寧德市醫(yī)院體檢人群及住院患者HTLV?I感染情況分析

葉仁清 葉作東 傅芬蕊 齊育英

作者單位：寧德師范學(xué)院附屬寧德市醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建，寧德352000

人類嗜T 淋巴細(xì)胞病毒I 型（Human T?lympho?tropic virus type?I，HTLV?I）屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科（Retro?viridae），RNA 腫瘤病毒亞科（Oncovirubae），是首個發(fā)現(xiàn)的人類逆轉(zhuǎn)錄病毒［1?2］，臨床上可引起成年人T淋巴細(xì)胞白血病（Adult T?cell leukemia，ATL）、熱帶痙攣性下肢癱瘓以及HTLV 相關(guān)性多肌炎、淋巴結(jié)炎及相關(guān)性脊髓病等嚴(yán)重疾?。?］。目前全球已有約1 000 萬～2 000 萬人感染了HTLV?I［4］，造成嚴(yán)重的衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。研究顯示，福建省是我國HTLV?I 高流行區(qū)，其中寧德市的感染率呈現(xiàn)較高水平［5］。目前關(guān)于寧德市HTLV?I 具體感染情況相關(guān)的報道都是基于獻(xiàn)血人群的研究，一定程度上不能代表全體人群。本文通過對體檢人群及病患人群的篩查，旨在了解近年來寧德市人群HTLV?I 感染的流行情況及分析感染不同年齡段、性別與感染狀況的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2019年4月至2019年12月在寧德市醫(yī)院體檢和住院患者的新鮮血清及部分全血標(biāo)本9 269份，其中2 274 份為全市體檢標(biāo)本，3 405 份為隨機(jī)選取的門診體檢標(biāo)本，3 590 份為隨機(jī)選取的住院患者標(biāo)本。9 269 份標(biāo)本中，男性為4 205 例，女性為5 064 例，標(biāo)本年齡分布見表1，年齡中位數(shù)為46 歲。

表1 研究標(biāo)本年齡分布表［n（%）］Table 1 Age distribution of sample［n（%）］

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑

HTLV?I/II 抗體檢測試劑盒（ELISA 法）（批號：T20190302B，96 人份/盒）、HTLV?I 核酸檢測試劑盒（PCR?熒光探針法）（批號：HPQ20190101，48 人份/盒）和DNA/RNA 提取試劑盒（磁珠法）（批號：20190101，48 人份/盒）均來源于北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司。

1.2.2 儀器

鄭州安圖生物工程有限公司酶標(biāo)儀（PHPMO型）、臺灣圓點(diǎn)半自動核酸提取儀（SLA?32）、美國伯樂實(shí)時熒光定量PCR 儀（CFX96）、美國ABI DNA 測序儀（3730XL）。

1.3 方法

1.3.1 抗HTLV?I/II 初篩

使用北京萬泰HTLV?I/II 抗體檢測試劑盒（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法）對9 269 份標(biāo)本進(jìn)行抗體檢測，對初次檢測陽性標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)查，復(fù)查結(jié)果仍為陽性者判定為ELISA 初篩陽性。

1.3.2 HTLV?I 確證試驗(yàn)

使用北京萬泰HTLV?I 型核酸檢測試劑盒（PCR?熒光探針法）對初篩陽性病例的血細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行PCR 確證實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 測序分析

據(jù)HTLV?I 型插入序列pol、tax 基因信息，在NCBI 中查找高度保守參考序列，使用軟件Primer Premier 3.0 進(jìn)行引物設(shè)計，將保存初篩陽性者血細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行核酸提取，目的基因經(jīng)PCR 擴(kuò)增后進(jìn)行測序，測序結(jié)果在GenBank 中與NCBI 網(wǎng)站上已發(fā)表的HTLV?I 型pol 或tax 基因序列進(jìn)行比對分析。HTLV?I pol 基因（上游引物序列5′?TGGGC?GCTACCTGAACTTC?3′，下游引物序列5′?GGC?CACTGCTGCTTGGACT?3′，產(chǎn)物293 bp），HTLV?I tax 基因（上游引物序列5′?GGCCTTCCTCAC?CAATGTTC?3′，下游引物序列5′?GGATATTT?GGGCTCATGGTC?3′，產(chǎn)物469 bp），同源性均在98%以上判定為HTLV?I 陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS2 6.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析；計數(shù)資料以n（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；檢驗(yàn)水準(zhǔn)P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HTLV?I 檢測結(jié)果

對寧德市9 269 份血清標(biāo)本進(jìn)行HTLV?I/II 抗體篩查，經(jīng)初篩和確證后93 份標(biāo)本判定為HTLV?I抗體陽性，陽性率為1.00%。HTLV?I PCR 檢測和HTLV?I 基因測序分析結(jié)果一致率100%。

2.2 HTLV?I 感染的年齡分布

76～98 歲年齡組陽性率最高達(dá)到2.11%，其次是61～75 歲年齡組，HTLV?I 陽性率達(dá)1.97%，0～17歲年齡組最低為0.00%。見表2。

表2 不同年齡組HTLV?I 陽性率［n（%）］Table 2 The infection rate of HTLV?I in different age groups［n（%）］

2.3 HTLV?I 感染的性別差異

男性HTLV?I 抗體陽性率為0.88%，女性HTLV?I 抗體陽性率為1.11%，兩者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），不同年齡組間男性、女性HTLV?抗體陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

表3 不同性別組HTLV?I 陽性率［n（%）］Table 3 The infection rate of HTLV?I in different gender groups［n（%）］

2.4 不同年齡及性別組標(biāo)本HTLV?I 陽性率

不同性別組隨著年齡增長，HTLV?I 陽性率均呈現(xiàn)明顯上升趨勢。見圖1。

圖1 不同年齡及性別組標(biāo)本HTLV?I 陽性率Figure 1 The infection rate of HTLV?I in different age and gender groups

3 討論

對HTLV?I 感染引起的相關(guān)疾病至今尚未成功研究出有效的治療藥物和預(yù)防性疫苗，也未發(fā)現(xiàn)有效免疫性抗體產(chǎn)生或自行清除的報道［1，6］。目前唯一有效辦法就是及時發(fā)現(xiàn)HTLV?I 感染者，采取措施切斷其傳播途徑［7］。

1985年曾毅等［8］首次對來自全國28 個省市的9269 份血清樣本篩查并進(jìn)一步確證HTLV?I 抗體陽性率為0.08%。隨著更多的HTLV?I 篩查調(diào)查的開展，更多地區(qū)和人群中HTLV?I 感染情況逐漸被發(fā)現(xiàn)，其中主要集中在東南沿海地區(qū)。季陽等［9］調(diào)查了1997年～1998年四川、福建、新疆、浙江、山東和湖北六省區(qū)的無償獻(xiàn)血者，血清HTLV?I 抗體陽性率為0.02%，感染者均為東南沿海地區(qū)獻(xiàn)血者。而我國現(xiàn)有報道中，寧德市HTLV?1 的感染率呈現(xiàn)較高水平，陳長榮等［10］在2004 至2009年對福建省131 823 份無償獻(xiàn)血標(biāo)本進(jìn)行HTLV 抗體篩查后發(fā)現(xiàn)，檢出陽性標(biāo)本中來自寧德市的標(biāo)本遠(yuǎn)高于其他地區(qū)，占比高達(dá)33.33%（8/24）。徐東峰等［11］在2013年對福建省寧德地區(qū)無償獻(xiàn)血者進(jìn)行HTLV?I抗體篩查，確認(rèn)陽性率為0.34%。歐山海等［12］對2016年～2018年無償獻(xiàn)血者的?I 抗體篩查結(jié)果中報道寧德市抗體陽性率為0.18%。本文調(diào)查結(jié)果說明了寧德市屬于HTLV?I 高流行地區(qū)。與該地區(qū)現(xiàn)有報道相比，HTLV?I 抗體陽性率顯著增加，主要是由于篩查人群的差異，之前有關(guān)該地區(qū)的研究對象均為獻(xiàn)血者，本文篩查對象為體檢人群及門診和住院患者，一定程度上更能代表普遍群體。同時也需要謹(jǐn)防人群的感染率增加。HTLV的傳播途徑包括垂直感染、性接觸傳播、共用針頭如靜脈注射毒癮者以及輸血傳播等［13］，研究發(fā)現(xiàn)HTLV 感染常表現(xiàn)出明顯的家庭聚集性［14］，并具有區(qū)域集中的特點(diǎn)［15］，寧德市作為HTLV?1 感染率相對較高的地區(qū)，若疏于防治可能導(dǎo)致感染率進(jìn)一步提升。在世界上其他國家和地區(qū)的調(diào)查中曾提到人群的年齡和性別是HTLV?I 的危險因素［16］，本研究結(jié)果顯示性別因素不是HTLV?I 流行的危險因素，與王惠榕等［5］報道結(jié)果一致。

本文首次對寧德市醫(yī)院體檢人群及住院患者中HTLV?I 感染情況進(jìn)行調(diào)查，統(tǒng)計得到HTLV?I感染率為1.00%，高于該地區(qū)獻(xiàn)血人群HTLV?1 感染率的報道，可能由于獻(xiàn)血人群整體健康水平更高造成了結(jié)果的差異。本文調(diào)查結(jié)果進(jìn)一步豐富了HTLV?1 流行病統(tǒng)計的樣本來源，為制定科學(xué)的防控措施提供參考。造成人群差異更深層次的機(jī)理在本文中并未開展研究，在后續(xù)的調(diào)查工作中應(yīng)關(guān)注篩查人群不同導(dǎo)致的流行病統(tǒng)計學(xué)結(jié)果差異。另外，此次調(diào)查結(jié)果顯示性別對HTLV?I 感染率的影響并不顯著，而隨著年齡增長，HTLV?I 感染率呈現(xiàn)明顯上升趨勢，因此應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注對中老年人群HTLV?I 的篩查和預(yù)防。