甲狀腺乳頭狀癌腫瘤出芽情況與臨床病理特征相關(guān)性研究

房 芹,白玉勤

(1.錦州醫(yī)科大學(xué),遼寧 錦州121000；2.赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000)

甲狀腺癌是一種常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥之一，如今隨著檢查技術(shù)的提高，發(fā)現(xiàn)率逐年增加。據(jù)國(guó)外統(tǒng)計(jì)，近30年發(fā)病人數(shù)已增加至3倍，且癌癥發(fā)病率排前三[1-3]。甲狀腺癌一般見于女性，平均年齡為30～50歲。甲狀腺癌有好幾種分型，如乳頭狀癌、濾泡狀癌、未分化癌以及髓樣癌。其中甲狀腺乳頭狀癌最常見，甲狀腺微乳頭狀癌主要是指腫瘤直徑≤1.0 cm的甲狀腺癌，甲狀腺癌嚴(yán)重危害人類身體健康，對(duì)患者心理狀態(tài)也造成不良影響[4]。腫瘤出芽是存在于腫瘤浸潤(rùn)前緣、散在的呈未分化形態(tài)的單個(gè)腫瘤細(xì)胞或4個(gè)細(xì)胞構(gòu)成的小灶狀腫瘤細(xì)胞群[5]。甲狀腺一般隨著病情進(jìn)展，出芽表示腫瘤有侵襲發(fā)展及轉(zhuǎn)移的可能性，所以一般提示甲狀腺乳頭狀癌有惡性發(fā)展的可能性，預(yù)后一般不佳。而且有多個(gè)學(xué)者[6]表示腫瘤出芽是反映腫瘤侵襲能力和預(yù)后的不良因素，比如可用于評(píng)估胃腸道、鼻咽、胰腺、肺、食管、盆腔等各個(gè)臟器的惡性腫瘤，對(duì)于患者預(yù)后具有良好提示作用。本文選取在我院外科住院的甲狀腺癌乳頭狀癌患者，所有患者均行根治手術(shù)治療，共319例。采用HE染色和免疫組化法，光鏡下檢測(cè)出甲狀腺乳頭狀癌腫瘤出芽情況，研究出芽與否和臨床病理特征的相關(guān)性，為臨床上及早發(fā)現(xiàn)預(yù)后不良因素提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012—2020年在我院外科行根治手術(shù)的甲狀腺癌乳頭狀癌患者共319例作為研究對(duì)象。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床病理信息以及病歷資料完整，且無(wú)其他系統(tǒng)疾??；②患者經(jīng)針吸細(xì)胞學(xué)病理學(xué)檢查確診為甲狀腺乳頭狀癌；③所有患者術(shù)前均未經(jīng)過(guò)化放療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重肝腎功能不全及血液系統(tǒng)疾病或患有其他系統(tǒng)的惡性腫瘤；②伴有嚴(yán)重心腦腎等臟器損傷、精神和神經(jīng)異常以及臨床資料不全的患者；③意識(shí)不清的患者。所有患者自愿參與本研究并簽署相關(guān)知情同意書。其中男性61例，女性258例。年齡33～74 歲，平均(65.9±11.6)歲，以50歲進(jìn)行分析，年齡≤50歲為163例，年齡>50歲為156例。腫瘤直徑≥1 cm有70例，<1 cm有249例；臨床T分期中T1-T2期231例，T3-T4期88例；病理分期中Ⅰ-Ⅱ期219例，Ⅲ-Ⅳ期100例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者87例，未發(fā)生轉(zhuǎn)移者232例；40例發(fā)生周圍神經(jīng)侵襲，279例未發(fā)生；121例患者發(fā)生被膜侵犯，有單側(cè)病灶患者為187例。

1.2 免疫組化方法及染色 將取出的所有甲狀腺乳頭狀癌患者標(biāo)本快速浸泡在10%中性甲醛溶液中固定，然后將厚度為3 μm的石蠟包埋切片在72 ℃烘烤1 h。然后將石蠟切片浸泡在二甲苯Ⅰ溶液中10 min，時(shí)間控制在5 min。二甲苯Ⅱ脫蠟5 min。石蠟切片在室溫下浸泡在梯度洗脫液中，乙醇濃度分別為95%、90%和85%各1 min，然后用流水沖洗2 min。1%鹽酸乙醇分化20 s，自來(lái)水沖洗5 min，變成藍(lán)色。用蒸餾水洗滌1 min。伊紅染色20 s至5 min，自來(lái)水沖洗30 s。濃度分別為85%，95%和無(wú)水乙醇Ⅱ的酒精精梯度再洗脫。染色和洗脫完成后，用二甲苯使切片透明，然后用中性膠密封切片，在適當(dāng)?shù)姆糯蟊稊?shù)下觀察切片。采用SP法進(jìn)行免疫組化染色。石蠟切片脫蠟至水:連續(xù)切片(3 μm)， 72 ℃烘干1 h。將切片依次放入二甲苯脫蠟2～3缸，10 min/缸，梯度酒精100%、100%、95%、75%，2 min/缸;PBS洗滌5次，2 min/次。高壓修復(fù):將修復(fù)液放入高壓鍋中預(yù)熱。煮沸后，將置于塑料染色架上的玻片放入修復(fù)液中，修復(fù)液必須完全覆蓋;蓋組織。限壓閥轉(zhuǎn)動(dòng)空氣噴射后，啟動(dòng)定時(shí)2.5 min，同時(shí)將電磁爐由高火調(diào)至中火。從熱源處取出，用冷水冷卻至室溫。PBS洗滌3～5次，2 min/次。阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶并封閉:將切片置于3%過(guò)氧化氫中，室溫孵育10～15 min;清洗蒸餾水至干凈，用PAP筆畫圈。PBS洗滌3～5次，2 min/次。加一抗，二抗加入，再進(jìn)行DAB顯色，復(fù)染細(xì)胞核，最后用自來(lái)水沖洗。脫水封片時(shí)逐步梯度酒精脫水，二甲苯透明，密封片。

1.3 觀察指標(biāo) ①觀察甲狀腺乳頭狀癌的腫瘤出芽率，包括低出芽和高出芽率，判斷標(biāo)準(zhǔn)按照Ueno等[7]的標(biāo)準(zhǔn)，在腫瘤浸潤(rùn)前沿的間質(zhì)內(nèi)見到單個(gè)孤立的腫瘤細(xì)胞，腫瘤出芽為不超過(guò)4個(gè)的小簇狀腫瘤細(xì)胞群，無(wú)出芽一般指最深間質(zhì)內(nèi)未見到單個(gè)癌細(xì)胞或癌巢。②有無(wú)出芽患者在年齡、性別、腫瘤直徑大小、腫瘤病灶、臨床TNM分期、有無(wú)被膜侵犯、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否侵犯周圍神經(jīng)以及病理分期等具體例數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 甲狀腺乳頭狀癌腫瘤性出芽情況 甲狀腺乳頭狀癌有出芽的患者為111例，無(wú)出芽患者為208例，HE染色(圖1A)、CK19標(biāo)記(圖1B)是低倍鏡下(40倍)觀察，隨機(jī)選擇兩處腫瘤高出芽處(圖1C、D)400鏡下放大繼續(xù)觀察腫瘤出芽，鏡下可見CK19標(biāo)記的腫瘤灶，計(jì)數(shù)出芽數(shù)量≥10個(gè)/HPF，即為高出芽。HE染色(圖1C)、CK19標(biāo)記(圖1D)觀察腫瘤出芽情況為低度出芽，計(jì)數(shù)出芽數(shù)量<10個(gè)/HPF。HE染色(圖2A)、CK19標(biāo)記(圖2B)在100倍光鏡下未能觀察到在腫瘤浸潤(rùn)前緣，與正常組織交界的區(qū)域，區(qū)域內(nèi)的單個(gè)或小灶狀癌細(xì)胞群組成的芽孢，即無(wú)出芽，圖2C、D為低出芽。

A：HE染色,×40;B：CK19免疫組化標(biāo)記,×40;C、D：B圖出芽部位放大,×400

A、B：甲狀腺乳頭狀癌不出芽；C、D：甲狀腺乳頭狀癌低度出芽;A、C：HE染色,×40；B、D：CK19蛋白免疫組化染色,×40

2.2 甲狀腺乳頭狀癌腫瘤出芽與臨床病理特征關(guān)系 甲狀腺乳頭狀癌出芽率為34.80%，為111例，無(wú)出芽患者為65.20%，為208例。兩組乳頭狀癌患者年齡、性別、腫瘤的直徑大小、腫瘤的單雙側(cè)病灶等因素比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)；而有無(wú)被膜侵犯、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期、臨床T分期以及是否侵犯周圍神經(jīng)等因素比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表1。

表1 甲狀腺乳頭狀癌腫瘤出芽與臨床病理特征關(guān)系(例)

2.3 甲狀腺乳頭狀癌高低出芽率與臨床病理特征關(guān)系 出芽的患者中低出芽56例，高出芽55例，其中高出芽的患者發(fā)生被膜侵犯、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理Ⅲ-Ⅳ期、臨床T3-T4分期以及侵犯周圍神經(jīng)例數(shù)明顯高于低出芽患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

表2 甲狀腺乳頭狀癌高低出芽率與臨床病理特征關(guān)系(例)

3 討 論

早期甲狀腺乳頭狀癌臨床表現(xiàn)并不顯著，查體時(shí)可在甲狀腺觸及表面腫塊，一般無(wú)壓痛。甲狀腺腫塊一般發(fā)生在一側(cè)腺葉，甚至發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移會(huì)有吞咽困難、聲音嘶啞等，一般女性患者患病率高于男性，此病首選彩超檢查，初步診斷率不高[8-11]。甲狀腺癌的臨床分型一般是分化型，且以乳頭狀和濾泡狀較常見，甲狀腺乳頭狀癌的組織學(xué)特點(diǎn)為細(xì)胞核大且聚集重疊，一般呈現(xiàn)出毛玻璃樣核、核溝、核內(nèi)包涵體等[12]。甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病原因較多，有碘攝入量不足，遺傳因素，礦物質(zhì)等化學(xué)污染等原因，甲狀腺乳頭狀癌手術(shù)方式一般采取根治手術(shù)[13]。甲狀腺癌的預(yù)后較好，有研究表示普通患者生存時(shí)間可達(dá)10年以上，有遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者稍短一般可至5年左右[14-15]。Lee 等[16]表示腫瘤出芽是腫瘤發(fā)生侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等預(yù)后不良的相關(guān)因素之一。

本研究中，甲狀腺乳頭狀癌的腫瘤出芽與否與年齡、性別、腫瘤的直徑大小、腫瘤是否為單雙側(cè)病灶關(guān)系不大；甲狀腺乳頭狀癌腫瘤有出芽表示有被膜侵犯、臨床分期、病理分期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及周圍神經(jīng)侵犯的可能性更大。這與盧巍等[17]研究結(jié)果具有相似之處，患者腫瘤出芽會(huì)受到臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素的影響，而與患者的年齡、腫瘤大小及位置、病理類型以及多中心癌灶等多種因素沒有影響。有研究表明腫瘤病灶直徑越大的甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性越大。對(duì)應(yīng)的甲狀腺癌腫瘤病灶直徑越小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率就越低[18-19]。這也與本研究具有相似之處。

另外研究還發(fā)現(xiàn)，高出芽的患者發(fā)生被膜侵犯、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理Ⅲ-Ⅳ期、臨床T3-T4分期以及侵犯周圍神經(jīng)例數(shù)明顯高于低出芽患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;此說(shuō)明高出芽腫瘤患者預(yù)后不及低出芽患者，高出芽甲狀腺乳頭狀腫瘤患者更容易發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。Sumeyye等[20]研究發(fā)現(xiàn)有腫瘤出芽的患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于無(wú)出芽的患者而且發(fā)現(xiàn)有腫瘤出芽的患者發(fā)生侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性更大。而且高出芽患者生存時(shí)間較低出芽患者短，預(yù)后更差，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與本研究結(jié)果有相似。

綜上所述，甲狀腺乳頭狀癌的腫瘤出芽與臨床病理特征關(guān)系密切，甲狀腺乳頭狀癌腫瘤有無(wú)出芽與年齡、性別、腫瘤的直徑大小、腫瘤的單雙側(cè)病灶沒有關(guān)系；而與有無(wú)被膜侵犯、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期、臨床T分期以及是否侵犯周圍神經(jīng)等因素有關(guān)，且高出芽腫瘤患者預(yù)后不及低出芽患者，差異顯著,為今后臨床工作者及早發(fā)現(xiàn)預(yù)后不良患者提供參考。