大黃對(duì)大鼠腸道菌群的影響

聶銀利，段學(xué)清，陳 瑞，朱 晨，謝 鑫，田維毅

（1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)2018級(jí)碩士研究生，貴州 貴陽 550025；2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025）

人體消化道內(nèi)存在約100萬億個(gè)微生物群，包括細(xì)菌、古菌、病毒和真核生物，而人體腸道內(nèi)的細(xì)菌種類復(fù)雜多樣，多達(dá)500～1000種，這些細(xì)菌稱為腸道菌群，其中大腸桿菌屬（Colibacillus）、擬桿菌屬（Bacteriodes）、乳酸桿菌屬（Lactobacillus）和梭菌屬（Clostridium）等為腸道的主要優(yōu)勢菌屬［1-3］。近年來研究表明，肥胖、糖尿病和心血管等代謝紊亂性疾病與腸道菌群結(jié)構(gòu)和功能的改變密切相關(guān)［4-6］。因此，以腸道菌群為靶點(diǎn)的藥物干預(yù)可為疾病的預(yù)防及臨床治療提供新的思路。

中藥給藥主要以口服的方式，中藥進(jìn)入腸道后會(huì)對(duì)腸道菌群進(jìn)行調(diào)節(jié)，同時(shí)腸道菌群也會(huì)對(duì)中藥成分進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)化［7］。中藥大黃（Rheum palmatum L.）作為苦寒中藥，具有攻積滯、清濕熱、瀉火、涼血、祛瘀、解毒、抗炎等功效［8］。然而，大黃對(duì)各腸段菌群的作用目前尚未有報(bào)道。本研究對(duì)普通大鼠分別灌予低、中、高劑量的大黃，在連續(xù)給藥時(shí)間7、14和21天后分別檢測各腸段大腸桿菌、乳酸菌、擬桿菌和梭菌等4大腸道主要優(yōu)勢菌的數(shù)量變化。研究結(jié)果可為臨床合理使用苦寒中藥積累數(shù)據(jù)。

1 材 料

動(dòng)物。SPF級(jí)SD雄性大鼠90只，8周齡，體質(zhì)量（200±20）g，購自重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（軍）2012-0011）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（許可證號(hào)SYXK（黔）2018-0001），分籠常規(guī)飼養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水。動(dòng)物相關(guān)操作經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)NO1503018）。

藥物與試劑。大黃（Rheum palmatum L.）藥材購自北京同仁堂貴陽藥店，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)生藥專家周濤教授形態(tài)學(xué)鑒定為蓼科植物唐古特大黃干燥的莖和根。常規(guī)制備大黃水煎液，將100g大黃浸泡于1 L無菌去離子水中，進(jìn)行2次煎煮（每次30min），收集水煎液，用Millex-Gp濾器（北京博爾金科技有限公司，批號(hào)SLGP033RB）過濾除菌后4℃保存?zhèn)溆?。研究所使用的抗生素為鹽酸林可霉素注射液（河南天方藥業(yè)有限公司，批號(hào)070120049）；細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒、質(zhì)粒小提試劑盒、2×Taq PCR StarMix with Loading Dye和2×RealStar Green Fast Mixture with ROX（北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司，批號(hào)分別為B027008019、D201-04、A012-10和A303-05）。

腸道菌群。大腸桿菌（J01859）、擬桿菌（JQ186609）、乳酸菌（AP014680）和梭菌（BA000016）的16S rRNA基因序列來自GenBank（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/）數(shù)據(jù)庫，根據(jù)這些序列設(shè)計(jì)相應(yīng)的特異引物，并在GenBank（http：//www.ncbi.nlm.gov/BLAST/）上進(jìn)行比對(duì)，分析引物的特異性。引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。以上4種腸道主要優(yōu)勢菌群來自正常和藥物干預(yù)大鼠的十二指腸、空腸、回腸及結(jié)腸等腸段（含內(nèi)容物）。

2 方 法

分組與給藥。90只大鼠隨機(jī)分為正常組、大黃低劑量組、大黃中劑量組、大黃高劑量組和抗生素組（每組18只）。中藥給藥劑量為高劑量7.5g/kg，中劑量1.5g/kg，低劑量0.3g/kg［9］；抗生素給藥劑量為0.2g/kg［10］；正常組灌予等體積無菌去離子水。給藥方式為灌胃且體積為每天2mL/只，連續(xù)灌胃21天。

取材。在藥物干預(yù)7、14和21天后隨機(jī)分別抽取各組大鼠6只斷椎處死，大鼠處死前需12 h禁食。收集大鼠十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸等各段腸管（含內(nèi)容物）于無菌試管內(nèi)，-80 ℃保存?zhèn)溆?，整個(gè)取材過程均為無菌操作。

菌群分析。提取上述所取樣品的基因組DNA（試劑盒法）。用大腸桿菌、擬桿菌、乳酸菌、及梭菌等4種腸道優(yōu)勢菌的16S rRNA基因特異性引物和各腸段樣本DNA（正常組）模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，分別構(gòu)建含各優(yōu)勢菌特異片段的克隆載體，并獲得相應(yīng)的質(zhì)粒。以這些質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品，用NanoDrop Lite型核酸蛋白檢測儀（美國Thermo公司）檢測其吸光度（A260值），參照劉茜明等［11］換算1μL各標(biāo)準(zhǔn)品基因組DNA的拷貝數(shù)，并將各標(biāo)準(zhǔn)品DNA以10倍梯度稀釋至1μL樣品中目的DNA的拷貝數(shù)為1×107～1×102。以這些稀釋后的目的DNA為模板進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)。以標(biāo)準(zhǔn)品DNA拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以反應(yīng)過程中達(dá)到熒光閾值的初始循環(huán)數(shù)（Ct）為縱坐標(biāo)，分別繪制上述4種腸道主要優(yōu)勢菌的qRT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線。將正常組、大黃低劑量組、大黃中劑量組、大黃高劑量組和抗生素組的各腸段樣本基因組DNA稀釋10倍作為模板進(jìn)行qRTPCR反應(yīng)，獲得相應(yīng)的Ct值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出各樣本基因組DNA拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值［12］。上述qRT-PCR反應(yīng)中，每個(gè)實(shí)驗(yàn)均做3個(gè)樣本重復(fù)和3次生物學(xué)重復(fù)。

PCR和qRT-PCR反應(yīng)的引物為大腸桿菌，5'-AATGGCGCATACAAAGAGAAGC-3'，5'-GTTGCAGACTCCAATCCGGA-3'，擴(kuò)增片段長度為119 bp；擬桿菌，5'-TGGGTTTAAAGGGAGCGTAG-3'，5'-TGCGTACTCAAGGAAACCAG-3'，擴(kuò)增片段長度為138bp；乳酸菌，5'-GAGTTTGATCCTGGCTCAGGA-3'，5'-GGAACTTGGAGACAGGTGGT-3'，擴(kuò)增片段長度為111bp；梭菌，5'-AATGGCGCATACAAAGAGAAGC-3'，5'-AACGGCGGTCTCATTAGAGT-3'，擴(kuò)增片段長度為117 bp。PCR反應(yīng)2×Taq PCR StarMix with Loading Dye 10μL，10μmoL/L的正、反向引物各1μL，模板DNA 0.5μL，補(bǔ)水至20μL。程序?yàn)?4℃ 5min，94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 30s，35個(gè)循環(huán)，72℃5min。反應(yīng)于TC-96型梯度PCR儀（杭州博日科技有限公司）上進(jìn)行。qRT-PCR：2×RealStar Green Fast Mixture with ROX 10μL，10μmoL/L-1的正、反向引物各0.5μL，模板DNA 1μL，補(bǔ)水至20μL，程序?yàn)椋?5℃ 2min，95℃ 10s，60℃ 30s，40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)于CFX96 TOUCH型實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）儀（美國Bio-Rad公司）上進(jìn)行。

3 結(jié) 果

細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線。以對(duì)照品DNA為模板進(jìn)行qRTPCR，繪制大腸桿菌、擬桿菌、乳酸菌及梭菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線，各菌模板濃度的對(duì)數(shù)與Ct之間呈較好的線性關(guān)系。

大腸桿菌。相較于正常組。①在十二指腸：大黃低、中、高劑量組和抗生素組大腸桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和21天后都顯著降低；在連續(xù)給藥14天后，大黃低劑量組和抗生素組大腸桿菌數(shù)量顯著降低，而大黃中、高劑量組大腸桿菌數(shù)量無明顯變化（圖1A）。②在空腸：大黃低劑量組大腸桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后顯著降低，在連續(xù)給藥14天后出現(xiàn)顯著升高，而在連續(xù)給藥21天后無明顯變化；大黃中、高劑量組大腸桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后都顯著降低，而在連續(xù)給藥14天和21天后都顯著升高；抗生素組大腸桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后無明顯變化，而在連續(xù)給藥14天和21天后都顯著升高（圖1B）。③在回腸：大黃低劑量組大腸桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7、14和21天后顯著升高；大黃中劑量組和抗生素組大腸桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后無明顯變化，在連續(xù)給藥14天和21天后顯著升高；大黃高劑量組大腸桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7和14天后無明顯變化，在連續(xù)給藥21天后出現(xiàn)顯著升高（圖1C）。④在結(jié)腸：大黃低、中、高劑量組大腸桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后都顯著升高，在連續(xù)給藥14天后，大黃低劑量組大腸桿菌數(shù)量出現(xiàn)顯著降低，而大黃中、高劑量組大腸桿菌數(shù)量都無明顯變化，在連續(xù)給藥21天后，大黃低劑量組大腸桿菌數(shù)量繼續(xù)顯著降低，而大黃中、高劑量組大腸桿菌數(shù)量都出現(xiàn)顯著降低；大黃抗生素組大腸桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7、14和21天后都顯著降低（圖1D）。以上結(jié)果提示：①本研究所使用的抗生素劑量能促進(jìn)空腸和回腸大腸桿菌的生長，抑制十二指腸和結(jié)腸大腸桿菌的生長；②大黃對(duì)十二指腸大腸桿菌的生長具有抑制效應(yīng)，對(duì)回腸大腸桿菌的生長具有促進(jìn)效應(yīng)，對(duì)空腸大腸桿菌生長的影響是先抑制后促進(jìn)，而對(duì)結(jié)腸大腸桿菌生長的影響是先促進(jìn)后抑制。以上促進(jìn)或抑制效應(yīng)有著明顯的量-時(shí)規(guī)律。

圖1中A-D分別為連續(xù)給藥7、14和21天后大鼠十二指腸、空腸、回腸及結(jié)腸大腸桿菌數(shù)量的變化。

圖1 大黃對(duì)大鼠各腸段大腸桿菌數(shù)量的影響 （±s，n=6）

擬桿菌。相較于正常組。①在十二指腸，大黃低、中、高劑量組和抗生素組擬桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后都顯著升高，連續(xù)給藥14天后都顯著降低，連續(xù)給藥21天后都無明顯變化，且大黃高劑量組較大黃低、中劑量組變化大（圖2A）。②在空腸：大黃低、中、高劑量組擬桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和14天后都無明顯變化，在連續(xù)給藥21天后均顯著升高，且大黃低劑量組較大黃中、高劑量組變化大；抗生素組擬桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后顯著升高，在連續(xù)給藥14天后顯著降低，在連續(xù)給藥21天后無明顯變化（圖2B）。③在回腸：大黃低、中、高劑量組擬桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7和21天后都顯著升高，在連續(xù)給藥14天后都無明顯變化；抗生素組擬桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7和14天后無明顯變化，在連續(xù)給藥21天后顯著升高（圖2C）。④在結(jié)腸：大黃低、中、高劑量組擬桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7、14和21天后均顯著升高；抗生素組擬桿菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和14天后無明顯變化，在連續(xù)給藥21天后顯著降低（圖2D）。以上結(jié)果提示：①研究所使用的抗生素劑量能促進(jìn)回腸擬桿菌的生長，抑制結(jié)腸擬桿菌的生長，對(duì)十二指腸和空腸擬桿菌生長的影響是先促進(jìn)后抑制；②大黃對(duì)空腸、回腸和結(jié)腸擬桿菌的生長具有促進(jìn)效應(yīng)，而對(duì)十二指腸擬桿菌生長的影響是先促進(jìn)后抑制。以上促進(jìn)或抑制效應(yīng)有著明顯的量-時(shí)規(guī)律。

圖2中A-D分別為連續(xù)給藥7、14和21天后大鼠十二指腸、空腸、回腸及結(jié)腸擬桿菌數(shù)量的變化。

圖2 大黃對(duì)大鼠各腸段擬桿菌數(shù)量的影響 （±s，n=6）

乳酸菌。相較于正常組。①在十二指腸：大黃低、中、高劑量組和抗生素組乳酸菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和14天后都無明顯變化；在連續(xù)給藥21天后，大黃低、中、高劑量組乳酸菌數(shù)量都顯著升高，抗生素組乳酸菌數(shù)量顯著降低（圖3A）。②在空腸：大黃中、高劑量組乳酸菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和14天后均顯著降低，在連續(xù)給藥21天后均顯著升高；大黃低劑量組乳酸菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后顯著降低；在連續(xù)給藥14天后無明顯變化，在連續(xù)給藥21天后均顯著升高；抗生素組乳酸菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后無明顯變化，在連續(xù)給藥14天后顯著降低，在連續(xù)給藥21天后顯著升高（圖3B）。③在回腸：大黃低、中、高劑量組乳酸菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后都顯著升高，在連續(xù)給藥14天和21天后均顯著降低；抗生素組乳酸菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和21天后顯著升高，在連續(xù)給藥14天后顯著降低（圖3C）。④在結(jié)腸：大黃低、中、高劑量組乳酸菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后均顯著升高，在連續(xù)給藥14天和21天后均顯著降低；抗生素組乳酸菌數(shù)量在連續(xù)給藥7、14和21天后無明顯變化（圖3D）。以上結(jié)果提示：①本研究所使用的抗生素劑量能促進(jìn)回腸乳酸菌的生長，抑制十二指腸乳酸菌的生長，對(duì)空腸乳酸菌生長的影響是先抑制后促進(jìn)，對(duì)結(jié)腸乳酸菌的生長無影響；②大黃對(duì)十二指腸乳酸菌的生長具有促進(jìn)效應(yīng)，對(duì)空腸乳酸菌生長的影響是先抑制后促進(jìn)，對(duì)回腸和結(jié)腸乳酸菌生長的影響是先促進(jìn)后抑制。以上促進(jìn)或抑制效應(yīng)有著明顯的量-時(shí)規(guī)律。

圖3中A-D分別為連續(xù)給藥7、14和21天后大鼠十二指腸、空腸、回腸及結(jié)腸乳酸菌數(shù)量的變化。

圖3 大黃對(duì)大鼠各腸段乳酸菌數(shù)量的影響 （±s，n=6）

梭菌。相較于正常組。①在十二指腸：大黃低、中劑量組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7、14和21天后都顯著降低；大黃高劑量組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后顯著降低，在連續(xù)給藥14天和21天后無明顯變化；抗生素組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和14天后顯著降低，在連續(xù)給藥21天后無明顯變化（圖4A）。②在空腸：大黃中、高劑量組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7、14和21天后均顯著降低；大黃低劑量組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和21天后顯著降低，在連續(xù)給藥14天后無明顯變化；抗生素組梭菌的數(shù)量在連續(xù)給藥7天和14天后出現(xiàn)顯著降低，在連續(xù)給藥21天后無明顯變化（圖4B）。③在回腸：大黃低、中、高劑量組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7和21天后均顯著降低，在連續(xù)給藥14天后無明顯變化；抗生素組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和21天后無明顯變化，在連續(xù)給藥14天后顯著降低（圖4C）。④在結(jié)腸：大黃低劑量組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7和21天后顯著降低，在連續(xù)給藥14天后無明顯變化；大黃中劑量組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后顯著降低，在連續(xù)給藥14天和21天后無明顯變化；大黃高劑量組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天和14天后顯著降低，在連續(xù)給藥21天后無明顯變化；抗生素組梭菌數(shù)量在連續(xù)給藥7天后明顯升高，在連續(xù)給藥14天后無明顯變化，在連續(xù)給藥21天后顯著降低（圖4D）。以上結(jié)果提示：①本研究所使用的抗生素劑量能抑制十二指腸、空腸和回腸梭菌的生長，對(duì)結(jié)腸梭菌生長的影響是先促進(jìn)后抑制；②大黃對(duì)十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸梭菌的生長具有抑制效應(yīng)。以上促進(jìn)或抑制效應(yīng)有著明顯的量-時(shí)規(guī)律。

圖4中A-D分別為連續(xù)給藥7、14和21天后大鼠十二指腸、空腸、回腸及結(jié)腸梭菌數(shù)量的變化。

圖4 大黃對(duì)大鼠各腸段梭菌數(shù)量的影響 （±s，n=6）

大黃對(duì)腸道大腸桿菌、擬桿菌、乳酸菌和梭菌等4大優(yōu)勢菌數(shù)量的影響在各腸段有一定的差異，且存在量-時(shí)規(guī)律。

4 討 論

近年來，臨床和實(shí)驗(yàn)研究表明，中西醫(yī)結(jié)合治療可顯著提高疾病的療效［13］。大黃是蓼科植物的一種，在中國作為草藥使用多年。研究發(fā)現(xiàn)，大黃及其活性成分大黃素通過降低炎癥因子的表達(dá)水平而具有強(qiáng)大的抗炎活性，從而降低炎癥對(duì)身體損害，并可治療急性胰腺炎［14］。Karakan等［15］報(bào)道了急性胰腺炎與腸道菌群失調(diào)有關(guān)。另外，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載大黃粉有通便、瀉藥作用［16］。Lin等［17］也報(bào)道了大黃具有通便和瀉藥的作用，提示大黃能縮短腸功能恢復(fù)的時(shí)間，緩解腹脹和腹痛。由此可見，了解大黃對(duì)各腸段腸道菌群的影響是非常必要的。

然而，在腸道中，由于各腸段的生理狀態(tài)不同及個(gè)體差異使得腸道菌群在腸道內(nèi)的分布存在差異［18-20］。大量的研究顯示，十二指腸主要分布著大腸菌和厭氧菌；空腸主要分布著鏈球菌、葡萄球菌和乳酸桿菌等需氧菌；回腸主要分布著厭氧菌和需氧菌，且厭氧菌多于需氧菌；結(jié)腸主要分布著專性厭氧菌，且可能由于結(jié)腸蠕動(dòng)緩慢，弱堿性或中性的環(huán)境導(dǎo)致結(jié)腸中細(xì)菌的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于十二指腸、空腸和回腸中的細(xì)菌含量［21-23］。

大黃對(duì)大腸桿菌的影響。大腸桿菌為革蘭氏陰性桿菌，也是目前臨床腸道感染常見的條件致病菌，具有多重耐藥的特性［24］。許多研究顯示，大腸桿菌與炎癥性腸病和腸道癌癥密切相關(guān)［25-27］。研究中，在十二指腸：低、中、高劑量的大黃連續(xù)給藥7天和21天都對(duì)大腸桿菌的生長具有抑制作用；然而，在連續(xù)給藥14天后，中、高劑量大黃對(duì)大腸桿菌生長的抑制作用喪失。這一現(xiàn)象可能是由于連續(xù)給藥使得腸道菌群紊亂所致。在空腸：低、中、高劑量大黃連續(xù)給藥7天對(duì)大腸桿菌的生長具有抑制作用，而在連續(xù)給藥14天后這種抑制作用變?yōu)榇龠M(jìn)作用。這一現(xiàn)象可能是由連續(xù)給藥干擾了腸道內(nèi)其他菌群的生長，而對(duì)大腸桿菌的生物拮抗能力減弱導(dǎo)致。在回腸：低、中、高劑量大黃對(duì)大腸桿菌的生長具有促進(jìn)作用，只是中、高劑量大黃對(duì)大腸桿菌生長的促進(jìn)作用來得較晚。這一現(xiàn)象可能是中藥的雙向調(diào)節(jié)作用引起。在中藥的干預(yù)中，由于其成分復(fù)雜多樣及各成分的含量差異常常使得中藥表現(xiàn)多種效果，且就某一成分而言，其藥效在一定范圍內(nèi)隨著劑量的升高而增加，也有可能兩方面的藥效中和，表現(xiàn)平衡狀態(tài)［28］。因此，高劑量和低劑量中藥常常表現(xiàn)藥效相反的現(xiàn)象。如靳珠華等［29］研究發(fā)現(xiàn)，大黃多糖能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞內(nèi)鈣內(nèi)流，但隨著大黃多糖劑量的增加，這種促進(jìn)作用轉(zhuǎn)變?yōu)橐种谱饔?。在結(jié)腸：低、中、高劑量大黃對(duì)大腸桿菌的生長先表現(xiàn)促進(jìn)作用后表現(xiàn)抑制作用。中醫(yī)認(rèn)為大黃具有通便、瀉藥作用。這一現(xiàn)象可能是由于大黃通過排泄將大腸桿菌排出所致?？傊嘶啬c，大黃對(duì)十二指腸、空腸和結(jié)腸大腸桿菌的生長在一定的給藥時(shí)間內(nèi)都具有抑制作用。以上結(jié)果提示大黃可通過抑制大腸桿菌的生長有效預(yù)防和改善炎癥性腸病和腸道癌癥。見圖1。

大黃對(duì)擬桿菌的影響。擬桿菌屬是腸道厭氧性革蘭氏陰性桿菌，其具有分解多糖和調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)的功能［30-31］。Larsen等［32］和Ley等［33］報(bào)道了擬桿菌屬與糖尿病、肥胖等代謝性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究中，在十二指腸：低、中、高劑量大黃對(duì)擬桿菌的生長先表現(xiàn)促進(jìn)作用后表現(xiàn)抑制作用，且高劑量較低、中劑量的作用更明顯。這一現(xiàn)象可能是由于連續(xù)給藥干擾了腸道內(nèi)其他菌群的生長，而對(duì)擬桿菌生長的促進(jìn)作用減弱導(dǎo)致。在空腸、回腸和結(jié)腸：大黃對(duì)空腸、回腸和結(jié)腸擬桿菌的生長都具有促進(jìn)作用的趨勢。且在空腸，大黃的這種促進(jìn)作用來得較遲。在回腸，大黃的這種促進(jìn)作用在連續(xù)給藥14天后并不顯現(xiàn)。這一現(xiàn)象可能是由于連續(xù)給藥使得腸道菌群紊亂和中藥的雙向調(diào)節(jié)作用所導(dǎo)致。大黃對(duì)十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸擬桿菌的生長在一定的給藥時(shí)間內(nèi)都有促進(jìn)作用的趨勢。以上結(jié)果提示大黃可促進(jìn)擬桿菌的生長，這為大黃治療糖尿病、肥胖等代謝性疾病提供數(shù)據(jù)。見圖2。

大黃對(duì)乳酸菌的影響。乳酸菌為腸道內(nèi)常見的革蘭氏陽性菌，是益生菌。它可調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)的平衡來維持機(jī)體的健康。另外，乳酸菌還具有抗腫瘤，降低膽固醇和治療便秘和腹瀉等功能［34-36］。另外，有研究顯示乳酸菌能修復(fù)腸道的菌群失調(diào)從而有助于治療膿毒癥［37］。本研究中，在十二指腸：低、中、高劑量大黃能促進(jìn)乳酸菌的生長，這種促進(jìn)作用在連續(xù)給藥21天后才顯著。在空腸：低、中、高劑量大黃對(duì)乳酸菌的生長先表現(xiàn)抑制作用后表現(xiàn)促進(jìn)作用。這一現(xiàn)象可能是由于連續(xù)給藥干擾了腸道內(nèi)其他菌群的生長，而對(duì)乳酸菌的生物拮抗能力減弱導(dǎo)致。在回腸：低、中、高劑量大黃對(duì)乳酸菌的生長先表現(xiàn)促進(jìn)作用后表現(xiàn)抑制作用。這一現(xiàn)象可能是由于連續(xù)給藥使得腸道菌群紊亂所致。在回腸：低、中、高劑量大黃對(duì)擬桿菌的生長先表現(xiàn)促進(jìn)作用后表現(xiàn)抑制作用。中醫(yī)認(rèn)為大黃具有通便、瀉藥作用。這一現(xiàn)象可能是由于大黃通過排泄將乳酸菌排出所致。總之，大黃對(duì)十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸乳酸菌的生長在一定的給藥時(shí)間內(nèi)都有促進(jìn)作用的趨勢。以上結(jié)果提示大黃可通過增加乳酸菌的數(shù)量來調(diào)節(jié)腸道菌群的生態(tài)平衡來預(yù)防和治療膿毒癥、腫瘤和便秘等疾病。見圖3。

大黃對(duì)梭菌的影響。梭菌屬為專性厭氧的革蘭氏陽性菌，其可分泌外毒素。有研究顯示，梭菌與腸道癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［38-39］。另外，Vrieze等［40］研究發(fā)現(xiàn)，腸道梭菌數(shù)量增加使得脂蛋白酶在腸道中的活性增強(qiáng)，從而導(dǎo)致脂肪的堆積引起肥胖。本研究中，大黃能抑制十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸梭菌的生長。然而，在十二指腸，高劑量大黃的這種抑制作用在連續(xù)給藥14天和21天后喪失；在空腸，低劑量大黃的這種抑制作用在連續(xù)給藥14天后喪失；在回腸，低、中、高劑量大黃的這種抑制作用在連續(xù)給藥14天后喪失；在結(jié)腸，低劑量這種抑制作用在連續(xù)給藥14天后喪失，中劑量這種抑制作用在連續(xù)給藥14和21天后喪失，高劑量這種抑制作用在連續(xù)給藥21天后喪失。出現(xiàn)這一現(xiàn)象可能是由于連續(xù)給藥使得腸道菌群紊亂和中藥的雙向調(diào)節(jié)作用所導(dǎo)致?？傊簏S對(duì)十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸梭菌的生長具有抑制效應(yīng)。以上結(jié)果提示大黃可通過抑制梭菌的生長來預(yù)防和改善腸道癌癥和肥胖。見圖4。

另外，抗生素的廣泛應(yīng)用導(dǎo)致大量耐藥菌的產(chǎn)生，這已經(jīng)困擾了醫(yī)學(xué)界許多年。因此，抗生素的合理使用備受人們的廣泛關(guān)注。在本研究中，林可霉素的使用也導(dǎo)致腸道菌群的微生態(tài)紊亂，這一現(xiàn)象與羅海燕等［41］研究發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象相類似。見圖1-4。

綜上所述，大黃對(duì)腸道菌群的影響在各腸段存在一定的差異，且具有明顯的量-時(shí)規(guī)律。