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    塔羅科血橙新系炭疽病發(fā)生情況調(diào)查及防治藥劑篩選

    2021-07-28 23:19陳泉黃仁軍馮小華羊練何錦輝
    南方農(nóng)業(yè)·上旬 2021年5期
    關(guān)鍵詞:炭疽病

    陳泉 黃仁軍 馮小華 羊練 何錦輝

    摘 要 塔羅科血橙新系在我國(guó)發(fā)展面積不斷增大,品牌效應(yīng)已初步顯現(xiàn)。川渝地區(qū)作為塔羅科血橙新系主產(chǎn)區(qū),炭疽病發(fā)生普遍,而相關(guān)研究報(bào)道鮮少。為弄清炭疽病在塔羅科血橙產(chǎn)區(qū)的發(fā)生情況, 2019—2021年在四川資中、富順,重慶萬(wàn)州、長(zhǎng)壽等11個(gè)市、縣、區(qū),采集樣品239份進(jìn)行病原檢測(cè),并開(kāi)展了田間藥效試驗(yàn)。結(jié)果表明:1)在239份樣品中,151份樣品感染了炭疽病,檢出率為63.18%,其中有89份表現(xiàn)為強(qiáng)致病性,發(fā)病較為普遍;2)炭疽病主要為害葉片,田間發(fā)病程度整體較輕;3)發(fā)病率最低為重慶開(kāi)州的44.83%,最高為重慶萬(wàn)州的90.24%,可能與塔羅科血橙主產(chǎn)區(qū)縣處于三峽庫(kù)區(qū)的高溫高濕、寡日照氣候有關(guān)。4)炭疽病引起的采后貯藏病害不容小視,田間藥效試驗(yàn)結(jié)果顯示,6月中旬、6月底、7月中旬及采前20 d,使用25%咪鮮胺乳油2 000~3 000倍液+97%礦物油150~200倍液各防治一次,不僅可有效防治田間炭疽病害,還可明顯減輕采后炭疽病的發(fā)病率,可推廣使用。

    關(guān)鍵詞 塔羅科血橙新系;炭疽病;發(fā)生情況;防治藥劑;川渝地區(qū)

    中圖分類(lèi)號(hào):S436.661.1+4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A DOI:10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.13.008

    塔羅科血橙新系(C. sinensis ‘Tarocco)是20世紀(jì)60年代以來(lái),依托農(nóng)業(yè)部柑橘948項(xiàng)目、國(guó)家農(nóng)業(yè)部八五重點(diǎn)攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目等,由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所牽頭,聯(lián)合相關(guān)單位,從意大利引入三峽庫(kù)區(qū)試種,后從其實(shí)生后代中篩選出一個(gè)優(yōu)良變異單株,并在川渝多地進(jìn)行了品種觀察和生態(tài)適應(yīng)性評(píng)價(jià)。四川富順、資中,重慶萬(wàn)州、長(zhǎng)壽等地海拔500 m以下的區(qū)域,年日照時(shí)數(shù)達(dá)到1 300 h,最冷月氣溫6~8 ℃,少霜凍,2—4月氣溫平穩(wěn),降雨量少,非常適宜塔羅科血橙著色和越冬,表現(xiàn)出了良好的優(yōu)質(zhì)豐產(chǎn)特性。因此,川渝兩地的塔羅科血橙逐步發(fā)展壯大,成為我國(guó)塔羅科血橙主產(chǎn)區(qū),種植規(guī)模達(dá)5萬(wàn)公頃,形成獨(dú)具特色的地方農(nóng)業(yè)支柱產(chǎn)業(yè)[1]。

    在我國(guó),炭疽病是柑橘發(fā)生最普遍的病害之一,在所有柑橘產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生,發(fā)病重的果園病株率在90%以上,冬、春落葉率40%~50%,有的果園甚至絕收[2]。病菌可為害柑橘各個(gè)部位,具有弱寄生性和潛伏侵染特性,在貯藏期還可繼續(xù)發(fā)病引起爛果[3-4]。柑橘炭疽病可進(jìn)行多次再侵染,常造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[5-7]。

    通常,國(guó)內(nèi)對(duì)柑橘炭疽病的防治常常與輪斑病、褐斑病、黑斑病、青霉病、綠霉病防治等結(jié)合起來(lái),很少將柑橘炭疽病單獨(dú)作為防治指標(biāo)。柑橘炭疽菌的主要寄主之一是甜橙類(lèi)[4],而塔羅科血橙新系就屬于甜橙類(lèi),是晚熟柑橘中的一類(lèi)重要寄主。幾乎所有塔羅科血橙新系每年都要環(huán)割修剪2~3次,越來(lái)越多的新品種高換等造成的傷口,易引發(fā)侵染危害[8]。近年來(lái),塔羅科血橙新系主產(chǎn)區(qū)炭疽病發(fā)生率有上升趨勢(shì),且現(xiàn)有防治措施的防效低下,常常導(dǎo)致嚴(yán)重落果和采后貯藏病害,從而帶來(lái)直接經(jīng)濟(jì)損失。本研究對(duì)川渝地區(qū)塔羅科血橙炭疽病發(fā)病情況進(jìn)行了調(diào)查,并開(kāi)展了田間藥效試驗(yàn),以期為掌握柑橘炭疽病的發(fā)生情況和防治技術(shù)提供數(shù)據(jù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 炭疽樣品

    2019—2021年,在重慶長(zhǎng)壽、開(kāi)州、奉節(jié)、云陽(yáng)、涪陵,四川資中、富順、內(nèi)江等地采集疑似柑橘炭疽病癥狀的樣品(果實(shí)、枝條、葉片),共收集樣品239份。

    1.1.2 PDA培養(yǎng)基

    馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,瓊脂15~20 g,煮沸后定容至1 L,121 ℃滅菌30 min。

    1.1.3 供試藥劑

    25%吡唑醚菌酯懸浮劑(山東康喬生物科技有限公司),97%礦物油[上海滬聯(lián)生物藥業(yè)(夏邑)股份有限公司],80%代森錳鋅可濕性粉劑(利民化工股份有限公司),25%多菌靈可濕性粉劑(江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司),25%咪鮮胺乳油(山東華陽(yáng)農(nóng)藥化工集團(tuán))。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 病原分離鑒定

    菌株的分離采用組織分離方法,參考《植病研究法》(方中達(dá)編著,1979),單孢純化后,接種到PDA培養(yǎng)基斜面中,25 ℃培養(yǎng)長(zhǎng)出菌落后,4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.2 直接PCR分子檢測(cè)

    實(shí)驗(yàn)用通用引物ITS4(5′-TCCTCCGCTATGATATGC-3′)和ITS5(5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′),采用直接PCR進(jìn)行擴(kuò)增。直接PCR反應(yīng)體系:2×Taq PCR Master Mix15ul(2×H-TECH SYBR qPCR Mix videgene Cat. GDQ3003),上下游引物各0.5 μL,ddH2O 14 μL,菌絲少量。反應(yīng)條件為:預(yù)變性95 ℃ 3 min;95 ℃變性10 s,56 ℃退火30 s;72 ℃延伸20 s,44個(gè)循環(huán);72 ℃延伸 5 min。擴(kuò)增出條帶后,用1%瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè),核酸染料為低毒的Gel Red染料。

    1.2.3 ITS序列比對(duì)

    將陽(yáng)性菌株的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送上海生工生物公司單向測(cè)序,對(duì)測(cè)得序列刪除引物序列,在NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)進(jìn)行 Blast 檢索,比對(duì)菌株是否為炭疽菌。

    1.2.4 致病性鑒定

    選取健康的塔羅科血橙新系果實(shí),用75%乙醇表面消毒5 min,無(wú)菌水清洗2~3次,然后用無(wú)菌紗布擦干。針刺果實(shí)腰部果皮10針,在針刺處接種菌株菌絲塊,25 ℃下保濕培養(yǎng),觀察并記錄發(fā)病情況。每菌株重復(fù)3次,以針刺果實(shí)不接種菌絲塊為對(duì)照。

    根據(jù)檢測(cè)結(jié)果,計(jì)算發(fā)病率。

    發(fā)病率(%)=檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品數(shù)/檢測(cè)樣品總數(shù)×100

    1.2.5 田間藥效試驗(yàn)

    2019—2020年,選擇萬(wàn)州區(qū)甘寧鎮(zhèn)南橋村炭疽病發(fā)病嚴(yán)重的天奧果園開(kāi)展田間藥效試驗(yàn),樹(shù)齡10年,長(zhǎng)勢(shì)一致。試驗(yàn)設(shè)置6個(gè)處理(見(jiàn)表1),每個(gè)處理重復(fù)3次,共計(jì)18個(gè)小區(qū),每個(gè)小區(qū)5株柑橘樹(shù),隨機(jī)區(qū)組排列,小區(qū)間及試驗(yàn)田四周設(shè)有保護(hù)行。采用電動(dòng)噴霧器噴霧,先噴清水對(duì)照,然后噴試驗(yàn)藥劑。噴施藥劑時(shí)按照濃度由低到高的順序進(jìn)行,換藥前清洗干凈噴霧器。2019年6月12日、6月28日、7月15日各噴藥1次,采前20 d再?lài)?次,其他管理正常進(jìn)行。在2019年8月2日、2020年1月22日調(diào)查防效,以及采后10 d、采后20 d、采后30 d分別調(diào)查果實(shí)發(fā)病情況,試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件分析。每樹(shù)分東南西北4個(gè)方位,隨機(jī)調(diào)查2個(gè)枝條的全部葉片及5個(gè)果實(shí),調(diào)查葉片和果實(shí)上病斑情況,計(jì)算病情指數(shù)。

    病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):0級(jí),無(wú)病;1級(jí),每葉(果)1~5個(gè)病斑或每葉(果)病斑面積占葉(果)面積5%以下;3級(jí),每葉(果)6~10個(gè)病斑或每葉(果)病斑面積占葉(果)面積6%~10%;5級(jí),每葉(果)11~15個(gè)病斑或每葉(果)病斑面積占葉(果)面積11%~25%;7級(jí),每葉(果)16~20個(gè)病斑或每葉(果)病斑面積占葉(果)面積26%~50%;9級(jí),每葉(果)21個(gè)病斑以上或每葉(果)病斑面積占葉(果)面積51%以上。

    病情指數(shù)=∑[(各級(jí)病葉(果)數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值)]/[調(diào)查總?cè)~(果)數(shù)×9]×100;

    防治效果(%)=(空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)×100。

    1.2.6 采后發(fā)病情況調(diào)查

    2月25日進(jìn)行采收,每樹(shù)分東南西北4個(gè)方位,隨機(jī)采收5個(gè)果實(shí),每個(gè)處理共采收100個(gè)果實(shí),每個(gè)處理的果實(shí)放入1個(gè)果框,室內(nèi)通風(fēng)陰涼處貯藏,分別在采后10 d、20 d、30 d調(diào)查果實(shí)發(fā)病情況,計(jì)算病情指數(shù)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 塔羅科血橙炭疽病發(fā)病情況調(diào)查

    經(jīng)病原分離、PCR檢測(cè)和致病性鑒定,在239份樣品中,有151份樣品感染了炭疽病,檢出率為63.18%,其中89份表現(xiàn)為強(qiáng)致病性,發(fā)病部位涉及葉片、枝梢、果實(shí)等,尤以葉片為重,主要表現(xiàn)為葉片尤其嫩葉上有圓形斑點(diǎn),子實(shí)體輪紋狀排列,以及葉尖出現(xiàn)急性“V”字形失水枯萎等兩種癥狀;果實(shí)發(fā)病其次,一般表現(xiàn)為成熟期果實(shí)出現(xiàn)干疤、腐爛等癥狀。發(fā)病嚴(yán)重的會(huì)造成樹(shù)勢(shì)衰弱,成熟期病果多,落葉、落果嚴(yán)重,或引發(fā)貯藏期腐爛。

    從采樣地點(diǎn)來(lái)看,塔羅科血橙主產(chǎn)區(qū)均表現(xiàn)出一定程度的發(fā)病,發(fā)病率最低的是重慶開(kāi)州的44.83%,最高為重慶萬(wàn)州的90.24%,這一結(jié)果也與筆者走訪調(diào)查結(jié)果相符。根據(jù)筆者走訪調(diào)查和室內(nèi)檢測(cè)結(jié)果,重慶地區(qū)的柑橘炭疽病發(fā)病率顯著高于四川地區(qū),可能與塔羅科血橙主產(chǎn)區(qū)縣處于三峽庫(kù)區(qū)地帶有關(guān)。萬(wàn)州區(qū)為塔羅科血橙主產(chǎn)區(qū),近年來(lái)規(guī)?;l(fā)展迅速,種植水平較高,果實(shí)品質(zhì)優(yōu)良,但因三峽庫(kù)區(qū)高溫高濕、寡日照的氣候條件,以及炭疽病弱寄生性和潛伏侵染特點(diǎn),萬(wàn)州塔羅科血橙發(fā)病較其他地區(qū)嚴(yán)重。

    2.2 田間藥效試驗(yàn)

    2.2.1 不同處理對(duì)塔羅科血橙炭疽病的防治效果

    病情調(diào)查在2019年8月2日和2020年1月22日進(jìn)行,這時(shí)病情已經(jīng)穩(wěn)定,病斑癥狀明顯,較容易辨別區(qū)分。由調(diào)查數(shù)據(jù)可知(表4),試驗(yàn)所選用的藥劑對(duì)葉片和果實(shí)炭疽病均有防效,均表現(xiàn)為處理4>處理1>處理5>處理2>處理3。

    在兩次調(diào)查中,處理4用25%咪鮮胺乳油配合97%礦物油的防效最高,葉片防效達(dá)85.83%,果實(shí)防效85.03%,顯著高于其他處理;處理1用25%苯醚甲環(huán)唑乳油配合97%礦物油的防效其次,葉片防效為78.81%,果實(shí)防效80.22%;兩次調(diào)查防效最低的都是處理3(80%代森錳鋅可濕性粉劑),分別為50.74%、54.90%。在8月2日進(jìn)行的葉片發(fā)病調(diào)查中,經(jīng)過(guò)三次施藥后,各處理炭疽病病情指數(shù)較對(duì)照有明顯降低,且處理間差異極顯著;在1月22日塔羅科血橙成熟期的調(diào)查中,處理2與處理5之間的防效差異不顯著。兩次調(diào)查中,處理4用處理5同樣的藥劑復(fù)配礦物油,防效均提升15%以上,處理1的防效也較處理2提升了15%以上,由此可見(jiàn),柑橘炭疽病的防治,要選對(duì)藥劑,科學(xué)選用復(fù)配藥劑或助劑,殺菌效果更好。

    2.2.2 果實(shí)采后發(fā)病情況

    由表4可知,采后常規(guī)貯藏10 d后調(diào)查果實(shí)發(fā)病情況,各處理的病情指數(shù)均很低,對(duì)照也僅為20.1,防治效果均在50%以下。分析可能與塔羅科血橙新系果實(shí)降酸慢、成熟晚、耐貯藏等性能有關(guān),采后10 d,整體發(fā)病較少,因而藥劑防治效果很難表現(xiàn)。隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng),采后20 d的調(diào)查結(jié)果顯示,各處理的防效與田間調(diào)查趨勢(shì)一致,表現(xiàn)為處理4>處理1>處理5>處理2>處理3;對(duì)照處理的病情指數(shù)迅速增加,各處理之間的防效差異極顯著,處理4的防效最高,達(dá)82.65%,處理3的防效最低,為58.59%。采后30 d的調(diào)查結(jié)果顯示,處理4的防效仍然最高,為82.47%,較處理5高14%,二者差異極顯著;處理1的防效較處理2高15%,二者差異極顯著。

    3 小結(jié)與討論

    本研究開(kāi)展了四川、重慶兩地的塔羅科血橙炭疽病發(fā)生情況調(diào)查及防治藥劑篩選試驗(yàn)。我們對(duì)柑橘炭疽病的傳統(tǒng)認(rèn)知是發(fā)病普遍,危害嚴(yán)重,防治較易。針對(duì)塔羅科血橙這一優(yōu)勢(shì)特色產(chǎn)業(yè),因種植區(qū)域有限,使得塔羅科血橙成為只能在我國(guó)川渝兩地規(guī)模發(fā)展的獨(dú)特產(chǎn)業(yè),研究其炭疽病發(fā)病情況及防治方法很有必要。研究結(jié)果顯示,塔羅科血橙的炭疽病發(fā)生普遍,檢出率為63.18%,其中有89份表現(xiàn)為強(qiáng)致病性;大部分調(diào)查區(qū)域的發(fā)病程度不嚴(yán)重,一般只引起部分葉片有葉枯(急性型)、葉斑(慢性型)等癥狀,沒(méi)有造成嚴(yán)重?fù)p失,鮮少有專(zhuān)門(mén)防治措施跟進(jìn)。研究結(jié)果還顯示,炭疽病在后期引起的采后貯藏病害不容小視,如不進(jìn)行藥劑防治,采后30 d的病情指數(shù)可達(dá)71.3;25%咪鮮胺乳油配合97%礦物油噴灑4次后,綜合防效可達(dá)85%以上,效果最好,對(duì)采后發(fā)病的防治效果也顯著,防效可達(dá)82.47%,可以有效減輕炭疽病造成的采后腐爛。綜合本研究結(jié)果,同一藥劑復(fù)配礦物油在適宜季節(jié)使用,可以有效提高防效15%左右,是較為理想的選擇,可以推廣使用。在生產(chǎn)實(shí)踐中還應(yīng)注意藥劑輪換使用,根據(jù)樹(shù)體情況進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充,配合好修剪、控水等措施,方能達(dá)到最理想的防控效果。

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    (責(zé)任編輯:易 婧)

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