患兒神經(jīng)功能造成安全隱患[3-4]。但近幾年研究中多以病毒感染后病毒株基因序列進(jìn)化為熱點(diǎn)，對(duì)患兒手足口病腸道病毒整體感染情況研究較少[5]。因此，為進(jìn)一步明確患兒手足口病EV71、CoxA16 和其他腸道病毒感染情況，為臨床擬定針對(duì)性的治療方案及患兒中樞神經(jīng)損傷預(yù)防方案，本研究現(xiàn)選擇平頂山市新華區(qū)疾病預(yù)防控制中心收治的104例手足口病患兒進(jìn)行 研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2018年7月至2020年12月收治的104例手足口病患兒作為研究對(duì)象。該研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均出現(xiàn)手足皰疹等癥狀，且均符合《手足口病診療指南(2018年版)》[6]中手足口病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。年齡≤6 歲；患兒家屬簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：存在心臟系統(tǒng)疾病；存在手足口病既往治療史；癥狀明顯好轉(zhuǎn)；重癥休克；臨床資料不完整。

1.2 檢測(cè)試劑及儀器

Hank's 液購(gòu)自上海撫生實(shí)業(yè)有限公司；高純度病毒檢測(cè)試劑盒(HIGH PURE VIRAL RNA Kit) 購(gòu)自上海西寶生物科技有限公司；病毒三重?zé)晒鈾z測(cè)試劑盒購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司；全自動(dòng)流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司。

1.3 方法

(1) 病毒核酸檢測(cè)：入院后，采集患兒糞便及肛拭子標(biāo)本， 加入0.6 mL Hank's 液后重懸，振蕩器渦旋1 min， 加入離心機(jī)(r=8 000 r/min)離心5 min， 取上清， 采用高純度病毒檢測(cè)試劑盒(HIGH PURE VIRAL RNA Kit) 提取病毒核酸后，采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 檢測(cè)對(duì)糞便標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，記錄并整理實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(2) 外周血白細(xì)胞水平檢測(cè)：采集患兒清晨空腹靜脈血4 mL，離心后取上清，采用CytoFLEX型全自動(dòng)流式細(xì)胞儀測(cè)定白細(xì)胞水平。

1.4 觀察指標(biāo)

(1) 患兒腸道病毒病原學(xué)構(gòu)成情況；(2) 患兒EV71病毒及CoxA16 病毒VP1 基因中各基因型同源性分析；(3) 患兒手足口病臨床癥狀及外周血白細(xì)胞分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，并以n(%) 表示；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，多組間計(jì)量資料比較采用F檢驗(yàn)，并以±s表示，P＜0.05 表示差異有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 患兒腸道病毒病原學(xué)構(gòu)成情況

104例手足口病陽(yáng)性樣本中，EV71 病毒感染54例(51.92%)，CoxA16 病毒感染7例(6.73%)，其他腸道病毒感染43例(41.35%)，EV71 病毒感染比例高于CoxA16 病毒感染比例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 患兒腸道病毒病原學(xué)構(gòu)成情況[n(%)]

2.2 患兒EV71 病毒及CoxA16 病毒EVP1 基因中各基因型同源性分析

CoxA16 VP1 基因序列與A、B、C 基因型代表株核苷酸同源性為82.6% ～82.9%，與D 基因型代表株核苷酸同源性為92.7% ～99.2%；EV71 VP1 基因序列與C4基因型代表株核酸同源性為92.4% ～96.8%，與C4a 基因型代表株核苷酸同源性為94.3% ～96.8%，與C4b 基因型代表株核苷酸同源性為92.4% ～93.7%。

2.3 患兒手足口病臨床癥狀及外周血白細(xì)胞分析

EV71 病毒、CoxA16 病毒及其他腸道病毒感染組之間發(fā)熱、皮疹等臨床癥狀所占比例及外周血白細(xì)胞水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。見表2。

表2 患兒手足口病臨床癥狀及外周血白細(xì)胞分析

3 討 論

手足口病作為全球性、急性傳染病，在全球多個(gè)國(guó)家均出現(xiàn)過爆發(fā)流行，該病以傳播速度快、手足口癥狀顯著為主要特征，嚴(yán)重威脅患兒健康成長(zhǎng)[7-8]。既往報(bào)道研究指出[9-10]，EV71 病毒及CoxA16 病毒作為誘發(fā)患兒手足口病最常見的2 種病毒，病毒活性強(qiáng)且與VP1 全長(zhǎng)基因序列同源性較高，可能存在相互作用關(guān)系，加重患兒臨床癥狀。

本研究患兒腸道病毒病原學(xué)構(gòu)成情況顯示，104例手足口病陽(yáng)性樣本中，EV71 病毒54例(51.92%)，CoxA16病毒7例(6.73%)，其他腸道病毒43例(41.35%)，表明EV71 病毒在手足口病患兒病毒感染中占比較重。相關(guān)研究分析[11]，EV71 病毒作為微小病毒科中的腸病毒群，傳染性強(qiáng)，可經(jīng)咽部及腸道入侵患兒機(jī)體，誘發(fā)患兒手足口病等病癥，繼而引起無菌性腦膜炎等并發(fā)癥，對(duì)患兒的身體健康影響較為嚴(yán)重。

本研究中，CoxA16 VP1基因序列與A、B、C 基因型代表株核苷酸同源性為82.6% ～82.9%，與D 基因型代表株核苷酸同源性為92.7% ～99.2%；EV71 VP1 基因序列與C4 基因型代表株核酸同源性為92.4% ～96.8%，與C4a 基因型代表株核苷酸同源性為94.3% ～96.8%，與C4b 基因型代表株核苷酸同源性為92.4% ～93.7%，提示手足口病患兒的CoxA16 及EV71 VP1 基因序列均存在高同源性的病毒株。羅玲玲等[12]通過對(duì)手足口病患兒的CoxA16 及EV71 病毒進(jìn)化樹分析顯示，CoxA16 及EV71 病毒在進(jìn)化樹上分別處于不同分支上，表明手足口病患兒至少存在多個(gè)病毒傳播鏈。此外，有研究發(fā)現(xiàn)[13]，部分手足口病患兒病毒分離株在進(jìn)化樹上呈聚集現(xiàn)象，表明部分手足口病病毒株可能存在共同進(jìn)化來源，具有不同區(qū)域間的傳播性。EV71病毒、CoxA16 病毒及其他腸道病毒感染組之間發(fā)熱、皮疹等臨床癥狀所占比例及外周血白細(xì)胞水平相近，提示手足口病各項(xiàng)腸道病毒誘發(fā)患兒的臨床癥狀表現(xiàn)一致，且對(duì)白細(xì)胞敏感度相當(dāng)。

綜上所述，手足口病患兒中EV71 病毒感染比例相比于CoxA16 病毒感染比例更高；且CoxA16 及EV71 VP1 基因序列均存在高同源性的病毒株；但各病毒株感染后臨床癥狀表現(xiàn)幾乎一致。但介于本研究樣本量較少，后續(xù)臨床研究中仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，對(duì)患兒腸道病毒感染情況進(jìn)行分析，為臨床實(shí)踐提供參考。