救必應(yīng)總?cè)浦饕煞衷谡：透咧Y大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)比較

楊 寶，鄭小蕓，軒申鑫，阮清鋒，江詩(shī)琴，崔 輝，趙鐘祥*

救必應(yīng)總?cè)浦饕煞衷谡：透咧Y大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)比較

楊 寶1, 2，鄭小蕓2，軒申鑫2，阮清鋒2，江詩(shī)琴2，崔 輝2，趙鐘祥2*

1. 湖北民族大學(xué) 醫(yī)學(xué)部，湖北 恩施 445000 2. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006

比較救必應(yīng)總?cè)浦饕煞衷谡：透咧Y大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為。SD大鼠隨機(jī)分為正常組和模型組，模型組制備高脂血癥大鼠模型，各組單次ig救必應(yīng)總?cè)坪笥诓煌瑫r(shí)間點(diǎn)取血。采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）測(cè)定大鼠血漿中冬青苷O、oblonganoside I、rotundinoside C、ilexside II、長(zhǎng)梗冬青苷、苦丁冬青苷H、毛冬青皂苷A1、竹節(jié)參皂苷IVa、救必應(yīng)酸、rotundanonic acid、冬青素A的濃度，將血藥濃度和時(shí)間數(shù)據(jù)導(dǎo)入DAS 2.0軟件中以非房室模型擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。苷元的吸收速度顯著高于三萜皂苷，皂苷含糖的數(shù)目越多吸收入血的速度越慢。救必應(yīng)酸在正常和高脂血癥大鼠體內(nèi)的達(dá)峰濃度（max）分別為3 257.9、2 173.8 nmol/L，藥-時(shí)曲線下面積（AUC0～）分別為29 897.6、24 501.3 nmol·h/L，遠(yuǎn)超其他10個(gè)成分的總和。與正常組相比，模型組大部分成分的達(dá)峰時(shí)間（max）延長(zhǎng)，max、AUC0～降低。救必應(yīng)總?cè)浦饕煞衷谡：透咧Y大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為存在顯著差異，救必應(yīng)酸為口服總?cè)坪蟠笫篌w內(nèi)的主要暴露成分。

救必應(yīng)；總?cè)?；超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；藥動(dòng)學(xué)；高脂血癥；救必應(yīng)酸；長(zhǎng)梗冬青苷；苦丁冬青苷H；毛冬青皂苷A1；rotundanonic acid

救必應(yīng)為鐵冬青Thunb.的干燥樹(shù)皮，是嶺南地區(qū)常用中藥材，收載于《中國(guó)藥典》2020年版，常用于治療心腦血管和消化系統(tǒng)疾病[1]。三萜是救必應(yīng)的特征性組分，在70%乙醇提取物中的含量超過(guò)45.0%。總?cè)茷榫缺貞?yīng)治療心腦血管疾病的活性部位，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值[1-3]?？诜幬锇l(fā)揮作用有2個(gè)重要的前提條件，一是能夠入血吸收且具有較高的暴露量和較長(zhǎng)時(shí)間地維持起效濃度，二是能夠以原型或代謝產(chǎn)物的形式到達(dá)靶器官[4]。由于中藥所含成分相對(duì)復(fù)雜，口服給藥后可能是關(guān)鍵成分或組分發(fā)揮藥效，這些關(guān)鍵成分或組分是后續(xù)藥效學(xué)研究的重點(diǎn)[4]。因此，開(kāi)展中藥多成分藥動(dòng)學(xué)研究是揭示中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的重要環(huán)節(jié)。機(jī)體處于疾病狀態(tài)時(shí)，與藥物吸收、代謝、排泄相關(guān)的因素較正常狀態(tài)存在較大改變，從而影響口服給藥后其活性成分的藥動(dòng)學(xué)行為[5-6]。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道了救必應(yīng)中長(zhǎng)梗冬青苷和救必應(yīng)酸在正常大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[7-9]，本課題組前期也報(bào)道了正常大鼠單次ig救必應(yīng)提取物后6個(gè)三萜類成分（冬青苷O、rotundinoside C、長(zhǎng)梗冬青苷、救必應(yīng)酸、rotundanonic acid、冬青素A）的藥動(dòng)學(xué)行為[10]。鑒于救必應(yīng)一般應(yīng)用于病理狀態(tài)下，且總?cè)茷槠浒l(fā)揮調(diào)血脂作用的活性部位，因此研究救必應(yīng)總?cè)圃诩膊顟B(tài)下的藥動(dòng)學(xué)行為更具有實(shí)際意義。本研究在前期工作的基礎(chǔ)上，建立了測(cè)定大鼠血漿中11個(gè)救必應(yīng)特征性三萜（冬青苷O、oblonganoside Ⅰ、rotundinoside C、ilexside Ⅱ、長(zhǎng)梗冬青苷、苦丁冬青苷H、毛冬青皂苷A1、竹節(jié)參皂苷IVa、救必應(yīng)酸、rotundanonic acid、冬青素A）的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）方法，并考察了以上成分在單次ig救必應(yīng)總?cè)频恼：透咧Y大鼠中的藥動(dòng)學(xué)行為，以期為救必應(yīng)的調(diào)血脂藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究、新藥開(kāi)發(fā)和臨床用藥安全提供參考。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠20只，4～6周齡，體質(zhì)量100～120 g，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)44005800008525。動(dòng)物飼養(yǎng)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障環(huán)境中，動(dòng)物室溫度為（23±3）℃，相對(duì)濕度為（50±5）%，光照周期為12 h亮/12 h暗。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)00203316）。

1.2 藥材

救必應(yīng)藥材（批號(hào)180101）購(gòu)自廣州至信中藥飲片有限公司，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)趙鐘祥教授鑒定為冬青科植物鐵冬青Thunb.的干燥樹(shù)皮。

1.3 藥品與試劑

對(duì)照品地高辛（批號(hào)wkq16030204，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于99.0%）購(gòu)自維克奇科技有限公司；冬青苷O（1）、oblonganoside Ⅰ（2）、rotundinoside C（3）、ilexside Ⅱ（4）、長(zhǎng)梗冬青苷（5）、苦丁冬青苷H（6）、毛冬青皂苷A1（7）、竹節(jié)參皂苷Iva（8）、救必應(yīng)酸（9）、rotundanonic acid（10）、冬青素A（11）為本課題組前期從救必應(yīng)中分離并鑒定，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98.0%，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1；色譜級(jí)乙腈、甲醇購(gòu)自德國(guó)Merck公司；質(zhì)譜級(jí)甲酸購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司；其他試劑均為分析純；普通飼料購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；SPF級(jí)高脂飼料購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.4 儀器

TripleTOF?5600＋質(zhì)譜儀（美國(guó)AB Sciex公司）；LC-30A高效液相色譜儀（日本島津公司）；真空離心濃縮儀（德國(guó)Eppendorf公司）；高速冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器開(kāi)發(fā)有限公司）；RM2245半自動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（德國(guó)Leica公司）；cobas8000全自動(dòng)生化分析儀（瑞士Roche公司）。

2 方法

2.1 救必應(yīng)總?cè)频闹苽?/h3>

取救必應(yīng)藥材10.5 kg，粉碎后以75 L 70%乙醇加熱回流提取2 h，提取4次，減壓濃縮干燥后得總提取物3200 g。取總提取物1060 g經(jīng)大孔樹(shù)脂分離，依次用75 L蒸餾水、50 L 25%乙醇、50 L 75%乙醇和50 L 95%乙醇梯度洗脫，回收75%乙醇洗脫液得640 g總?cè)?，測(cè)得總?cè)浦谢衔?～11的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.26、3.13、3.04、7.06、221.70、7.75、0.91、8.86、183.29、2.49、1.76 mg/g。

2.2 對(duì)照品溶液及內(nèi)標(biāo)溶液的制備

精密稱取化合物1～11對(duì)照品適量，分別用色譜級(jí)甲醇配制成質(zhì)量濃度為0.1、0.1、0.1、0.1、2.0、0.5、0.1、0.5、2.0、0.1、0.1 mg/mL的單一對(duì)照品儲(chǔ)備液，臨用前配制成系列質(zhì)量濃度的混合物對(duì)照品工作液。取地高辛對(duì)照品適量，精密稱定后用色譜甲醇配制成質(zhì)量濃度為0.02 mg/mL的儲(chǔ)備液，臨用前稀釋成質(zhì)量濃度為0.1 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

圖1 11個(gè)三萜成分的結(jié)構(gòu)式

2.3 色譜和質(zhì)譜條件

2.3.1 色譜條件 Waters UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動(dòng)相為0.1%甲酸乙腈溶液（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫：0～1.0 min，25%～30% A；1.0～3.5 min，30% A；3.5～7.0 min，30%～35% A；7.0～9.0 min，35%～49% A；9.0～11.0 min，49%～63% A；11.0～12.0 min，63%～70% A。柱溫為50 ℃；體積流量為0.4 mL/min；進(jìn)樣量為5 μL。

2.3.2 質(zhì)譜條件 ESI離子源；于負(fù)離子、選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式下采集數(shù)據(jù)；霧化氣和輔助加熱氣壓力為379.225 kPa；氣簾氣壓力為241.325 kPa；噴霧電壓為?4500 V。11個(gè)成分和內(nèi)標(biāo)優(yōu)化后的離子對(duì)和碰撞能參數(shù)見(jiàn)表1。

2.4 動(dòng)物分組與造模

20只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為正常組和模型組，正常組給予普通飼料，模型組給予高脂飼料，造模期間自由飲水。6周后采集正常和模型組大鼠血清，測(cè)定三酰甘油（triglycerides，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平，結(jié)合肝臟蘇木素-伊紅（HE）染色（每組3只）評(píng)價(jià)高脂血癥大鼠模型是否成功建立。

2.5 藥動(dòng)學(xué)研究

造模成功后，大鼠禁食12 h，自由飲水。總?cè)婆R用前以4%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配制成混懸液，各組大鼠單次ig救必應(yīng)總?cè)疲?.2 g/kg），ig體積為10 mL/kg。于給藥前（0 h）及給藥后0.08、0.25、0.50、0.75、1.00、1.50、2.00、4.00、6.00、8.00、12.00、24.00、48.00 h經(jīng)眼眶后靜脈叢取血0.5 mL，血樣采集后置于肝素預(yù)處理的EP管中，立即于4 ℃、4000 r/min離心10 min，吸取上層血漿，于?80 ℃保存待測(cè)。

表1 11個(gè)三萜成分和內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)

2.6 血漿樣品的處理

取100 μL自然融化的血漿，加入400 μL色譜級(jí)甲醇和100 μL內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋3 min，12 000 r/min離心10 min，取上清液真空濃縮干燥，殘?jiān)?00 μL色譜級(jí)甲醇（含0.1%甲酸）復(fù)溶，12 000 r/min離心10 min，取上清液進(jìn)樣分析。

2.7 方法學(xué)考察

2.7.1 專屬性試驗(yàn) 取空白血漿、空白血漿＋定量限質(zhì)量濃度對(duì)照品、給藥血漿樣品，按“2.6”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣分析，提取各樣品的離子流圖。

2.7.2 線性關(guān)系與靈敏度試驗(yàn) 在空白大鼠血漿中加入適量系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品工作液，使化合物1～4、6～8、10、11的終質(zhì)量濃度為200.00、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.13 ng/mL，化合物5的終質(zhì)量濃度為400.00、200.00、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.13 ng/mL，化合物9的終質(zhì)量濃度為2 000.00、1 000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91 ng/mL，按“2.6”項(xiàng)下方法處理即得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品，進(jìn)樣分析，以待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)（），待測(cè)成分的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），進(jìn)行線性回歸（權(quán)重為1/2）。另取混合對(duì)照品溶液稀釋，按“2.6”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣分析，以信噪比10作為定量限。

2.7.3 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn) 在空白大鼠血漿中加入適量的混合對(duì)照品工作液，使化合物1～4、6～8、10、11的終質(zhì)量濃度為200.00、100.00、3.13 ng/mL，化合物5的終質(zhì)量濃度為400.00、200.00、6.25 ng/mL，化合物9的終質(zhì)量濃度為2 000.00、125.00、7.81 ng/mL，按“2.6”項(xiàng)下方法處理即得高、中、低質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品，平行制備各質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣本各6份，進(jìn)樣分析，連續(xù)進(jìn)樣3 d考察日內(nèi)和日間的精密度和準(zhǔn)確度。

2.7.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 制備高、中、低質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣本各6份，進(jìn)行?80 ℃儲(chǔ)存30 d、25 ℃放置4 h、反復(fù)凍融3次試驗(yàn)，進(jìn)樣分析，計(jì)算各成分的質(zhì)量濃度。

2.7.5 基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率試驗(yàn) 取適量超純水（A）和空白血漿（B），按照“2.6”項(xiàng)下方法處理后，加入“2.2”項(xiàng)下系列質(zhì)量濃度的對(duì)照品工作液，制備相當(dāng)于質(zhì)控樣品質(zhì)量濃度（高、中、低）的樣品。另取適量空白血漿，按照“2.6”項(xiàng)下方法制備高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品（C），進(jìn)樣分析。以相同質(zhì)量濃度樣品C與B的峰面積比值計(jì)算提取回收率，B與A的峰面積比值計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)。

2.8 數(shù)據(jù)分析與處理

3 結(jié)果

3.1 高脂血癥大鼠模型的評(píng)估

如圖2-A所示，與正常組比較，模型組大鼠血清中TG、TC、LDL-C水平顯著升高（＜0.01），HDL-C水平顯著降低（＜0.01）。如圖2-B所示，模型組大鼠肝臟細(xì)胞體積較正常組腫大，呈網(wǎng)狀或蜂窩狀，胞質(zhì)內(nèi)有大量油脂滴堆集，形成脂肪空泡樣病變，提示大鼠高脂血癥模型建立成功。

與正常組比較：**P＜0.01

3.2 方法學(xué)考察

3.2.1 專屬性試驗(yàn) 如圖3所示，內(nèi)源性成分不干擾目標(biāo)成分和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)，表明方法專屬性良好。

3.2.2 線性關(guān)系與靈敏度試驗(yàn) 11個(gè)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)、線性范圍、定量限結(jié)果見(jiàn)表2，表明各成分的線性關(guān)系良好、靈敏度較高。

3.2.3 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn) 如表3所示，11個(gè)成分的精密度和準(zhǔn)確度符合生物樣品的測(cè)定要求，日內(nèi)和日間精密度的相對(duì)偏差分別小于12.6%、13.5%，日內(nèi)和日間準(zhǔn)確度的相對(duì)誤差分別為?14.9%～12.3%、?13.0%～13.0%。

圖3 空白血漿 (A1、B1)、11個(gè)成分定量限樣品 (A2、B2)以及給藥后血漿樣品 (A3、B3) 的提取離子流圖

表2 11個(gè)成分的線性關(guān)系及定量限

表3 11個(gè)成分在大鼠血漿中的日內(nèi)和日間精密度、準(zhǔn)確度以及提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)考察(n = 6)

續(xù)表3

3.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 如表4所示，11個(gè)成分在上述條件下的穩(wěn)定性良好，相對(duì)偏差小于15.0%，準(zhǔn)確度為?14.8%～14.7%。

表4 11個(gè)成分在大鼠血漿中穩(wěn)定性考察(n = 6)

3.2.5 基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率試驗(yàn) 如表3所示，該方法符合生物樣品分析時(shí)對(duì)提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)的要求，11個(gè)成分的提取回收率為86.0%～105.1%，相對(duì)偏差小于14.7%；基質(zhì)效應(yīng)為85.7%～110.5%，相對(duì)偏差小于14.2%。

3.3 血藥濃度-時(shí)間曲線和主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

測(cè)定11個(gè)成分在正常和模型組大鼠給藥后各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度，將所得數(shù)據(jù)導(dǎo)入DAS 2.0軟件以非房室模型和統(tǒng)計(jì)矩方法擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表5，血藥濃度-時(shí)間曲線見(jiàn)圖4。

表5 11個(gè)成分的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(, n = 7)

與正常組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01normal group

4 討論

4.1 優(yōu)化樣品制備及分析方法

本研究考察了固相萃取、甲醇沉淀蛋白、乙腈沉淀蛋白法處理血漿樣品時(shí)對(duì)11個(gè)成分選擇性、基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率的影響，結(jié)果表明固相萃取法的選擇性和降低基質(zhì)效應(yīng)的效果最好，但是提取回收率低于甲醇或乙腈沉淀蛋白法?？紤]到固相萃取法操作較為繁瑣和費(fèi)時(shí)，且樣品數(shù)量較多，因此首先排除固相萃取法。甲醇或乙腈沉淀蛋白法雖然基質(zhì)效應(yīng)高于固相萃取法，但是其重復(fù)性和提取回收率相對(duì)較好，且處理后樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)未對(duì)11個(gè)成分和內(nèi)標(biāo)的測(cè)定造成干擾，滿足藥動(dòng)學(xué)研究的要求?？紤]到乙腈的毒性和成本，最終選擇甲醇沉淀蛋白法作為本研究血漿樣品處理方法。

本研究考察了不同流動(dòng)相（乙腈-水、甲醇-水、0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液、0.1%甲酸甲醇溶液-0.1%甲酸水溶液）、不同色譜柱（Waters UPLC HSS T3 C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）以及Waters UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）、不同體積流量（0.3、0.4 mL/min）對(duì)11個(gè)成分和內(nèi)標(biāo)分離度與響應(yīng)的影響，結(jié)果表明當(dāng)選用0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液、Waters UPLC BEH C18色譜柱、體積流量為0.4 mL/min時(shí)各成分的分離度和響應(yīng)最好，特別是同分異構(gòu)體1和3能夠在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到基線分離。本研究采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式，并采用針泵進(jìn)樣對(duì)照品溶液優(yōu)化了相應(yīng)的質(zhì)譜條件。11個(gè)成分均為三萜，且部分結(jié)構(gòu)中含有1～3個(gè)糖分子，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[11]報(bào)道選擇地高辛作為內(nèi)標(biāo)。

4.2 藥動(dòng)學(xué)行為分析

本研究中的總?cè)平o藥劑量是根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版救必應(yīng)飲片成人用藥劑量換算所得，11個(gè)三萜成分在正常和模型組大鼠大部分時(shí)間點(diǎn)的血漿樣品中均能夠檢測(cè)到。11個(gè)成分根據(jù)結(jié)構(gòu)中含糖的數(shù)目可以分為5類：苷元（9～11）、單糖苷（5、7）、雙糖苷（2、6、8）、三糖苷（4）、四糖苷（1、3）。如圖4所示，部分成分的血藥濃度-時(shí)間曲線呈現(xiàn)了明顯的雙峰現(xiàn)象，推測(cè)可能是由于肝腸循環(huán)、小腸吸收時(shí)的不均勻性或給藥劑量偏大等因素引起的[12]。正常組大鼠單次ig救必應(yīng)總?cè)坪筌赵倪_(dá)峰時(shí)間（max）為0.8～1.1 h，單糖苷的max為1.5～2.0 h、雙糖苷的max為1.9～2.6 h、三糖苷的max為2.8 h、四糖苷的max為3.1 h，提示在正常情況下苷元通過(guò)小腸吸收入血的速度明顯快于皂苷，且皂苷含糖的數(shù)目越多吸收的速度越慢，與本課題組前期報(bào)道的正常大鼠單次ig救必應(yīng)提取物（2.0 g/kg）后測(cè)定的6個(gè)特征性成分（1、3、5、9～11）的max結(jié)果和規(guī)律基本一致[10]。正常組中11個(gè)成分的達(dá)峰濃度（max）和藥時(shí)曲線下面積（AUC0～t）與其在總?cè)浦械暮亢突瘜W(xué)結(jié)構(gòu)相關(guān)，化合物1～4、6～8、10、11的max和AUC0～t分別為34.1～152.4 nmol/L、324.3～1 413.6 nmol·h/L，化合物5（長(zhǎng)梗冬青苷）的max和AUC0～t分別為361.8 nmol/L和3 159.1 nmol·h/L，化合物9（救必應(yīng)酸）的max和AUC0～t分別為3 257.9 nmol/L和29 897.6 nmol·h/L。長(zhǎng)梗冬青苷和救必應(yīng)酸在總?cè)浦械馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為22%、18%，差別不大，但救必應(yīng)酸的max和AUC0～t分別是長(zhǎng)梗冬青苷的9.0、9.5倍。前期研究[10]也得出了類似的結(jié)論，可能是因?yàn)榫缺貞?yīng)酸作為苷元更容易吸收入血，長(zhǎng)梗冬青苷等以救必應(yīng)酸為苷元的救必應(yīng)三萜類成分能夠在腸道菌群的作用下代謝轉(zhuǎn)化為救必應(yīng)酸[13-14]，在一定程度上增加了救必應(yīng)酸的給藥濃度。

圖4 11個(gè)成分在正常和模型組中的平均血藥濃度-時(shí)間曲線(, n = 7)

11個(gè)成分在高脂血癥大鼠中的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的變化規(guī)律同正常組基本一致。苷元的入血吸收速度顯著快于皂苷，救必應(yīng)酸為ig總?cè)坪笱獫{中的主要暴露成分，且救必應(yīng)酸的max和AUC0～t遠(yuǎn)超其他10個(gè)成分的總和。與正常組相似，雖然總?cè)浦芯缺貞?yīng)酸和長(zhǎng)梗冬青苷的含量相差不大，但模型組中救必應(yīng)酸的max和AUC0～t分別是長(zhǎng)梗冬青苷的9.7、11.9倍。與正常組相比，除化合物4外，模型組其他10個(gè)成分的max均不同程度地延后；除化合物3和8外，模型組其他9個(gè)成分的max均不同程度地降低，化合物4～7、9和10有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；除化合物1和3外，模型組其他9個(gè)成分的AUC0～t均不同程度地降低，化合物2、5～7、9～11有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本課題組前期研究表明腸道菌群有助于救必應(yīng)三萜類成分吸收入血[13]，高脂血癥大鼠的腸道菌群處于失衡狀態(tài)，菌群結(jié)構(gòu)和相關(guān)酶的活力較正常狀態(tài)存在較大改變，因此疾病狀態(tài)對(duì)救必應(yīng)三萜類成分的吸收入血速率和程度可能存在較大的影響。另外，與正常大鼠相比，高脂血癥大鼠的脂肪肝樣病變可能影響藥物的代謝和排泄，腸道中膽汁酸的分泌增加可能干擾藥物的吸收，以上因素可能最終導(dǎo)致部分三萜類成分的max、max、AUC0～t不同程度地延長(zhǎng)或降低。

綜上，救必應(yīng)總?cè)浦饕煞衷谡：透咧Y大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為存在顯著差異，苷元入血吸收的速度明顯快于皂苷，且含糖的數(shù)目越多吸收入血的速度越慢。救必應(yīng)酸為ig總?cè)坪笱獫{中的主要暴露成分，max和AUC0～t遠(yuǎn)超其他10個(gè)成分的總和，推測(cè)救必應(yīng)酸可能是救必應(yīng)總?cè)瓢l(fā)揮心腦血管活性的關(guān)鍵成分。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Pharmacokinetic comparisons of main triterpenoids fromin normal and hyperlipidemia rats

YANG Bao1, 2, ZHENG Xiao-yun2, XUAN Shen-xin2, RUAN Qing-feng2, JIANG Shi-qin2, CUI Hui2, ZHAO Zhong-xiang2

1. Medical School, Hubei Minzu University, Enshi 445000, China 2. School of Pharmaceutical Sciences, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, China

To compare the pharmacokinetic behavior of main triterpenoids in normal and hyperlipidemia rats after ig total triterpenoids from.SD rats were randomly divided into normal group and model group, a hyperlipidemia rat model was prepared in model group, and blood was taken at different time points after a single ig total triterpenoids in each group. Normal and hyperlipidemia rats were given a single oral dose of total triterpenoids of. The plasma concentrations of ilexoside O, oblonganoside I, rotundinoside C, ilexside II, pedunculoside, kudinoside H, ilexsaponin A1, chikusetsusaponin IVa, rotundic acid, rotundanonic acid and ilexgenin A were quantified by UPLC-MS/MS method. The major pharmacokinetic parameters were calculated using non-compartmental analysis with DAS 2.0 software.The absorption rate of aglycone was significantly higher than that of saponin. The rate of absorption into blood was significantly reduced with the increasing of the number of sugar groups in saponin. Themaxof rotundic acid in normal and hyperlipidemia groups were 3 257.9 and 2 173.8 nmol/L, and the corresponding AUC0?twere 29 897.6 and 24 501.3 nmol·h/L, respectively, which was far more than the sum of the other 10 analytes. Compared with normal group, themax,maxand AUC0?tof most analytes in hyperlipidemia group were delayed or decreased.The pharmacokinetics of 11 analytes exhibited significant differences between two groups. Rotundic acid was the main compounds exposing in normal and hyperlipidemia rat plasma.

; total triterpenoids; UPLC-MS/MS; pharmacokinetics; hyperlipidemia; rotundic acid;pedunculoside; kudinoside H; ilexsaponin A1; rotundanonic acid

R285.61

A

0253 - 2670(2021)13 - 3905 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.13.014

2021-01-04

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（82073987）；廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2019A1515011261）；湖北民族大學(xué)博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目（DC2000000313）

楊 寶（1991—），男，博士，講師，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)。E-mail: ybsept@qq.com

趙鐘祥，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)。E-mail: zzx37@163.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]