基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)探討復(fù)元活血通脈湯防治冠心病的作用機(jī)制

張海濤 喬盼 于智莘 王冰梅

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117)

冠心病(CHD)是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或功能性改變導(dǎo)致心肌缺血缺氧而引起的心臟病，又稱(chēng)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病或缺血性心臟病，典型癥狀包括胸悶、胸痛及呼吸短促，易引發(fā)心肌缺血、缺氧、壞死、心力衰竭、心律失常等，如不及時(shí)搶救，病死率極高，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的身體健康。目前我國(guó)冠心病患者1 100萬(wàn)例，防控形勢(shì)嚴(yán)峻〔1〕。西藥治療主要使用抗血小板聚集藥物和抗心肌缺血藥物，但長(zhǎng)期使用副作用大，成本高，臨床應(yīng)用受到限制。中藥治療CHD，效果明顯，價(jià)格適中，患者易接受。

復(fù)元活血通脈湯是由補(bǔ)陽(yáng)還五湯與丹參飲加減化裁而成，由黃芪、黨參、桃仁、紅花、丹參、水蛭、川芎、枳殼、降香、柴胡、砂仁、山茱萸、桂枝、瓜蔞、甘草組成，有溫陽(yáng)化氣、溫經(jīng)通脈、活血化瘀之效。方中以黃芪、黨參為君藥大補(bǔ)宗氣，增強(qiáng)“陽(yáng)化氣”的功能，使氣旺以促血行，瘀祛而不傷正。桃仁、紅花、丹參、水蛭、川芎為臣藥，化瘀通脈，使由于“陰成形”功能失常而導(dǎo)致的瘀血得以消散。枳殼、降香、柴胡、砂仁為佐藥，調(diào)和中焦脾胃氣機(jī)，使后天“陽(yáng)化氣、陰成形”的功能正常。山茱萸“斂正氣而不斂邪氣”，防治活血化瘀藥效過(guò)猛而導(dǎo)致出血，達(dá)到祛瘀而不傷正的目的。桂枝溫通經(jīng)脈，提高黃芪、黨參的“陽(yáng)化氣”功能。瓜蔞、甘草為使藥，瓜蔞又為引經(jīng)藥，引諸藥直達(dá)胸部，甘草調(diào)和諸藥。

該方應(yīng)用普遍，效果明顯，但其具體作用機(jī)制尚不清楚。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)基于系統(tǒng)生物學(xué)理論，運(yùn)用數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)綜合分析中藥復(fù)方防治疾病的交集靶點(diǎn)，并對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行功能富集分析等，嘗試闡明中藥復(fù)方可能的作用機(jī)制，為中藥復(fù)方作用的分子機(jī)制提供研究基礎(chǔ)〔2〕。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)，探究復(fù)元活血通脈湯防治CHD的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1復(fù)元活血通脈湯有效成分的篩選及靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 首先分別檢索中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺(tái)V2.0(http：//www.tcmip.cn/TCMIP/index.php，TCMIP)、中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP,http：//tcmspw.com/tcmsp.php)和BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//bionet.ncpsb.org/batman-tcm/)，并結(jié)合已發(fā)表的中藥成分相關(guān)文獻(xiàn)〔3，4〕，得到復(fù)元活血通脈湯中15味中藥的有效成分及相關(guān)靶點(diǎn)，其中篩選條件〔5〕為口服生物利用度(OB)≥30%，藥物類(lèi)藥性(DL)≥0.18。然后采用Perl軟件(V5.30.0)將中藥活性成分與相應(yīng)靶點(diǎn)進(jìn)行一一映射，并為篩選出的靶點(diǎn)添加基因名。

1.2CHD的靶點(diǎn)篩選 以“coronary heart disease”和“coronary disease”為關(guān)鍵詞，檢索Gene Cards數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//genealacart.genecards.org/)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.omim.org/)、Pharm Gkb數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.pharmgkb.org/)、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//db.idrblab.net/ttd/)和Drug Bank數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.drugbank.ca/)疾病相關(guān)靶點(diǎn)，得到疾病相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3復(fù)元活血通脈湯防治CHD的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 利用Perl軟件將復(fù)元活血通脈湯活性成分靶點(diǎn)和CHD疾病靶點(diǎn)進(jìn)行一一映射，得到中藥復(fù)方活性成分與疾病的交集靶點(diǎn)，然后利用Cytoscape軟件(V3.7.1)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)可視化，得到活性成分-交集靶點(diǎn)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。其中節(jié)點(diǎn)的類(lèi)型有活性成分、靶點(diǎn)。

1.4靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選 利用STRING在線(xiàn)軟件(https：//string-db.org/)將1.3得到的活性成分與疾病的交集靶點(diǎn)輸入軟件，篩選條件為種屬選擇人，最小互作分?jǐn)?shù)值為0.9，保存相應(yīng)結(jié)果文件。將所得文件輸入R語(yǔ)言計(jì)算，得到蛋白互作網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)的條圖。見(jiàn)圖1。

圖1 中藥-疾病關(guān)鍵靶點(diǎn)的條圖

利用Cytoscape軟件(V3.7.1)的插件CytoNCA對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?，選取介度中心性(BC)、接近中心性(CC)、度自由性(DC)、特征向量中心性(EC)、局部邊連通性(LAC)、網(wǎng)絡(luò)中心性(NC)等5個(gè)指標(biāo)，其中，同時(shí)滿(mǎn)足大于5個(gè)指標(biāo)中位數(shù)2倍的節(jié)點(diǎn)作為關(guān)鍵靶點(diǎn)，以盡可能篩選出關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.5分子對(duì)接分析 對(duì)復(fù)元活血通脈湯自由度排名靠前的有效成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，首先從Pub Chem網(wǎng)站(https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)下載藥物有效成分的2D結(jié)構(gòu)，并利用ChemOffice軟件將2D結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換成3D結(jié)構(gòu)，其次從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.rcsb.org/)獲取關(guān)鍵靶點(diǎn)的3D結(jié)構(gòu)，并利用PyMOL軟件對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)的3D結(jié)構(gòu)刪除水分子及小分子配體，最后利用autodock vina1.1.2軟件完成分子對(duì)接分析。

1.6GO功能富集分析 見(jiàn)圖2，圖3，圖4。

圖2 生物過(guò)程

圖3 細(xì)胞組分

圖4 分子功能

將1.3得到的活性成分與疾病的交集靶點(diǎn)利用R語(yǔ)言軟件的Bioconductor生物信息軟件包進(jìn)行處理，得到GO功能富集分析。

1.7KEGG通路富集分析 將1.3得到的活性成分與疾病的交集靶點(diǎn)利用R語(yǔ)言軟件的Bioconductor生物信息軟件包進(jìn)行處理，得到KEGG通路富集分析見(jiàn)圖5。

圖5 KEGG通路富集分析柱

1.8KEGG關(guān)系網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將1.3得到的活性成分與疾病的交集靶點(diǎn)和1.6得到的KEGG通路富集分析結(jié)果利用Perl 軟件進(jìn)行一一映射，并利用Cytoscape軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)可視化。其中節(jié)點(diǎn)的類(lèi)型有KEGG通路和交集靶點(diǎn)。

2 結(jié) 果

2.1復(fù)元活血通脈湯活性成分及靶點(diǎn)篩選的結(jié)果 分別檢索TCMIP數(shù)據(jù)庫(kù)、TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)和BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)中復(fù)元活血通脈湯所有活性成分及相關(guān)靶點(diǎn)，并結(jié)合已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)篩選出的靶點(diǎn)添加基因名。根據(jù)OB和DL參數(shù)對(duì)復(fù)元活血通脈湯的活性成分進(jìn)行篩選，分別得到甘草活性成分92個(gè)、丹參活性成分65個(gè)、降香活性成分37個(gè)、桃仁活性成分23個(gè)、紅花活性成分22個(gè)、黨參活性成分21個(gè)、山茱萸活性成分20個(gè)、黃芪活性成分20個(gè)、柴胡活性成分17個(gè)、瓜蔞活性成分11個(gè)、砂仁活性成分10個(gè)、川芎活性成分7個(gè)、桂枝活性成分7個(gè)、枳殼活性成分5個(gè)、水蛭活性成分1個(gè)。對(duì)所有活性成分相應(yīng)的靶點(diǎn)添加基因名后，共得到活性成分的靶點(diǎn)基因3 927個(gè)，其中甘草靶點(diǎn)基因1 531個(gè)、丹參靶點(diǎn)基因825個(gè)、降香靶點(diǎn)基因521個(gè)、黃芪靶點(diǎn)基因405個(gè)、黨參靶點(diǎn)基因193個(gè)、山茱萸靶點(diǎn)基因108個(gè)、枳殼靶點(diǎn)基因103個(gè)、桃仁靶點(diǎn)基因102個(gè)、砂仁靶點(diǎn)基因63個(gè)、川芎靶點(diǎn)基因39個(gè)、瓜蔞靶點(diǎn)基因31個(gè)、水蛭靶點(diǎn)基因3個(gè)、紅花靶點(diǎn)基因2個(gè)、柴胡靶點(diǎn)基因1個(gè)。

2.2CHD的靶點(diǎn)篩選結(jié)果 以“coronary heart disease”和“coronary disease”為關(guān)鍵詞，分別檢索Gene Cards數(shù)據(jù)庫(kù)、 OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)、Pharm Gkb數(shù)據(jù)庫(kù)、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)和Drug Bank數(shù)據(jù)庫(kù)，取并集后得到疾病相關(guān)靶點(diǎn)2 180個(gè)。

2.3復(fù)元活血通脈湯防治CHD的的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 利用Perl軟件將復(fù)元活血通脈湯活性成分靶點(diǎn)3 927個(gè)和CHD疾病靶點(diǎn)2 180個(gè)取交集后得到211個(gè)交集靶點(diǎn)，這211個(gè)交集靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)復(fù)元活血通脈湯中236個(gè)活性成分。甘草活性成分76個(gè)、丹參活性成分55個(gè)、降香活性成分25個(gè)、桃仁活性成分16個(gè)、砂仁活性成分4個(gè)、柴胡活性成分1個(gè)、川芎活性成分2個(gè)、黨參活性成分9個(gè)、瓜蔞活性成分6個(gè)、黃芪活性成分6個(gè)、山茱萸活性成分6個(gè)、水蛭活性成分1個(gè)、枳殼活性成分3個(gè)、多味藥共有活性成分26個(gè)。

2.4PPI的構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選 PPI網(wǎng)絡(luò)使基因、蛋白之間相互作用關(guān)系可視化，為篩選中藥復(fù)方調(diào)控疾病發(fā)生的關(guān)鍵靶點(diǎn)提供了可能。據(jù)圖1可知，中藥-疾病核心基因按鄰接節(jié)點(diǎn)數(shù)目由多到少依次為：絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1，又稱(chēng)蛋白激酶B(AKT1或PKB)、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)1、MAPK3、信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)3、JUN、熱休克蛋白(HSP)90AA1、APP、MAPK14、MAPK8、RELA、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、雌激素受體α(ESR1)、FOS、白細(xì)胞介素(IL)6、蛋白激酶Cα(PRKCA)、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因(RB)1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)A、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGF)、糖皮質(zhì)激素受體基因(NR3C1)、類(lèi)視黃醇X受體α(RXRA)、CCND1、CDKN1A、蛋白激酶Cβ(PRKCB)、MYC、核受體輔激活蛋白(NCOA)1、胱天蛋白酶(CASP)8、胱天蛋白酶(CASP)3、STAT1、BCL2、CREB1。鄰接節(jié)點(diǎn)數(shù)目越多，成為核心基因的概率越大。BC、CC、DC、EC、LAC、NC等大于2倍中位數(shù)的關(guān)鍵靶點(diǎn)有CCND1、MAPK8、JUN、MAPK14、AKT1、MAPK3、MYC、MAPK1、TP53、RELA、STAT3。這11個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)是復(fù)元活血通脈湯防治CHD的核心作用靶點(diǎn)，有重要研究?jī)r(jià)值。見(jiàn)圖6。

圖6 中藥-疾病關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選策略

2.5分子對(duì)接結(jié)果 為了進(jìn)一步驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)能力，本研究應(yīng)用分子對(duì)接技術(shù)探討復(fù)元活血通脈湯防治CHD的作用機(jī)制。在復(fù)元活血通脈湯-CHD-靶點(diǎn)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中選取自由度較高的槲皮素、山奈酚、木犀草素、丹參酮ⅡA作為候選對(duì)接藥效成分；選取關(guān)鍵靶點(diǎn)中的AKT1、JUN、STAT3作為候選對(duì)接靶點(diǎn)，進(jìn)行分子對(duì)接。成分與靶點(diǎn)的結(jié)合能及形成氫鍵數(shù)量是評(píng)價(jià)分子對(duì)接結(jié)果的重要依據(jù)。結(jié)合能越低，氫鍵數(shù)量越多，結(jié)合就越穩(wěn)定，靶點(diǎn)與分子作用的可能性就越大。從分子對(duì)接結(jié)果可知，槲皮素、山奈酚、木犀草素、丹參酮ⅡA與3個(gè)靶點(diǎn)的結(jié)合能均較低，且能形成氫鍵，表明復(fù)元活血通脈湯可有效防治CHD。見(jiàn)圖7，表1。

圖7 核心成分與靶點(diǎn)對(duì)接示意圖

表1 復(fù)元活血通脈湯核心成分與靶點(diǎn)的結(jié)合情況

2.6GO功能富集分析 GO功能富集分析主要包括生物過(guò)程(BP，圖2)、細(xì)胞組分(CC，圖3)、分子功能(MF，圖4)三部分。通過(guò)R語(yǔ)言軟件的Bioconductor生物信息軟件包進(jìn)行GO功能富集分析后，富集比較明顯的前10個(gè)生物過(guò)程包括：對(duì)金屬離子的反應(yīng)、對(duì)營(yíng)養(yǎng)水平的反應(yīng)、對(duì)抗生素的反應(yīng)、對(duì)類(lèi)固醇激素的反應(yīng)、對(duì)活性氧的反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、對(duì)脂多糖的反應(yīng)、對(duì)氧含量的反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌來(lái)源分子的反應(yīng)、對(duì)外源刺激的反應(yīng)。富集比較明顯的前10個(gè)細(xì)胞組分包括：膜筏、膜微區(qū)、膜區(qū)、受體復(fù)合體、突觸后膜的組成成分、突觸后膜的內(nèi)在成分、突觸膜的固有成分、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物、突觸膜的內(nèi)在成分、突觸前膜的固有成分。富集比較明顯的前10個(gè)分子功能包括：核受體活性、轉(zhuǎn)錄因子活性(直接配體調(diào)節(jié)的序列特異性DNA結(jié)合)、類(lèi)固醇激素受體、腎上腺素能受體活性、G-蛋白耦聯(lián)胺受體活性、兒茶酚胺結(jié)合、輔因子結(jié)合、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、磷酸酶結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子活性(RNA聚合酶Ⅱ近端啟動(dòng)子序列特異性DNA結(jié)合)。

2.7KEGG通路富集分析 通過(guò)R語(yǔ)言軟件的Bioconductor生物信息軟件包進(jìn)行KEGG通路富集分析后，富集比較明顯的前20個(gè)通路包括：糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、前列腺癌、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、乙型肝炎、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、胰腺癌、TNF信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、丙型肝炎、人巨細(xì)胞病毒感染、內(nèi)分泌抵抗、膀胱癌、非小細(xì)胞肺癌、Th17細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、弓形蟲(chóng)病、小細(xì)胞肺癌、PI3K-Akt信號(hào)通路、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥性、麻疹。見(jiàn)圖5。

2.8KEGG關(guān)系網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 106個(gè)交集基因可通過(guò)調(diào)節(jié)20個(gè)通路來(lái)影響CHD的發(fā)生。其中與信號(hào)通路相關(guān)的有糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、Th17細(xì)胞分化和PI3K-Akt信號(hào)通路；與癌癥相關(guān)的有前列腺癌、胰腺癌、膀胱癌、非小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞肺癌；與病毒相關(guān)的有卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、人巨細(xì)胞病毒感染和麻疹；與肝炎相關(guān)的有乙型肝炎、丙型肝炎。

3 討 論

CHD由于年老體衰、正氣虧虛、臟腑功能損傷、陰陽(yáng)氣血失調(diào)、導(dǎo)致氣滯血瘀、胸陽(yáng)不振、痰濁內(nèi)生、心脈痹阻而發(fā)病。其中心、肝、脾、肺、腎五臟虛損是病之本，氣滯、血瘀、痰濁、寒凝是病之標(biāo)，本虛標(biāo)實(shí)是CHD病機(jī)特點(diǎn)。本方溫陽(yáng)化氣、溫經(jīng)通脈、活血化瘀。中藥復(fù)方所含成分復(fù)雜，藥理作用廣泛，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)研究復(fù)元活血通脈湯防治CHD的作用機(jī)制，篩選中藥復(fù)方主要活性成分及交集基因，并對(duì)交集基因進(jìn)行功能富集分析，表明中藥復(fù)方可通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多通路影響CHD發(fā)生。

本研究通過(guò)構(gòu)建中藥復(fù)方-疾病-靶點(diǎn)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)復(fù)元活血通脈湯中236個(gè)活性成分通過(guò)調(diào)控211個(gè)交集靶點(diǎn)影響CHD的發(fā)生。這236個(gè)活性成分按 “度自由性”值排列前十的分別是：槲皮素、山奈酚、木犀草素、丹參酮ⅡA、7-O-甲基異戊烯醇、7-甲氧基-2-甲基異黃酮、柚皮素、(-)-前庭醇、隱丹參酮、新龍果堿。槲皮素對(duì)CHD有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠狀動(dòng)脈血流量和降血脂等作用，已被制成多種成藥廣泛使用〔6〕。槲皮素可通過(guò)提高膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)途中相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCA1和ABCG1的表達(dá)，下降血清IL-6、TNF-α水平，從而改善膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)功能和巨噬細(xì)胞內(nèi)的炎癥反應(yīng)，防治CHD〔7〕。山奈酚可通過(guò)抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，防治動(dòng)脈粥樣硬化，還可通過(guò)沉默調(diào)節(jié)因子(SIRT)1 介導(dǎo)的線(xiàn)粒體途徑，顯著增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，抑制心肌細(xì)胞的凋亡〔8〕。木犀草素、山奈酚可通過(guò)抗脂代謝紊亂和抗細(xì)胞凋亡，保護(hù)大鼠離體心肌缺血/再灌注損傷〔9〕，其作用機(jī)制可能與提高心肌細(xì)胞中線(xiàn)粒體延長(zhǎng)因子(MIEF)1表達(dá)有關(guān)〔10〕。丹參酮ⅡA磺酸鈉可通過(guò)保護(hù)心肌缺血再灌注損傷，降低心肌梗死面積，改善冠狀動(dòng)脈循壞，明顯提高CHD患者的左室舒張末徑(LVEDD)、心輸出量(CO)和左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)等心功能指標(biāo)〔11〕。柚皮素可通過(guò)抑制PI3K信號(hào)通路和升高血小板內(nèi)cGMP水平等，抗血小板聚集和動(dòng)脈血栓形成，防治CHD〔12〕。以上研究表明，槲皮素、山奈酚、木犀草素、丹參酮ⅡA、柚皮素，能夠通過(guò)多通路防治CHD的發(fā)生，而復(fù)元活血通脈湯中這5種成分含量多，靶點(diǎn)多，是防治CHD的重要候選化合物。

本研究通過(guò)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行核心靶點(diǎn)篩選，共篩選出30個(gè)核心靶點(diǎn)，前15個(gè)靶點(diǎn)(鄰接節(jié)點(diǎn)數(shù)大于20)分別是AKT1、MAPK1、MAPK3、STAT3、JUN、HSP90AA1、APP、MAPK14、MAPK8、RELA、EGFR、ESR1、FOS、IL-6、PRKCA。其中，AKT1〔13〕、MAPK1〔14〕、STAT3〔15〕、JUN〔16，17〕、ESR1〔18〕、FOS〔19〕、IL-6〔20〕、PRKCA〔14〕等已被實(shí)驗(yàn)證實(shí)參與了CHD的病理過(guò)程，這些靶點(diǎn)可能也是復(fù)元活血通脈湯防治CHD的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

GO功能富集分析表明復(fù)元活血通脈湯可能通過(guò)核受體活性、轉(zhuǎn)錄因子活性、腎上腺素能受體活性、G-蛋白耦聯(lián)胺受體活性、兒茶酚胺結(jié)合、輔因子結(jié)合、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、磷酸酶結(jié)合等防治CHD。KEGG通路富集分析表明復(fù)元活血通脈湯可能通過(guò)糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、前列腺癌、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、乙型肝炎、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、胰腺癌、TNF信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、丙型肝炎、人巨細(xì)胞病毒感染、內(nèi)分泌抵抗、膀胱癌、非小細(xì)胞肺癌、Th17細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、弓形蟲(chóng)病、小細(xì)胞肺癌、PI3K-Akt信號(hào)通路、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥性、麻疹等通路防治CHD。其中，實(shí)驗(yàn)研究表明AGE-RAGE信號(hào)通路〔21〕、前列腺癌〔22〕、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、乙型肝炎〔23〕、TNF信號(hào)通路〔24〕、IL-17信號(hào)通路〔25〕、丙型肝炎〔26〕、人巨細(xì)胞病毒感染〔27〕、內(nèi)分泌抵抗〔28〕、Th17細(xì)胞分化〔29〕、細(xì)胞凋亡〔30，31〕、PI3K-Akt信號(hào)通路〔30，31〕等參與CHD的發(fā)病。

綜上，復(fù)元活血通脈湯中的主要活性成分槲皮素、山奈酚、木犀草素、丹參酮ⅡA、柚皮素通過(guò)影響AKT1、MAPK1、STAT3、JUN、ESR1、FOS、IL-6、PRKCA等靶點(diǎn)，進(jìn)一步調(diào)控AGE-RAGE信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、TNF信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路等，防治CHD的發(fā)病。