乳腺癌P53表達與預(yù)后生存時間的相關(guān)性

趙建鵬

（河南省三門峽市靈寶市第一人民醫(yī)院 靈寶472500）

乳腺癌作為一種常見的惡性腫瘤，主要見于女性，我國北方的發(fā)病率多于南方。該病的病因包括飲酒、空氣污染、遺傳、吸煙等因素。近些年來，雖然治療水平取得了長足進步，但乳腺癌5年生存率仍無顯著提高。究其原因主要是因為手術(shù)以及化療后腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移導(dǎo)致了乳腺癌的治療失敗，尤其處于進展期的患者更容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)的現(xiàn)象。在進行根治術(shù)后，大約有一半患者因為發(fā)生轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)而死亡[1]。因此想要延長患者的生存期及改善患者的預(yù)后，就需要在促進乳腺癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)機制方面進行著重研究?，F(xiàn)代研究表明，腫瘤細胞的增殖最終導(dǎo)致腫瘤細胞的形成，其發(fā)生和發(fā)展會涉及多環(huán)節(jié)、多中心以及多通路[2]。目前，腫瘤組織學(xué)分類、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、原發(fā)腫瘤大小等為傳統(tǒng)上判斷乳腺癌病情的臨床指標，但其具有異形的局限性，無法滿足對患者預(yù)后判斷的要求[3]。P53是目前研究最為深入的抑癌基因，由393個氨基酸構(gòu)成，按結(jié)構(gòu)及功能分成轉(zhuǎn)錄激活區(qū)、序列特異性DNA結(jié)合區(qū)、C端寡聚化區(qū)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)，通常情況下上述任何區(qū)域的異常都可導(dǎo)致P53功能失活和細胞的惡變[4]。本研究采用免疫組化技術(shù)，檢測入選病例的乳腺癌組織和癌旁正常組織中P53的表達情況，并結(jié)合乳腺癌患者主要的臨床病理特征與隨訪參數(shù)，探討乳腺癌P53表達與預(yù)后生存時間的相關(guān)性。現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2017年8月～2019年4月收治的乳腺癌患者120例為研究對象，患者年齡28～77歲，平均（56.12±3.25）歲。納入標準：臨床診斷為Ⅰ期、Ⅱ期乳腺癌患者；可進行免疫組化研究并保存完好的腫瘤原發(fā)灶蠟塊患者；隨訪資料能夠完整搜集患者；對本研究知情，自愿參與并簽署知情同意書患者。排除標準：合并嚴重臟器損傷者；術(shù)前經(jīng)過治療患者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

1.2 檢測方法 采用免疫組化法檢測患者病灶組織標本和癌旁組織標本中P53表達情況。取所有患者的病灶組織標本（觀察組）與癌旁組織標本（對照組），組織標本經(jīng)4%甲醛固定，于濃度梯度酒精中脫水，二甲苯中浸潤觀察組織塊至透明為止。用石蠟Ⅰ（＜60℃，1 h）浸潤、石蠟Ⅱ（60℃，2 h）包埋后制成石蠟組織塊，用石蠟切片機采用5μm厚度連續(xù)切片，常規(guī)制片、封片。試劑來源：所用試劑P53一抗（兔抗人多克隆抗體）購于美國ProteinTech Group,Inc公司，免疫組化通用試劑盒和顯色劑購于武漢博士德生物技術(shù)有限公司，其他常規(guī)試劑均為國產(chǎn)分析純試劑。P53一抗最佳的抗體滴度為1:100，每批染色均設(shè)立對照組，以PBS代替一抗為陰性空白對照，隨機計數(shù)5個高倍鏡視野（×400），對癌細胞的數(shù)目進行統(tǒng)計，同時統(tǒng)計表達陽性細胞數(shù)，并觀察顯色度。陽性強度采用半定量法，按陽性細胞占癌細胞的百分數(shù)評分，結(jié)果觀察采用盲法。

1.3 觀察指標 患者的隨訪時間截止到2020年1月1日，記錄患者的生存時間和生存率，同時調(diào)查患者的臨床病理特征，包括臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織學(xué)分化、發(fā)病位置、腫瘤大小等。統(tǒng)計兩組病灶組織標本和癌旁組織標本中P53表達情況。分析P53表達陽性與患者年齡、發(fā)病部位、腫瘤大小、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，預(yù)后生存時間與P53表達、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，分析患者預(yù)后生存時間的影響因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.00統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)數(shù)據(jù)以%表示，行χ2檢驗。采用Spearman相關(guān)分析對各指標間相關(guān)性進行分析，影響因素采用Logistic回歸分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組P53表達陽性率對比 觀察組P53表達陽性率為10.00%，顯著低于對照組的72.50%（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組P53表達陽性率對比

2.2 不同病理特征乳腺癌患者的P53表達陽性率對比 在觀察組中，年齡≥54歲與年齡＜54歲、發(fā)病位置左側(cè)與發(fā)病位置右側(cè)、腫瘤直徑≥4 cm與腫瘤直徑＜4 cm患者P53表達陽性率對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；組織學(xué)高/中分化與低分化、臨床分期Ⅰ期與Ⅱ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移患者P53表達陽性率對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同病理特征乳腺癌患者的P53表達陽性率對比

2.3 隨訪情況 所有患者隨訪時間截至2020年1月1日，生存105例，死亡15例，生存率為87.50%，平均生存時間為（23.21±0.24）個月。

2.4 預(yù)后生存時間與臨床特征、P53表達的相關(guān)性分析 在觀察組中，Spearman相關(guān)分析顯示，預(yù)后生存時間與P53表達、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都存在相關(guān)性（P＜0.05）。見表3。

表3 乳腺癌患者預(yù)后生存時間與臨床特征、P53表達的相關(guān)性分析（n=120）

2.5 預(yù)后生存時間影響因素分析 此次分析的因變量為預(yù)后生存時間，自變量選擇P53表達（陽性=1，陰性=0）、臨床分期（Ⅰ期=1，Ⅱ期=0）、組織學(xué)分化（低分化=1，高/中分化=0）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（是=1，否=0）等。Logistic回歸分析顯示，影響預(yù)后生存時間的重要因素包括P53表達、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05）。見表4。

表4 影響乳腺癌患者預(yù)后生存時間的多因素分析（n=120）

3 討論

乳腺癌在臨床上較為常見，屬于惡性腫瘤之一?；颊呤中g(shù)之后，可能會出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，這是一個多步驟且多因素的病理過程，具有一定的復(fù)雜性。腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的每一個環(huán)節(jié)與不同的作用因素相關(guān)，同時也存在多種不同的基因參與。乳腺癌具有相對較長的發(fā)生和發(fā)展過程，其原因為細胞非正常增殖，在增殖過程較快時，腫瘤的局部組織會發(fā)生缺氧并產(chǎn)生一種供能與耗能之間的不平衡狀態(tài)。

P53在胃癌、食管癌、白血病、肺癌等人類多種惡性腫瘤組織中表達下調(diào)或缺失，而這種表達下調(diào)或缺失的現(xiàn)象是由于mRNA表達減少或穩(wěn)定性下降有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，觀察組的P53表達陽性率為10.00%，顯著低于對照組的72.50%（P＜0.05）。在觀察組中，年齡≥54歲與年齡＜54歲，發(fā)病位置左側(cè)與發(fā)病位置右側(cè)，腫瘤直徑≥4 cm與腫瘤直徑＜4 cm患者P53表達陽性率對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；組織學(xué)高/中分化與低分化，臨床分期Ⅰ期與Ⅱ期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移患者P53表達陽性率對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在P53基因的抗腫瘤機制中，P53可引起G0/G1期和G2/M期阻滯；P53與參與DNA合成，修復(fù)及凋亡的蛋白結(jié)合，形成蛋白復(fù)合體調(diào)節(jié)凋亡的發(fā)生。當前也有研究顯示，P53具有抑制腫瘤分化與浸潤發(fā)展的作用，也可抑制腫瘤的遠處轉(zhuǎn)移。乳腺癌細胞的增殖是一個抑癌基因失活、癌基因激活的過程，已有研究顯示P53在病理狀態(tài)下，其表達會被抑制，這能夠?qū)毎饣|(zhì)和基底膜的降解進行調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)方式可以是直接調(diào)節(jié)，也可以是間接調(diào)節(jié)，從而參與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和浸潤過程，從而對乳腺癌患者的病理特征發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。此外，研究還表明在接受了化療的乳腺癌患者中，細胞核內(nèi)P53蛋白的積聚與局部治療失敗有強相關(guān)性，P53的表達水平還可幫助預(yù)測乳腺癌化療的耐藥性[5]。

本研究所有患者隨訪時間截至2020年1月1日，生存105例，死亡15例，生存率為87.50%，平均生存時間為（23.21±0.24）個月；Spearman相關(guān)分析顯示，預(yù)后生存時間與P53表達、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都存在相關(guān)性（P＜0.05）；Logistic回歸分析顯示，影響預(yù)后生存時間的重要因素包括P53表達、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等（P＜0.05）。從機制上分析，P53作為一種潛在的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，在人類不同腫瘤中，水平存在差異[6]。若P53發(fā)生一定的變化，能夠通過微管促使形成癌細胞染色體非整倍性，這在腫瘤發(fā)展方面具有一定促進作用。P53表達下降還可以進一步通過調(diào)控并加強MMP-13蛋白在癌組織中的過表達或激活，增強了癌細胞破壞和降解周圍細胞外基質(zhì)以及基底膜的能力，更加有助于促進癌組織的浸潤、轉(zhuǎn)移[7]。

綜上所述，乳腺癌患者P53呈現(xiàn)表達較低的情況，與患者的臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等存在顯著的相關(guān)性，也會對預(yù)后生存時間的重要因素產(chǎn)生影響。