白細胞介素6/白細胞介素6受體軸免疫調(diào)節(jié)機制與乙型肝炎病毒感染患者病毒基因型的相關(guān)性

盧斯霞 胡旭東 高欣 程聰 陳思

武漢市金銀潭醫(yī)院肝病科（武漢430010）

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）致病機制復(fù)雜，可因免疫能力、病毒基因型等差異而出現(xiàn)不同的臨床表現(xiàn)，如無癥狀攜帶者，并產(chǎn)生不同的臨床轉(zhuǎn)歸，如性乙型肝炎、肝硬化、肝細胞癌等［1-2］。目前，臨床研究認(rèn)為，HBV 感染機體后引起的肝細胞損傷、疾病嚴(yán)重程度等與宿主免疫調(diào)節(jié)紊亂、病毒本身的生物學(xué)特性密切關(guān)聯(lián)，其中HBV 主要分為A、B、C、D 基因型，各基因型可產(chǎn)生不同的病理生理特征，如A 基因型容易引起慢性肝炎，C 基因型容易引起嚴(yán)重肝病，D 基因型容易引起急性感染等［3-4］。HBV 感染機體后，可激活機體產(chǎn)生一系列免疫反應(yīng)，并產(chǎn)生HBV 特異性抗原，導(dǎo)致肝細胞損傷，因此誘導(dǎo)機體清除HBV 時產(chǎn)生的免疫反應(yīng)是導(dǎo)致異常炎癥、肝功能損傷的重要原因，研究HBV 基因型與免疫反應(yīng)的相關(guān)機制對于HBV治療、免疫調(diào)節(jié)具有重要指導(dǎo)意義。白細胞介素6（interleukin 6，IL-6）是新發(fā)現(xiàn)的促炎因子，與可溶性IL-6R（soluble IL-6 receptor，sIL-6R）特異性結(jié)合而激活下游信號通路（如JAK/STAT3、PI3K/AKT 信號通路），進而激活T 細胞而介導(dǎo)中性粒細胞、成纖維細胞、巨噬細胞等免疫細胞分泌致炎因子，促進炎癥的發(fā)生以及加重肝組織損傷［5-7］。目前，關(guān)于IL-6/IL-6 受體軸免疫調(diào)節(jié)機制與HBV 基因型的關(guān)系尚未明確，因此本文將通過實例進一步探討，旨在為臨床新藥研究靶點開發(fā)提供指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取我院2017年6月至2019年12月期間收治的96 例HBV 感染患者為研究組，另選取同期于我院體檢健康者為對照組。研究組男55 例，女41 例，年齡35～72 歲，平均（50.26 ±4.29）歲；對照組男38 例，女22 例，年齡36～75 歲，平均（49.37±4.15）歲；兩組受試者的性別、年齡等基線資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：HBV 感染患者均符合中華醫(yī)學(xué)會肝病分會2015 版《慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，生物化學(xué)或血液學(xué)檢查確診［8］；（2）病歷資料完整，自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）免疫系統(tǒng)疾病、血液及腫瘤疾??；（2）合并甲型、丙型、丁型、戊型等其他肝炎病毒感寄生蟲性感染；（3）心、肺、腎等重要臟器功能障礙；（4）酒精性肝病，HIV 感染，寄生蟲性感染。

1.2 方法將符合條件的患者納入本次研究，并記錄病歷資料，包括性別、年齡、病史等?；颊呷虢M后于清晨空腹采集外周靜脈血4 mL，靜置1 h后，3 000 r/min 離心10 min，上清液保存于-80 ℃待測。采用全自動生化分析儀（廠家型號：貝克曼AU-680）檢測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）、谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶（glutamyl transferase，GGT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）及總膽紅素（Total bilirubin，TBIL）水平，采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA的含量，以Log HBV DNA 表示。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗法檢測血清IL-6 和sIL-6R 表達水平，檢測試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 20.0 軟件分析所有數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以例（%）表示，計數(shù)資料比較采用χ2比較。計量資料以（）表示，兩組間計量資料比較采用t檢驗。相關(guān)性評估采用Pearson 相關(guān)性分析。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者基線資料以及IL-6/IL-6受體軸水平比較兩組受試者的性別、年齡等基線資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），研究組血清IL-6、sIL-6R水平明顯高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組受試者基線資料以及IL-6/IL-6 受體軸水平比較Tab.1 Comparison of baseline data and IL-6/IL-6 receptor axis levels between the two groups ±s

表1 兩組受試者基線資料以及IL-6/IL-6 受體軸水平比較Tab.1 Comparison of baseline data and IL-6/IL-6 receptor axis levels between the two groups ±s

組別研究組對照組t/χ2值P 值例數(shù)96 60性別（男/女）55/41 38/22 0.558 0.454年齡（歲）50.26±4.29 49.37±4.15 1.276 0.204吸煙（例）30 15 0.703 0.402 IL-6（ng/mL）44.67±5.53 28.12±4.84 19.060＜0.001 sIL-6R（ng/mL）62.34±9.63 47.58±7.52 10.684＜0.001

2.2 不同基因型患者基線資料比較96 例患者HBV 基因型分布如下：C 基因型67 例，B 基因型26 例，A 基因型2 例、A/C 混合型1 例，其中A、A/C基因型例數(shù)較少，未納入研究。兩者患者性別、年齡以及肝功能指標(biāo)等基線資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同基因型患者基線資料比較Tab.2 Comparison of baseline data of patients with different genotypes ±s

表2 不同基因型患者基線資料比較Tab.2 Comparison of baseline data of patients with different genotypes ±s

組別B基因型C基因型t/χ2值P值例數(shù)26 67性別（男/女）15/11 39/29 0.558 0.455年齡（歲）50.06±4.18 50.36±4.24 1.281 0.202吸煙（例）8 25 0.350 0.552病程（歲）5.37±1.16 5.12±1.28 1.061 0.291肝纖維化程度分級（例）S1 8 22 0.258 0.879 S2 13 35 S3 5 10肝功能分級（例）A 7 22 0.315 0.854 B 15 36 C 4 9 ALT（U/L）68.83±15.62 65.62±17.84 0.805 0.423 AST（U/L）77.41±10.95 80.37±13.87 0.975 0.332 GGT（U/L）69.64±10.63 71.85±14.26 0.716 0.476 TBIL（μmol/L）37.81±8.12 35.34±7.85 1.349 0.181

2.3 不同基因型患者血清乙肝病毒載量、IL-6/IL-6受體軸水平C 基因型的血清Log HBV DNA、IL-6/IL-6 受體軸水平均明顯高于B 基因型患者（P＜0.05），見表3、圖1-3。

表3 不同基因型患者血清乙肝病毒載量、IL-6/IL-6 受體軸水平比較Tab.3 Comparison of serum hepatitis B virus load and IL-6/IL-6 receptor axis levels in patients with different genotypes x±s

圖1 不同基因型的HBV DNA 水平Fig.1 HBV DNA levels of different genotypes

2.4 不同類型HBV 患者血清HBV DNA 與IL-6/IL-6 受體軸相關(guān)性控制HBV 基因型變量，對Log HBV DNA、IL-6 進行偏相關(guān)分析，偏相關(guān)系數(shù)為0.501，對Log HBV DNA 與sIL-6R 進行偏相關(guān)分析，偏相關(guān)系數(shù)為0.459，Log HBV DNA 與IL-6、sIL-6R 呈正相關(guān)性（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，見圖4、5。

3 討論

乙型肝炎病毒是一類雙鏈DNA 病毒，具有嗜肝性（肝組織趨向性），流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國是HBV感染的高發(fā)區(qū)，已成為流行的公共衛(wèi)生問題［9］。臨床上治療方式以抗病毒（核苷類似物）、免疫調(diào)節(jié)（干擾素）治療為主，并配合保肝護肝藥物治療，可有效抑制HBV 復(fù)制以及控制疾病，甚至達到良好的康復(fù)效果。HBV 作為外源性致病病原體，侵入機體后引起的免疫反應(yīng)可介導(dǎo)的肝損傷，且研究已證實CD4+T 細胞、HBV 特異性細胞毒性T 淋巴細胞等免疫細胞對于控制HBV 感染具有重要意義［10］。IL-6 是參與炎癥、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)

過程，與sIL-6R 特異性結(jié)合后可激活下游的經(jīng)典信號通路而發(fā)揮促炎作用，其中IL-6/IL-6 受體軸免疫調(diào)節(jié)失衡可導(dǎo)致多種炎癥疾病，如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性肝炎等，因此阻斷IL-6/IL-6 受體信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)可能作為多種炎癥疾病的潛在治療靶點［11］，此次研究將通過研究IL-6/IL-6 受體軸免疫調(diào)節(jié)與HBV 基因型的關(guān)系，從而為乙型肝炎疾病的治療提供指導(dǎo)。

圖2 不同基因型的血清IL-6 水平Fig.2 Serum IL-6 levels of different genotypes

圖3 不同基因型的血清sIL-6R 水平Fig.3 Serum IL-6 levels of different genotypes

圖4 血清HBV DNA 與IL-6 相關(guān)性Fig.4 Correlation between serum HBV DNA and IL-6

圖5 血清HBV DNA 與sIL-6R 相關(guān)性Fig.5 Correlation between serum HBV DNA and sIL-6R

本研究發(fā)現(xiàn)，研究組血清IL-6、sIL-6R 水平明顯高于對照組（P＜0.05），表明IL-6/IL-6 受體軸免疫調(diào)節(jié)與HBV 感染密切關(guān)聯(lián)。IL-6 在適應(yīng)性免疫系統(tǒng)以及固有免疫中的介導(dǎo)、激活中發(fā)揮重要作用，如固有免疫系統(tǒng)中可促進單核細胞的浸潤、活化，適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中可誘導(dǎo)B 細胞分化為漿細胞，促進濾泡輔助T 細胞的分化以及釋放炎性因子（IL-21）［12］。另外，研究發(fā)現(xiàn)HBV 感染機體后，在炎癥反應(yīng)過程中，IL-6 還可刺激肝細胞產(chǎn)生血清淀粉樣蛋白A、C 反應(yīng)蛋白等急性期蛋白，從而破壞肝臟細胞，其水平越高則肝臟損傷的程度越高［13］。本研究顯示，C 基因型的血清乙肝病毒載量、IL-6/IL-6 受體軸水平均明顯高于B 基因型患者，且通過Pearson 相關(guān)分析顯示HBV 基因型與血清乙肝病毒載量、IL-6/IL-6 受體軸水平具有相關(guān)性，表明C 基因型可能與較為嚴(yán)重的肝病、肝臟炎癥有關(guān)。李妍淳等［14］研究發(fā)現(xiàn)，C 基因型的HBVDNA 水平以及e 抗原攜帶率明星高于B 基因型，隨著疾病的進展，C 基因型分布比例呈上升趨勢，C基因型感染者進展為重癥肝炎、肝硬化、肝癌的風(fēng)險高于B 基因型，結(jié)合本次研究進一步表明HBV基因型是HBV 感染患者發(fā)生嚴(yán)重肝病的危險因素。

血清乙肝病毒載量反映HBV 復(fù)制情況，值越大表明提示病毒復(fù)制活躍，具有較高的傳染性。本次研究通過Pearson 相關(guān)分析顯示血清乙肝病毒載量與血清IL-6、sIL-6R 水平存在正相關(guān)性，表明IL-6/IL-6 受體軸免疫調(diào)節(jié)對乙型肝炎感染具有重要調(diào)控作用。LEE 等［15-16］研究發(fā)現(xiàn)IL-6 與HBV外殼蛋白前S1 蛋白相互作用后可能影響HBV 感染，是控制HBV 進入肝細胞的一個重要因素，且通過體外細胞實驗、動物實驗證實HBV 感染肝臟后肝實質(zhì)細胞高表達IL-6［17-19］。另外，研究發(fā)現(xiàn)乙型肝炎患者血清IL-6 水平異常升高，可介導(dǎo)微小RNA-21 的表達，并激活炎性反應(yīng)，持續(xù)高強度的刺激可導(dǎo)致肝損傷，進而引起肝細胞癌［20］。IL-6/IL-6 受體軸免疫調(diào)節(jié)在感染、炎癥期間具有重要的保護特性，本研究初步探討了HBV 基因型可能影響機體IL-6/IL-6 受體軸的表達情況而調(diào)控機體炎性進展，進而影響肝臟損傷程度，因此阻斷IL-6 信號傳導(dǎo)可能是HBV 感染相關(guān)肝病的治療策略，但需警惕IL-6 的清除給HBV 感染者帶來的風(fēng)險，如妥珠單抗可阻斷IL-6 經(jīng)典、反式信號傳導(dǎo)途徑，從而阻斷IL-6 的抗炎、促炎活動［21-22］。本研究存在不足之處，仍需通過分子生物學(xué)、細胞學(xué)水平深入探討IL-6/IL-6 受體軸在HBV 基因型、疾病進展過程中的調(diào)節(jié)機制。

綜上所述，IL-6/IL-6 受體軸免疫調(diào)節(jié)與HBV感染密切關(guān)聯(lián)，其中C 基因型感染者的IL-6/IL-6受體軸處于高表達狀態(tài)，且與HBV-DNA 載量正相關(guān)。