CDK8、CXCL13及REGγ在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達及臨床意義

哈斯圖雅 釵麗干 崔山丹 夏書琴★

作者單位：1.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古，呼和浩特010017

2.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院病理科，內(nèi)蒙古，呼和浩特010017

子宮內(nèi)膜癌（Endometrial Carcinoma，EC）為女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率和病死率均有上升趨勢，對女性生命健康造成嚴重威脅［1］。尋找EC 早期診斷及侵襲轉(zhuǎn)移相關的分子標志物尤其重要［2］。既往研究發(fā)現(xiàn)，EC 增殖、轉(zhuǎn)移及擴散與周期蛋白依賴性蛋白激酶（cyclin?dependent protein kinases，CDKs）表達情況密切相關，CDKs在細胞增殖與分化中具有調(diào)控作用［3］。趨化因子13（Chemokine CXC ligand13，CXCL13）是CXC 類趨化因子家族的一員，在多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用［4］。蛋白酶體激活因子11S 調(diào)節(jié)蛋白復合物γ 亞單位（11S regulator complex gam?ma subunit，REGγ）則是一種定位于細胞核內(nèi)的蛋白質(zhì)，與細胞生長調(diào)控存在密切聯(lián)系［5］?；诖?，本研究通過檢查EC 患者CDK8、CXCL13 及REGγ的水平，旨在探討上述因子水平在EC 中的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2015年6月至2019年6月的90 例EC 患者作為研究組。納入標準：①均符合子宮內(nèi)膜癌診斷標準［6］；②臨床資料無缺損或丟失；③入組時未接受任何治療，包括藥物、放療及化療等；④主要臟器功能正常，無嚴重心、肝腎功能障礙；⑤年齡30～80 歲。排除標準：①患有其他惡性腫瘤患者；②癌癥轉(zhuǎn)移；③近期使用抗焦慮、抑郁等藥物者；④存在認知功能障礙者。平均年齡（48.56±6.77）歲；病程平均（3.79±2.58）年；臨床分期：Ⅰ期50 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期21 例；有淋巴結轉(zhuǎn)移者22例；分化程度：高分化65 例，中低分化25 例。收集同期接受健康體檢的志愿者78 例納入對照組，平均年齡（47.89±5.46）歲，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準通過，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 試劑

鼠抗人CDK8、CXCL13 及REGγ 單克隆抗體購自北京中杉金橋生物工程有限公司；SP 免疫組織化學系列工作液試劑盒、DAB 顯色劑購自河北博海生物有限公司。

1.2.2 染色方法

所有標本手術切除后立即用10%甲醛固定，組織切片后脫蠟、水化。根據(jù)鏈霉素抗生物素蛋白?過氧化物酶（Streptomycin avidin peroxi?dase，S?P）免疫組化染色法對CDK8、CXCL13 及REGγ 水平進行檢測，具體方法嚴格按照試劑盒說明執(zhí)行。每批切片染色均以PBS 代替一抗作陰性對照，CDK8、CXCL13 及REGγ 用已知陽性表達的組織切片作陽性對照。一抗稀釋比例均為1∶100。

1.2.3 結果判斷［7］

CDK8 呈細胞膜著色，CXCL13 呈細胞質(zhì)或細胞膜著色，REGγ 呈細胞核著色，根據(jù)陽性細胞百分比、染色強度判定。無陽性細胞0 分，陽性細胞<10% 1 分，陽性細胞10%～50% 2 分，陽性細胞>50%3 分。染色強度判定：無色0 分，淡黃色1 分，棕黃色2 分，棕褐色3 分?？偡e分：上述2 項評分的乘積。陽性：總積分≥3 分。

1.3 觀察指標

①比較對照組與研究組CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達情況。②分析CDK8、CXCL13 及REGγ 表達與EC 臨床病理特征的關系。③對患者進行1年電話隨訪，分析其預后生存與死亡情況，并影響EC 患者預后死亡的獨立危險因素。④分析CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達對EC 患者預后預測價值。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以（）表示，采用t檢驗；采用多元Logistic 回歸分析影響EC 患者預后生存的獨立危險因素；采用ROC 曲線分析CDK8、CXCL13 及REGγ 對EC 患者預后死亡的預測價值；以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達比較

研究組CDK8、CXCL13 及REGγ 陽性表達率均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達比較［n（%）］Table 1 Comparison of Cdk8，CXCL13 and reg γ protein expression between 2 groups［n（%）］

2.2 CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達與EC 臨床病理特征的關系

CDK8、CXCL13 的陽性表達者在年齡、腫瘤直徑比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），CDK8、CXCL13 的陽性表達者在分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移、病理類型、肌層浸潤深度及臨床分期比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。REGγ 的陽性表達者年齡、腫瘤直徑、分化程度及臨床分期比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），REGγ 的陽性表達者在淋巴結轉(zhuǎn)移、病理類型及肌層浸潤深度比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達與EC 臨床病理特征的關系［n（%）］Table 2 the relationship between the expression of Cdk8，CXCL13 and reg γ and the clinicopathological features of EC［n（%）］

2.3 影響EC 患者預后死亡的危險因素分析

術后對患者進行1年隨訪，其中死亡17 例，死亡率為18.89%。多元Logistic 回歸分析結果顯示，腫瘤分化程度中低、臨床分期Ⅲ、合并淋巴結轉(zhuǎn)移、CDK8、CXCL13 及REGγ 陽性表達是影響胃癌患者預后死亡的獨立危險因素（P<0.05）。見表3。

表3 影響EC 患者預后死亡的危險因素分析Table 3 Analysis of risk factors influencing the prognosis of EC patients

2.4 CDK8、CXCL13 及REGγ 單項及聯(lián)合檢測對EC 患者預后生存的預測價值

ROC 結果示，CDK8、CXCL13 及REGγ 聯(lián)合檢測AUC 為0.769，較單獨檢測高。見表4、圖1。

表4 CDK8、CXCL13 及REGγ 單項及聯(lián)合檢測對EC患者預后生存的預測價值Table 4 the prognostic value of Cdk8，CXCL13 and reg γ single and combined detection in EC patients

圖1 CDK8、CXCL13 及REGγ 單項及聯(lián)合檢測曲線分析Figure 1 Analysis of single and combined detection curves of Cdk8，CXCL13 and reg γ

3 討論

EC 是臨床婦科最常見的惡性腫瘤之一。其發(fā)病率已有超過宮頸癌的趨勢［8］。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移是由各種信號傳導、趨化因子、轉(zhuǎn)錄因子等途徑共同實現(xiàn)，因此，尋找識別EC 發(fā)展相關的新型因子及預測預后的標志物是近年來研究的熱點［9］。

CDK8 是細胞周期依賴性蛋白激酶（Cell cycle dependent protein kinase，CDK）家族中的一員，目前CDK8 基因發(fā)揮致癌作用的機制尚未十分明確［10］。但國外已有較多研究表明，CDK8 表達異常在惡性黑素瘤、結直腸癌、胃癌的發(fā)生中起到重要作用［11］。而鮮有關于CDK8 表達與官頸癌發(fā)生發(fā)展關系的相關研究。本組研究結果與Remy 等［12］研究結果報道相符。進一步多元Logistic 回歸分析影響EC 患者預后死亡的危險因素發(fā)現(xiàn)，CDK8 陽性表達亦是影響EC 患者死亡的危險因素，因此可推斷CDK8 也可作為評估EC 患者預后的指標之一。

CXCL13 是自于趨化因子家族的細胞因子，可調(diào)控腫瘤細胞的生長、增殖，抑制腫瘤細胞凋亡，最終誘發(fā)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Bhatti 等［13］研究表明，CXCL13 在惡性腫瘤，如肝癌、胃癌中均呈高表達，其表達率與患者術后生存率密切相關。Shea等［14］研究發(fā)現(xiàn)，CXCL13 抑制劑可通過作用于CX?CR5/ERK 信號通路來減弱腫瘤組織的生長。多元Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，CXCL13 陽性表達是影響EC 患者預后死亡的危險因素?？梢奀XCL13 表達在EC 的惡性進展過程中具有重要作用，其高表達提示預后不良，這可能與與CXCLl3 促進腫瘤新生血管的生成及腫瘤細胞的增殖活化、轉(zhuǎn)移有關。

REGγ 是一種定位于細胞核內(nèi)的蛋白質(zhì)。多項研究發(fā)現(xiàn)，該因子在乳腺癌、直腸癌等惡性腫瘤中呈高表達，被認為是一種潛在的癌癥標簽［15］。本研究結果發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，EC 患者REGγ 陽性表達率明顯升高，且與分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移、病理類型及肌層浸潤深度有關，推測REGγ 對于子宮內(nèi)膜癌的晚期評估和預后監(jiān)測可能起到輔助作用。進一步ROC 曲線分析提示聯(lián)合檢測上訴指標可作為預測患者預后生存的有效手段。但是，EC發(fā)展過程是一個有多級因子作用的復雜過程，由于本研究納入樣本量較少，有可能造成統(tǒng)計學上有所偏差，因此尚需要大樣本量研究證實。

綜上所述，CDK8、CXCL13 及REGγ 在EC 中陽性表達率高，推測CDK8、CXCL13 及REGγ 參與了EC 組織增生、分化及發(fā)展過程，臨床上可通過檢測三者表達情況對患者病情進展及預后進行評估。