◎杜小強,周勸娥,郭文輝,胡 鵬,賈生春
(平涼市食品檢驗檢測中心,甘肅 平涼 744000)
我國的白酒品類繁多、歷史悠久,源遠流長,白酒代表主要有茅臺、五糧液、劍南春、瀘州老窖特曲、西鳳酒等白酒品牌[1]。但白酒在發(fā)酵、釀造、蒸餾的工藝生產過程中,會因為原料的植物細胞壁及細胞間質的果膠中含有甲醇酯,在曲霉的作用下釋放出甲氧基,形成甲醇。國家標準規(guī)定,凡是以各種糧谷類為原料制成的白酒,甲醇的含量不得超過0.6 g·L-1,事實上,只要是按照正常釀造工藝組織生產,即使是最普通的白酒,甲醇含量也會超過限量標準。但是隨著市場經濟的高速發(fā)展,一些不法分子濫用工業(yè)酒精冒充食用酒精,用工業(yè)甲醇直接勾兌白酒,偷工減料、牟取暴利,從而造成部分白酒中甲醇含量遠遠超過國家標準的規(guī)定。飲用甲醇超標的白酒,會對人體造成很大傷害,特別是對人體視覺神經危害尤為嚴重,能引起視力模糊、眼疼、視力減退甚至失明[2]。本文根據《食品安全國家標準 食品中甲醇的測定》(GB 5009.266—2016)[3]和《食品安全國家標準 蒸餾酒及其配制酒》(GB 2757—2012)和[4]中的方法,繼續(xù)優(yōu)化了程序升溫等儀器參考條件,建立一種簡單、快速且甲醇的分離度高、分離效果好,能夠,以保留時間定性、外標法定量[5-8]的快速準確檢測方法[5-8]。
甲醇(CH3-OH),CAS 編號:67-56-1,純度:99.9%,北京曼哈格生物科技有限公司;叔戊醇(2-甲基-2-丁醇),CAS 編號:75-85-4,純度:99.7%,北京曼哈格生物科技有限公司;乙醇(C2H6O),色譜純,德國Merck 有限公司;實驗用水,Milli-Q 超純水機制備。
Agilent 7890B 氣相色譜儀,配備7693 型自動進樣塔,氫火焰FID 檢測器,美國安捷倫科技有限公司;毛細管色譜柱,Agilent DB-WAX UI 60 m×0.250 mm×0.25 μm,20~250 ℃,美國安捷倫科技有限公司;MSE125PICE-DU 十萬分之一天平,瑞士梅特勒-托利多有限公司;移液器,德國艾本德儀器有限公司。
1.3.1 標準溶液配制方法
乙醇溶液(40%,體積分數):量取400 mL 乙醇,用超純水定容至1 000 mL,混勻;甲醇標準儲備溶液配制:準確稱取甲醇標準品(99.9%)0.501 92 g 于100 mL容量瓶中,用乙醇溶液(40%,體積分數)定容至刻度,混勻,配制得5014.18 mg·L-1甲醇儲備液,搖勻備用;叔戊醇標準溶液配制:準確稱取叔戊醇標準品(99.7%)1.004 36 g 于50 mL 容量瓶中,用乙醇溶液(40%,體積分數)定容至刻度,混勻,配制得20 027 mg·L-1叔戊醇儲備液,搖勻備用。
1.3.2 儀器檢測條件
氣相色譜條件:毛細管色譜柱Agilent DB-WAX UI(60 m×0.25 mm,0.25 μm);程序升溫:初始溫度35 ℃,保持1 min,以4.0 ℃·min-1升溫到130 ℃,保持1 min,以20 ℃·min-1升溫到200 ℃,保持5 min。進樣口溫度:250 ℃;檢測器溫度:250 ℃。進樣方式:分流進樣,分流比:20∶1;載氣流量:1.0 mL·min-1;進樣體積:1.0 μL。
1.4.1 甲醇標準曲線配制步驟
分別吸取0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL和5.0 mL甲醇儲備液于5 個25 mL 容量瓶中,用40%vol 乙醇定容至刻度,搖勻,依次配制成甲醇含量為100.28 mg·L-1、200.56 mg·L-1、401.13 mg·L-1、802.27 mg·L-1和1 002.83 mg·L-1系列標準溶液。
然后從5 個不同濃度的容量瓶中各吸出10 mL 樣液,再加入0.1 mL 叔戊醇內標溶液,各樣品加入的內標濃度為200.27 mg·L-1,搖均、混勻,上機測定甲醇和內標叔戊醇色譜峰面積。
(1)通過甲醇系列標準工作液的濃度及峰面積,得到甲醇的校準曲線(圖1),通過r值(R2=0.999 8)見證線性關系。
圖1 甲醇濃度和峰面積的標準曲線圖
(2)以甲醇系列標準工作液濃度為橫坐標,以甲醇和叔戊醇色譜峰面積比值為縱坐標,繪制標準工作曲線(圖2),然后通過該標準曲線,可以求得待測白酒樣品中甲醇的含量。
圖2 甲醇和內標叔戊醇峰面積的比值與甲醇濃度的標準曲線圖
根據白酒樣品的易揮發(fā)特性,為減少樣品易揮發(fā)物質的損失,本方法直接吸取樣品1.5 mL 于進樣小瓶中,加入15.0 μL 叔戊醇標準溶液,混勻、上機測定,以保留時間定性,同時記錄甲醇和叔戊醇色譜峰面積的比值,根據標準曲線得到待測樣品中甲醇的濃度。
每次實驗重復操作2 次,取平均值。應用OpenLab CDS2 軟件和Excel 進行數據處理。
分別取上述濃度為100.28 mg·L-1、401.13 mg·L-1、802.27 mg·L-1甲醇標準溶液溶液1 mL 分別置于3 個進樣小瓶中,上機分別進樣6 次,計算精密度,結果見表1。實驗結果表明,3 組的相對標準偏差RSD分別是0.60%、0.20%、0.28%,均小于5%,重現(xiàn)性好,精密度能達到實驗要求。
表1 精密度實驗結果表
將100.28 mg·L-1甲醇標準使用液逐步稀釋,當稀釋至甲醇質量濃度為1.002 8 mg·L-1時,峰高為基線噪聲的3 倍,于是將1.002 8 mg·L-1作為方法檢出限。與GB 5009.266—2016 檢出限7.5 mg·L-1相比,國標法檢出限為本方法檢出限的7.5 倍,本方法顯著提高了檢測靈敏度。
取一已知測定甲醇濃度的白酒樣品,添加100.28 mg·L-1甲醇質量濃度,做試樣加標回收試驗,一組6 平行,平均回收率為99.37%,回收率高而且穩(wěn)定。結果見表2。
表2 白酒中甲醇回收率試驗結果表
對15 批次白酒樣品和2 批次實驗室質控樣品進行檢測,結果表明15 批白酒樣品中甲醇含量均小于國家標準《食品安全國家標準蒸餾酒及其配制酒》(GB 2757—2012)中的規(guī)定,實驗室白酒質控樣品檢測結果準確,質控樣品色譜圖見圖3。
圖3 實驗室白酒質控樣品色譜圖
本研究建立了氣相色譜(GC)內標法測定白酒中甲醇含量,優(yōu)化后的氣相色譜條件為:Agilent 小口徑毛細管柱:DB-WAX UI 60 m×0.250 mm×0.25 μm,程序升溫條件:初始溫度35 ℃,保持1 min,以4.0℃·min-1升溫到130 ℃,保持1 min,以20 ℃·min-1升溫到200 ℃,保持5 min。檢測器溫度:250 ℃,進樣口溫度250 ℃,載氣流速:1.0 mL·min-1,進樣量:1 μL,分流比:20∶1。優(yōu)化了程序升溫條件,樣品中甲醇的回收率好,精密度高,分離度好,靈敏度高,對白酒中甲醇含量的檢測提供了新的檢測方法,對白酒的質量控制提供新的技術指導。