紅醋栗外植體的選擇及消毒方法研究

摘要：? 以紅醋栗不同組織部位為外植體，采用不同的消毒藥劑、消毒方式及消毒時間對其進行試驗研究，結(jié)果表明：紅醋栗離體初代培養(yǎng)以半木質(zhì)化莖段為外植體，消毒藥劑為0.1%升汞（HgCL2）+2滴吐溫溶液，通過手搖容器晃動的方式消毒8 min的試驗效果最佳。

關(guān)鍵詞：? 紅醋栗;? 外植體消毒;? 消毒方法;? 誘導(dǎo)率

中圖分類號：? ?S 663. 9? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：? ?A? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號：1001 - 9499（2021）03 - 0015 - 03

紅醋栗（Ribes rubrum）系醋栗科、茶蘼子屬、茶蘼亞屬落葉小灌木，俗稱紅加侖，株高1～1.5 m，果實成熟為紅色，成串著生在果枝上，可鮮食可加工，具有很高的經(jīng)濟價值。紅醋栗樹姿優(yōu)美，果實顏色鮮艷，可作觀賞樹種應(yīng)用于園林綠化。遼寧省干旱地區(qū)造林研究所于2002年從俄羅斯季米利亞澤夫農(nóng)學(xué)院引進紅醋栗，通過栽培試驗，發(fā)現(xiàn)其具有耐寒、適應(yīng)性強、果實產(chǎn)量高等特點，在遼西地區(qū)可安全越冬，不僅為遼西地區(qū)經(jīng)濟林樹種結(jié)構(gòu)調(diào)整提供了新的優(yōu)良種質(zhì)，并且在促進區(qū)域經(jīng)濟發(fā)展和環(huán)境美化方面都具有重要意義[ 1 - 2 ]。

目前，紅醋栗僅限于在東北和西北地區(qū)栽培，存在栽植面積小、果實產(chǎn)量不穩(wěn)定、相關(guān)產(chǎn)業(yè)發(fā)展緩慢、苗木供應(yīng)不足等問題[ 3 ]。為了促進紅醋栗規(guī)?；a(chǎn)，短期內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗，可采用組織培養(yǎng)方法。組織培養(yǎng)作為植物無性繁殖的一種方式，具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)高等特點[ 4 - 7 ]。在組織培養(yǎng)中，外植體選擇、消毒藥劑種類、消毒方式及消毒時間是影響無菌體系建立的重要因素，初代培養(yǎng)成功與否直接關(guān)系到組培苗的成活率。本研究通過對紅醋栗不同部位外植體消毒方法的消毒效果的影響研究，為紅醋栗的組培快繁提供技術(shù)參考。

1 試驗地概況

試驗地設(shè)于遼寧省朝陽市建平縣富山鎮(zhèn)的良種紅醋栗引種栽培基地。該地區(qū)為暖溫帶半濕潤、半干旱氣候，年均氣溫5.4～8.7 ℃，年均日照時數(shù)2 850～2 950 h，降水量450～580 mm，無霜期120～155天。

2 試驗材料與方法

2. 1 試驗材料

2020年6月中旬，于試驗地采集若干當(dāng)年生生長發(fā)育健壯、無病蟲害的紅醋栗同株幼嫩莖尖、半木質(zhì)化莖段和木質(zhì)化莖段作為外植體試驗材料。

2. 2 試驗方法

2. 2. 1 材料預(yù)處理

將采集回來的外植體剪成8 cm左右的莖段，剪掉葉片。流水沖洗后，用肥皂液浸泡5 min，然后用軟毛刷刷掉表面塵土和雜物，用流水沖凈肥皂液，置于自來水龍頭下沖洗3～4 h后轉(zhuǎn)入無菌室備用。

2. 2. 2 外植體消毒

采用L9（ 34 ）正交試驗設(shè)計，選取外植體部位、消毒藥劑種類、消毒方式及消毒時間這4個因素，每個因素各設(shè)3個水平，即外植體部位（幼嫩莖尖、半木質(zhì)化莖段、木質(zhì)化莖段），消毒藥劑種類（75%酒精30 s+0.1%升汞、0.1%升汞、0.1%升汞+2滴吐溫），消毒方式（靜止浸泡、玻璃棒攪動、手搖容器晃動），消毒時間（6 min、8 min、10 min）（表1）。將備好的外植體莖段按照試驗設(shè)計進行消毒處理，用無菌水沖洗5～6次，將沖洗干凈、濾干水分的外植體在超凈工作臺上切成1 cm的帶芽莖段，接種到初代培養(yǎng)固體培養(yǎng)基中，每個處理接種30瓶，每瓶接種1個外植體，30天后統(tǒng)計誘導(dǎo)率。

誘導(dǎo)率（K）=誘導(dǎo)出不定芽的外植體數(shù)量/接種的外植體總數(shù)×100%

2. 2. 3 培養(yǎng)條件

以MS為基本培養(yǎng)基，附加激素6-BA0.6 mg/L+? IBA0.04 mg/L，活性炭AC1.0 g/L，蔗糖含量為33%，瓊脂含量為0.8%，pH值調(diào)至5.8，置于121℃、1.1 kg/m2壓力下高溫滅菌20 min，培養(yǎng)室溫度控制在（23±2）℃，空氣相對濕度50%～60%，光照強度為2 000～4 000 lx，光照時間為14～16 h/d[ 4 ]。

3 結(jié)果與分析

3. 1 不同外植體消毒效果比較

將供試外植體部位按照不同消毒方法設(shè)置9個處理（表2）：（1）幼嫩莖尖，75%酒精30 s+0.1%升汞，靜止浸泡6 min;（2）幼嫩莖尖，0.1%升汞，玻璃棒攪動8 min;（3）幼嫩莖尖，0.1%升汞+2滴吐溫，手搖容器晃動10 min;（4）半木質(zhì)化莖段，75%酒精30s+0.1%升汞，玻璃棒攪動10 min;（5）半木質(zhì)化莖段，0.1%升汞，手搖容器晃動6 min;（6）半木質(zhì)化莖段，0.1%升汞+2滴吐溫，靜止浸泡8 min;（7）木質(zhì)化莖段，75%酒精30 s+0.1%升汞，手搖容器晃動8 min;（8）木質(zhì)化莖段，0.1%升汞，靜止浸泡10 min;（9）木質(zhì)化莖段，0.1%升汞+2滴吐溫，玻璃棒攪動6 min。

試驗接種后，對組培苗進行觀察和調(diào)查統(tǒng)計，并將污染的和消毒處理過程中殺死的組培苗及時清出培養(yǎng)室，30天后統(tǒng)計紅醋栗離體初代培養(yǎng)的誘導(dǎo)率。由不同外植體消毒方法的正交試驗結(jié)果（表2）可以看出，試驗處理6的相對誘導(dǎo)率較好，為78.6%。

3. 2 數(shù)據(jù)分析

由各試驗處理誘導(dǎo)結(jié)果（表3）可以看出，試驗處理因素主次順序是以極差值R的大小來衡量的，試驗比較外植體部位對紅醋栗離體初代培養(yǎng)成活率的影響最為明顯，極差值R為28.0;其次是消毒藥劑的種類，R值為10.6;再次是消毒時間和消毒方式，R值分別為9.8和6.5。

注： K為誘導(dǎo)率

4 結(jié)論與討論

4. 1 控制污染、提高成活率是植物組織培養(yǎng)中的關(guān)鍵因素，外植體因其部位不同，細胞活力強弱及帶菌多少存在差異，進而影響初代培養(yǎng)的污染程度。使用適宜的消毒藥劑，掌握好消毒方式和消毒時間能夠起到理想的滅菌作用。

4. 2 75%酒精具有很強的滲透力，不適用于幼嫩莖尖滅菌，而0.1%升汞作為組織培養(yǎng)中常用的消毒劑，結(jié)合吐溫一起使用，能夠促進藥液與外植體表面組織接觸，消毒效果更好。玻璃棒攪動消毒雖然污染較低，但在攪動過程中很可能對幼嫩外植體表面造成損傷，使藥液滲入組織，進而對成活率產(chǎn)生一定影響。

4. 3 在進行紅醋栗離體初代培養(yǎng)時，以半木質(zhì)化莖段為外植體，以0.1%升汞+2滴吐溫溶液為消毒藥劑，再通過手搖容器晃動的方式消毒8 min的試驗效果最佳。

參考文獻

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第1作者簡介：? 朱虹（1981-），? 女，? 工程師，? 主要從事苗木繁育工作。

收稿日期： 2021 - 01 -? 16

（責(zé)任編輯：? ?王 巖）