血清miR?155、miR?302b、miR?208a水平與AMI患者PCI術(shù)后MACE發(fā)生的關(guān)系

孫大敬 王小虎 曹凌飛 秦明明 龍慧珍

作者單位：1.河南省人民醫(yī)院省直第一醫(yī)院（河南省直屬機(jī)關(guān)第一門(mén)診部）心內(nèi)科，河南，鄭州450000

2.河南省省立醫(yī)院心內(nèi)科，河南，鄭州450000

3.河南省胸科醫(yī)院心內(nèi)科，河南，鄭州450000

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）為冠狀動(dòng)脈堵塞所引起的嚴(yán)重冠心病，可引發(fā)多種并發(fā)癥，對(duì)患者生命安全威脅極大。經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（percutaneous transluminal coro?nary intervention，PCI）是當(dāng)前臨床治療AMI 的重要手段之一，其可疏通堵塞血管，改善心肌缺血，緩解患者臨床癥狀［1?2］。研究發(fā)現(xiàn)，AMI 患者術(shù)后易發(fā)生主要不良心血管事件（major adverse cardiovascular events，MACE），包括心絞痛、急性心力衰竭、心源性死亡等［3］。及早預(yù)測(cè)MACE 發(fā)生，有利于向患者實(shí)施針對(duì)性干預(yù)措施，以降低MACE 發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，改善其預(yù)后。微小RNA（microRNA，miRNA）能夠與靶基因mRNA 互補(bǔ)結(jié)合，繼而調(diào)控靶基因表達(dá)［4］。報(bào)道指出，miRNA能夠調(diào)控多類蛋白編碼基因，在多數(shù)細(xì)胞生命活動(dòng)中扮演了重要角色，在多種疾病尤其是腫瘤和心血管疾病中參與了相關(guān)病理改變［5?6］。本次研究探討血清miR?155、miR?302b、miR?208a 水平與患者術(shù)后MACE 發(fā)生的關(guān)系，以期為指導(dǎo)臨床防治MACE 提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2019年12月本院89 例AMI 患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《急性ST 段抬高型心肌梗死診斷與治療指南》［7］中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡≥18 歲；③滿足PCI 治療指征，且在發(fā)病24 h 內(nèi)完成PCI 治療；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①腦血管病急性期；②嚴(yán)重肝腎功能不全；③妊娠及哺乳女性；④惡性腫瘤；⑤存在先天性、肺源性或風(fēng)濕性等其他類型心臟病、心肌炎、主動(dòng)脈夾層等；⑥自身免疫性疾??；⑦結(jié)締組織疾病；⑧急性感染。根據(jù)住院期間患者是否并發(fā)MACE，將其分為MACE 組（n=26）和無(wú)MACE 組（n=63），其中MACE 組中梗死后心絞痛14 例、急性心力衰竭8 例、心源性死亡4 例。患者或家屬對(duì)本研究知情且簽署同意書(shū)，本次研究獲得本院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 方法

1.2.1 血清miR?155、miR?302b、miR?208a水平檢測(cè)

采集患者外周靜脈血3 mL 至無(wú)菌干燥試管中，3 000 r/min 離心15 min 后分離血清，于-80℃環(huán)境中保存待檢。向含樣本的離心管中加入1 mL Trizol 溶液，勻漿，根據(jù)Trizol 說(shuō)明書(shū)提取總RNA，計(jì)算其濃度和純度。提取2 μL 總RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄操作，反轉(zhuǎn)錄試劑盒由北京艾德萊生物科技公司提供，采用20 μL 反轉(zhuǎn)錄體系，反轉(zhuǎn)錄體系過(guò)程：16℃60 min，42℃60 min，85℃5 min，4℃直至收取。將收取的cDNA 于-20℃環(huán)境中保存。依照GeneBank 提供的基因序列，進(jìn)行miR?155、miR?302b、miR?208a 引物序列合成（上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成）。見(jiàn)表1。

表1 miR?155、miR?302b、miR?208a 引物序列Table 1 Primer sequences of miR?155，miR?302b and miR?208a

進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，PCR 擴(kuò)增儀美國(guó)ABI step one實(shí)時(shí)反應(yīng)PCR 擴(kuò)增儀，PCR 總反應(yīng)體系為20 μL，qRT?PCR 反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3 min；94℃20 s，60℃20 s，40 個(gè)循環(huán)；72℃40 s。記錄Ct 值，將U6作為內(nèi)參照基因，檢測(cè)miR?155、miR?302b、miR?208a基因，通過(guò)qRT?PCR Soft 3.0 計(jì)算各基因表達(dá)量。

1.2.2 臨床資料收集

收集MACE 組和無(wú)MACE 組臨床資料，包括性別、年齡、吸煙史、冠心病家族史、高血壓史、糖尿病史、高血脂史、心肌梗死部位、心功能分級(jí)、心率（heart rate，HR）、收縮壓（systolic blood pres?sure，SBP）、舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）、心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cardiac troponin I，cTnⅠ）及肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme，CK?MB）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，若各組滿足正態(tài)性且兩組間方差齊性，采用t檢驗(yàn)行組間比較，采用多因素Logistic 回歸分析AMI 患者PCI 術(shù)后發(fā)生MACE 的影響因素，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MACE 組與無(wú)MACE 組臨床資料比較

MACE 組與MACE 組心功能分級(jí)、CK?MB和cTnI 水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 MACE 組與無(wú)MACE 組臨床資料比較［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of clinical data between MACE group and non?MACE group［n（%），（±s）］

表2 MACE 組與無(wú)MACE 組臨床資料比較［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of clinical data between MACE group and non?MACE group［n（%），（±s）］

臨床資料性別n χ2值P 值男女0.7570.384年齡<60 歲≥60 歲0.2130.644吸煙史0.2090.648冠心病家族史高血壓史0.4650.495 1.1970.274糖尿病史0.2260.635高血脂史有無(wú)有無(wú)有無(wú)有無(wú)有無(wú)1.1470.284心肌梗死部位2.5770.462心功能分級(jí)心肌前壁心肌下壁廣前壁其他Ⅰ～Ⅱ級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)72 17 58 31 48 41 23 66 61 28 21 68 27 62 27 34 17 11 56 33 HR（次/min）SBP（mmHg）DBP（mmHg）CK?MB（U/L）cTnI（mg/L）MACE 組（n=26）22（84.62）4（15.38）16（61.54）10（38.46）15（57.69）11（42.31）8（30.77）18（69.23）20（76.92）6（23.08）7（26.92）19（73.08）10（38.46）16（61.54）9（34.62）12（46.15）3（11.54）2（7.69）11（42.31）15（57.69）89.41±6.54 136.73±6.18 85.39±5.32 66.25±7.17 1.26±0.18無(wú)MACE 組（n=63）50（79.37）13（20.63）42（66.67）21（33.33）33（52.38）30（47.62）15（23.81）48（76.19）41（65.08）22（34.92）14（22.22）49（77.78）17（26.98）46（73.02）18（28.57）22（34.92）14（22.22）9（14.29）45（71.43）18（28.57）87.72±8.03 134.99±5.54 86.04±6.06 55.37±5.21 1.04±0.15 6.690 0.950 1.302 0.476 7.991 5.928 0.010 0.345 0.196 0.635<0.001<0.001

2.2 MACE 組與無(wú)MACE 組血清miR?155、miR?302b、miR?208a 水平比較

MACE 組血清miR?155、miR?302b、miR?208a水平均高于無(wú)MACE 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 兩組血清miR?155、miR?302b、miR?208a水平比較（±s）Table 3 Comparison of serum miR?155，miR?302b and miR?208a levels between 2 groups（±s）

表3 兩組血清miR?155、miR?302b、miR?208a水平比較（±s）Table 3 Comparison of serum miR?155，miR?302b and miR?208a levels between 2 groups（±s）

組別MACE 組無(wú)MACE 組t 值P 值例數(shù)26 63 miR?155 1.92±0.20 1.43±0.15 12.670<0.001 miR?302b 6.23±0.69 4.16±0.57 14.632<0.001 miR?208a 49.71±4.52 38.57±3.61 12.275<0.001

2.3 AMI 患者PCI 術(shù)后MACE 發(fā)生的多因素Logistic 回歸分析

Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示心功能分級(jí)、CK?MB、cTnI、miR?155、miR?302b、miR?208a 是AMI 患者PCI 術(shù)后MACE 發(fā)生的影響因素（P<0.05）。見(jiàn)表4。

表4 AMI 患者PCI 術(shù)后MACE 發(fā)生的多因素Logistic回歸分析Table 4 Multivariate Logistic regression analysis of MACE in AMI patients after PCI

3 討論

我國(guó)AMI 發(fā)病率長(zhǎng)期處于高水平，病例已有200 萬(wàn)，死亡率也在不斷升高［8］。PCI 是指通過(guò)心導(dǎo)管技術(shù)對(duì)阻塞的冠狀動(dòng)脈管腔進(jìn)行疏通，以恢復(fù)心肌血流灌注，改善心肌缺血缺氧［9］。調(diào)查顯示，AMI 患者進(jìn)行PCI 治療后，MACE 發(fā)生率為18%～42.4%［10］。MACE 是造成患者預(yù)后不良的重要原因，因此準(zhǔn)確評(píng)估MACE 發(fā)生?意義重大。

miRNA 為小分子單鏈RNA，其基因編碼長(zhǎng)度一般為20～24 個(gè)核苷酸，能夠精細(xì)調(diào)節(jié)生物生理功能。研究表示，血液循環(huán)中可見(jiàn)miRNAs 表達(dá)，對(duì)于心血管病變患者而言，miRNAs 可能成為其疾病診斷、預(yù)后評(píng)估的重要生物標(biāo)志物［11］。汪晶等［12］進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明miR?221 在AMI 大鼠心肌組織中呈高表達(dá)，下調(diào)miR?221 能夠抑制AMI大鼠心肌細(xì)胞凋亡。陳勁松等［13］研究分析老年AMI 患者血清miR?214 表達(dá)情況，顯示患者血清miR?214水平明顯高于正常人，且與CK?MB、cTnI 含量均呈正相關(guān)，其認(rèn)為老年AMI 患者血清miR?214高表達(dá)可能與心肌損傷有關(guān)。本次研究選取miR?155、miR?302b、miR?208a 為觀察指標(biāo)，其中miR?155 廣泛表達(dá)于免疫細(xì)胞中，能夠直接作用于細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子等靶點(diǎn)，調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫功能。石一夫等［14］研究發(fā)現(xiàn)，2 型糖尿病合并冠心病患者血清miR?155 水平和甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇呈明顯負(fù)相關(guān)，認(rèn)為冠心病的發(fā)生與miR?155 有關(guān)。miR?302b 是目前研究較多的miRNA 家族成員之一，國(guó)內(nèi)外研究表明，miR?302b 能夠?qū)?xì)胞周期進(jìn)行調(diào)控，參與了細(xì)胞損傷、壞死和凋亡過(guò)程［15?16］。miR?208a 是由Myh6基因的第29 號(hào)內(nèi)含子編碼，也是miRNA 家族的重要成員，其特異性表達(dá)于心臟，可調(diào)節(jié)肌球蛋白容量及肌纖維性能，在動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死等病理過(guò)程中均發(fā)揮了重要作用［17］。本研究中MACE 組血清miR?155、miR?302b、miR?208a 水平水平均高于無(wú)MACE 組，提示AMI 患者PCI 術(shù)后MACE 發(fā)生可能與miR?155、miR?302b、miR?208a 有關(guān)。

資料顯示，在心肌組織缺血性損傷時(shí)，miR?155、miR?302b、miR?208a水平顯著升高，而下調(diào)miR?155、miR?302b、miR?208a 表達(dá)能起到組織保護(hù)作用。故而監(jiān)測(cè)AMI患者血清miR?155、miR?302b、miR?208a水平，有利于評(píng)估患者預(yù)后。

綜上所述，PCI 術(shù)后發(fā)生MACE 的AMI 患者血清miR?155、miR?302b、miR?208a 水平均呈高表達(dá)，監(jiān)測(cè)AMI 患者上述指標(biāo)水平對(duì)評(píng)估患者預(yù)后、制定干預(yù)措施具有重要意義。