三陰性乳腺癌組織中FOXJ1、SATB1的表達(dá)變化及臨床意義

付飛國 王憶麗 雷秋模

南昌市第三醫(yī)院乳腺外科，江西南昌 330009

乳腺癌的死亡率與發(fā)病率位居女性腫瘤疾病首 位，近幾年乳腺癌的發(fā)病率和死亡率呈逐年上升，嚴(yán)重影響女性的身心健康[1]。而三陰性乳腺癌在所有乳腺癌中死亡率最高，5 年預(yù)后生存率不足30%[2]。目前主要依賴TNM 分期對三陰性乳腺癌患者預(yù)后進(jìn)行判定[3]。叉頭框蛋白J1（FOXJ1）是FOX 蛋白家族成員，是一種轉(zhuǎn)錄因子，在胚胎發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)以及腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用[4-5]。核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白質(zhì)1（SATB1）在胰腺癌和前列腺癌等腫瘤中表達(dá)較高，參與基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾過程，在腫瘤轉(zhuǎn)移及侵襲調(diào)控中起重要作用[6-7]。有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXJ1 和SATB1 在胃癌中均出現(xiàn)表達(dá)，且共同參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展過程[8]，然而目前臨床上關(guān)于三陰性乳腺癌FOXJ1 和SATB1 的研究報(bào)道較少，因此筆者進(jìn)行此研究。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014 年2 月—2015 年3 月南昌市第三醫(yī)院行三陰性乳腺癌根治術(shù)治療的98 例患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料完整；②病理學(xué)診斷確診為三陰性乳腺癌，符合三陰性乳腺癌的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①全身免疫性缺陷及肝腎功能障礙；②患者并發(fā)其他惡性腫瘤；③未行腫瘤根治術(shù)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 試劑與方法

手術(shù)切除的腫瘤組織及相應(yīng)的癌旁組織（距離腫瘤邊緣＞2 cm）先進(jìn)行常規(guī)的中性甲醛（諸暨市和諧科技有限公司，產(chǎn)品編號：59400402551）固定，然后切取部分進(jìn)行酒精梯度脫水，脫水結(jié)束后放于二甲苯中透明，然后用生物組織包埋機(jī)（北京伊萊爾醫(yī)療設(shè)備有限公司，型號：MB2271）對組織進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋，制備組織切片。組織切片制備成功后先放于烘箱加熱脫蠟，然后放于二甲苯和梯度酒精進(jìn)行脫蠟水化，將水化后的組織切片置于37℃濕盒中使用3%過氧化氫（廣東恒健制藥有限公司，批號：0299001）孵育20 min，將孵育完成的組織切片放于高壓鍋中進(jìn)行抗原修復(fù)后在37℃封閉液中孵育30 min。孵育結(jié)束后在切片組織周圍用組化筆畫圈并在組織上滴加Anti-FOXJ1抗體或Anti-SATB1（德國ACAM 生物科技有限公司，貨 號：ab235445、ab109122）抗體，抗體加完后置于4℃冰箱過夜。次日清洗后滴加二抗，然后置于37℃恒溫箱孵育30 min，最后用二氨基聯(lián)苯胺法（四川海諾威科技有限公司，貨號：91-95-2）進(jìn)行顯色，并用蘇木精（南京春秋生物工程有限公司，貨號：517-28-2）進(jìn)行復(fù)染，最后對組織切片進(jìn)行脫水、透明和固定。染色完成后將組織切片置于倒置生物顯微鏡（上海市德意曼醫(yī)療器械有限公司，型號：DYM-5100）下觀察染色結(jié)果。根據(jù)細(xì)胞陽性數(shù)可分為5 個(gè)等級，每個(gè)等級對應(yīng)記0～4 分，陽性細(xì)胞比例≤5%記0 分，5%＜陽性細(xì)胞比例＜25%記1 分，25%≤陽性細(xì)胞比例＜50%記2 分，50%≤陽性細(xì)胞比例＜75%記3 分，陽性細(xì)胞比例≥75%記4 分。根據(jù)染色強(qiáng)度將切片分為4 個(gè)等級，無色記0 分，淡黃色記1 分，棕黃色記2 分，棕褐色記3 分，最后將陽性細(xì)胞數(shù)評分和染色強(qiáng)度評分相乘得到最終評分并按等級分為陰性和陽性，其中0～4 分為陰性、5～12 分為陽性[10]。

通過復(fù)查和電話對患者進(jìn)行隨訪，隨訪截止時(shí)間為2020 年3 月，根據(jù)生存情況統(tǒng)計(jì)所有患者生存時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；Kaplan-Meier 法進(jìn)行生存分析，生存率比較采用Logrank 檢驗(yàn)。FOXJ1 和SATB1 表達(dá)相關(guān)性用Pearson 法分析。以P <0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三陰性乳腺癌組織及癌旁組織中的SATB1 和FOXJ1 的表達(dá)

FOXJ1 主要表達(dá)在細(xì)胞核，SATB1 主要表達(dá)在細(xì)胞膜細(xì)胞外。免疫組化結(jié)果顯示，三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 陽性率為31.63%（31/98）低于癌旁組織的60.20%（59/98），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=16.107，P <0.001），見圖1A～B。三陰性乳腺癌組織中SATB1陽性率為72.45%（71/98），高于癌旁組織的23.47%（23/98），差異高度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=47.099，P <0.001），圖1C～D。

圖1 FOXJ1 和SATB1 在不同組織中的表達(dá)情況（免疫組化，400×）

2.2 三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 表達(dá)和臨床參數(shù)的關(guān)系

三陰性乳腺癌組織中，不同F(xiàn)OXJ1 表達(dá)與TNM分期及腫瘤分化程度有關(guān)（P<0.05 或P<0.01）；不同SATB1 表達(dá)與腫瘤浸潤深度、TNM 分期以及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)（P <0.05 或P <0.01）。見表1。

表1 三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系（例）

2.3 三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 的表達(dá)相關(guān)性

三陰性乳腺癌中，F(xiàn)OXJ1 表達(dá)與SATB1 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.625，P <0.05）。

2.4 三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 的表達(dá)和患者預(yù)后之間的關(guān)系

對數(shù)據(jù)進(jìn)行Kaplan-Meier 生存曲線分析，結(jié)果顯示，SATB1 陽性患者5 年總生存率為35.2%（25/71）低于陰性患者的59.3%（16/27），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.170，P ＜0.001），圖2A。FOXJ1 陽性患者5 年總生存率為64.5%（20/31），高于陰性患者的31.3%（21/67），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=22.386，P ＜0.001），圖2B。

圖2 三陰性乳腺癌組織FOXJ1 和SATB1 表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

3 討論

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，并且其發(fā)病率有不斷升高的趨勢[11]。三陰性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展不依賴于體內(nèi)激素的表達(dá)，對靶向治療藥物的治療效果較差，只能通過放化療延長患者生存期，預(yù)后不佳[12-13]。乳腺癌的發(fā)生涉及多種癌基因的異常激活及抑癌基因的失活，引起腫瘤細(xì)胞的惡性增殖及轉(zhuǎn)移等[14-15]。尋找導(dǎo)致三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵驅(qū)動基因，有助于尋找新的治療藥物及治療方案。

FOXJ1 基因位于人類染色體17q25.1，該基因編碼蛋白屬于轉(zhuǎn)錄因子叉頭框家族的成員，具有調(diào)節(jié)控制纖毛產(chǎn)生及運(yùn)動的生物學(xué)功能，參與調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲、增殖等惡性生物學(xué)過程[16-18]。本研究結(jié)果顯示，三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 表達(dá)下降，提示FOXJ1在三陰性乳腺癌中可能作為抑癌基因，參與三陰性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在MDA-MB-231、HCC1937 和HCC1806 等三陰性乳腺癌細(xì)胞系中FOXJ1 有表達(dá)下調(diào)的現(xiàn)象[19]，與本研究的結(jié)果一致。目前對于FOXJ1 表達(dá)下調(diào)的具體分子機(jī)制尚不清楚，可能與其他轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控和蛋白酶體降解有關(guān)。在胃癌的研究中發(fā)現(xiàn)，miR-6852 可以結(jié)合FOXJ1 的信使RNA，進(jìn)而抑制FOXJ1 表達(dá)及功能，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和增殖[20]。同時(shí)，TNM 分期越高、腫瘤分化程度越差的三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 表達(dá)越低。其機(jī)制可能是腫瘤中FOXJ1 能夠下調(diào)細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶通路蛋白如絲裂原活化的蛋白激酶1等的表達(dá)，抑制細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶通路的活化，發(fā)揮抑癌基因的功能，F(xiàn)OXJ1 的表達(dá)下調(diào)激活細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶通路下游靶基因，如c-met、血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖浸潤及轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展[16]。FOXJ1 低水平能夠反映患者的不良預(yù)后，能夠成為新的三陰性乳腺癌預(yù)后相關(guān)標(biāo)志物。其原因可能與FOXJ1 的低表達(dá)多發(fā)生在惡性程度較高的腫瘤當(dāng)中，F(xiàn)OXJ1 表達(dá)降低導(dǎo)致對絲氨酸-蘇氨酸激酶信號通路活化抑制作用減弱，進(jìn)而引發(fā)腫瘤細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移，最終加快癌癥進(jìn)展，縮短預(yù)后生存[21]。

SATB1 基因位于3p24.3，該基因編碼蛋白作為一種基質(zhì)蛋白，參與募集染色質(zhì)重塑因子以調(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。研究顯示，SATB1 在促進(jìn)腫瘤上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中起到重要的調(diào)節(jié)作用，并調(diào)控細(xì)胞氧化應(yīng)激等病理生理過程[22]。本研究結(jié)果顯示，三陰性乳腺癌組織中SATB1 陽性占比高于癌旁組織（P <0.01），其機(jī)制可能與結(jié)合到SATB1 基因啟動子上的組蛋白乙?；缴哂嘘P(guān)，如在結(jié)直腸癌當(dāng)中，乙?；揎椀慕M蛋白結(jié)合到SATB1 基因啟動子區(qū)，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而起到促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用[23]。此外，不同SATB1 表達(dá)與腫瘤浸潤深度、TNM 分期以及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)聯(lián)（P <0.05 或P <0.01），提示SATB1 能夠作為一種促癌基因，促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展。研究報(bào)道顯示，在乳腺癌中SATB1 能夠促進(jìn)E 型鈣黏蛋白的表達(dá)，使得乳腺癌細(xì)胞易發(fā)生局部浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展[24]。此外，SATB1 高表達(dá)患者的預(yù)后較差，癌組織中SATB1 的表達(dá)程度可反映三陰性乳腺癌患者的預(yù)后生存情況。

本研究結(jié)果顯示，三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示在三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中FOXJ1 和SATB1 均起到一定調(diào)節(jié)作用。研究表明，喉鱗狀細(xì)胞癌中，F(xiàn)OXJ1 作為轉(zhuǎn)錄抑制因子，能夠與組蛋白結(jié)合并抑制其乙?；?，組蛋白乙?；较抡{(diào)而抑制SATB1 啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成，抑制SATB1 表達(dá)，進(jìn)而抑制腫瘤進(jìn)展[25]。但三陰性乳腺癌中SATB1 是否是FOXJ1 的靶基因以及二者在三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展中是否發(fā)揮關(guān)鍵作用仍需進(jìn)一步深入探究。

綜上所述，三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 低表達(dá)，SATB1 高表達(dá)，共同參與三陰性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程，并與三陰性乳腺癌患者的預(yù)后相關(guān)，有可能成為三陰性乳腺癌患者預(yù)后預(yù)測和治療的潛在標(biāo)志物。