急性腦梗死患者外周血miR?132、血清Ang?1相關(guān)性及預(yù)后

馬翠娟

作者單位：河南省職工醫(yī)院老年科河南，鄭州450000

急性腦梗死以腦部供血?jiǎng)用}血栓栓塞或血栓形成引起的血管腔堵塞、腦組織缺血缺氧為特征，具有致死率高、致殘率高的特點(diǎn)［1?2］。在臨床實(shí)踐中，早期判斷急性腦梗死患者的預(yù)后情況、及時(shí)發(fā)現(xiàn)可能出現(xiàn)預(yù)后不良的患者并進(jìn)行干預(yù)，對改善患者的預(yù)后具有積極意義。微小RNA（microRNA，miR）是近些年心腦血管疾病研究的熱點(diǎn)，miR 通過在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá)來介導(dǎo)相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)，受到miR 調(diào)控的凋亡、自噬、炎癥、血管新生等環(huán)節(jié)均與急性腦梗死的發(fā)生、預(yù)后密切相關(guān)。國內(nèi)陳澎的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，局灶性腦缺血大鼠腦組織中miR?132 的表達(dá)減少，而過表達(dá)miR?132 能夠改善腦缺血大鼠的組織缺氧狀態(tài)神經(jīng)功能并增加血管生成素?1（Angiopoietin?1，Ang?1）表達(dá)、促進(jìn)缺血腦組織血管新生［3］；另有一項(xiàng)國內(nèi)的臨床研究發(fā)現(xiàn)，血清Ang?1 含量降低是急性腦梗死患者預(yù)后不良的可能影響因素［4］。但miR?132 在急性腦梗死發(fā)病過程中的變化及其對預(yù)后的預(yù)測價(jià)值尚不清楚。因此，本研究將觀察外周血miR?132 表達(dá)與血管新生分子Ang?1 及90 d 預(yù)后的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 對象

選擇2018年1月至2019年12月期間在本院診斷為的80 例急性腦梗死患者作為實(shí)驗(yàn)組，其中男性48 例、女性32 例，平均年齡（61.83±11.37）歲；另取同期體檢的80 例健康者作為對照組，其中男性45 例、女性35 例，平均年齡（59.37±12.42）歲。兩組間一般資料的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。所有患者及家屬均知情同意。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

入組標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》中急性腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；②起病時(shí)間<4.5 h、接受溶栓治療；③臨床資料完整；④出院后90 d 進(jìn)行門診復(fù)診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有腦卒中、心肌梗死等病史；②既往有顱腦外傷、腦腫瘤病史；③合并惡性腫瘤、精神性疾病。

1.2 外周血miR?132 表達(dá)水平的檢測

在血常規(guī)采血管內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)組患者入院后的外周血3 mL 及對照組受試者體檢時(shí)的外周血3 mL，采用北京博凌科為公司的試劑盒進(jìn)行miR?132 的檢測。配置如下反應(yīng)體系：c DNA 樣本1 μL、PCR混合液10 μL、10 μmol/L 上下游引物各0.4 μL、去離子水補(bǔ)足至20 μL，引物分別為目的基因miR?132 的特異性引物及內(nèi)參U6 的特異性引物。在熒光定量PCR 儀上按照94℃預(yù)變性2～3 min 后94℃15 s、60℃40 s 重復(fù)40 個(gè)循環(huán)的程序完成PCR 反應(yīng)，生成反應(yīng)的循環(huán)曲線及循環(huán)閾值（Ct），以U6 為內(nèi)參，計(jì)算miR?132 的表達(dá)水平。

1.3 血清Ang?1 含量的檢測

采集實(shí)驗(yàn)組患者入院后的外周血5 mL 及對照組受試者體檢時(shí)的外周血5 mL，采用上海西唐公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒進(jìn)行檢測，按照試劑盒說明書操作并檢測血清中Ang?1 的含量。

1.4 臨床資料

收集實(shí)驗(yàn)組以下臨床特征：性別、年齡、高血壓病、冠心病、糖尿病、超敏C 反應(yīng)蛋白（High sen?sitivity C?reactive protein，hs?CRP）、同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）、總膽固醇（Total cholesterol，TC）、低密度總蛋白膽固醇（Low density total pro?tein cholesterol，LDL?C）、高密度脂蛋白膽固醇（High density total protein cholesterol，HDL?C）、隨機(jī)血糖、入院時(shí)NIHSS 評(píng)分、發(fā)病到入院時(shí)間。

1.5 90 d 預(yù)后的隨訪及評(píng)估

急性腦梗死患者出院后90 天時(shí)進(jìn)行門診復(fù)診，參照《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》［5］采用改良Rankin 量表（modified Rankun scale，mRS）對患者的神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)價(jià)并判斷預(yù)后，mRS≤2 分為預(yù)后良好、mRS>2 分為預(yù)后不良。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用（）表示、兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用n（%）表示、用χ2檢驗(yàn)，miR?132 及Ang?1 對預(yù)后的預(yù)測價(jià)值采用ROC 曲線分析，預(yù)后的影響因素采用logistics 回歸分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組miR?132 表達(dá)水平及Ang?1 含量的比較

與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組外周血miR?132 的表達(dá)水平、血清Ang?1 的含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組miR?132 表達(dá)及Ang?1 含量比較（±s）Table 1 Comparison of miR?132 expression and Ang?1 content between 2 groups（±s）

表1 兩組miR?132 表達(dá)及Ang?1 含量比較（±s）Table 1 Comparison of miR?132 expression and Ang?1 content between 2 groups（±s）

組別實(shí)驗(yàn)組對照組t 值P 值n 80 80 miR?132 0.74±0.23 1.00±0.28 6.418 0.000 Ang?1（ng/mL）1.01±0.27 1.39±0.32 8.118 0.000

2.2 實(shí)驗(yàn)組miR?132 表達(dá)及Ang?1 含量的相關(guān)性

急性腦梗死組患者外周血miR?132 表達(dá)水平血清Ang?1 含量呈正相關(guān)（r=0.502、P<0.05）。

2.3 不同預(yù)后患者miR?132表達(dá)及Ang?1含量的比較

與預(yù)后良好患者比較，預(yù)后不良患者外周血miR?132 的表達(dá)水平、血清Ang?1 的含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 不同預(yù)后患者miR?132 及Ang?1 的比較（±s）Table 2 Comparison of miR?132 expression and Ang?1 content in patients with different prognosis（±s）

表2 不同預(yù)后患者miR?132 及Ang?1 的比較（±s）Table 2 Comparison of miR?132 expression and Ang?1 content in patients with different prognosis（±s）

預(yù)后情況預(yù)后良好組預(yù)后不良組t 值P 值n 46 34 miR?132 1.12±0.28 0.85±0.16 5.042 0.000 Ang?1 0.78±0.25 0.68±0.18 2.041 0.045

2.4 miR?132 表達(dá)及Ang?1 含量對急性腦梗死患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值

繪制miR?132 表達(dá)及Ang?1 含量預(yù)測急性腦梗死患者預(yù)后的ROC 曲線，曲線下面積分別為0.818（95%CI：0.726～0.910、P<0.001）、0.619（95%CI：0.496～0.742、P=0.070）。最佳截?cái)嘀禐?.94，該截?cái)嘀殿A(yù)測預(yù)后的靈敏度和特異性分別為85.29%、69.57%。見圖1。

2.5 不同預(yù)后患者臨床特征的比較

不同預(yù)后患者在性別、年齡、高血壓病、冠心病、糖尿病、TC、LDL?C、HDL?C、隨機(jī)血糖比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與預(yù)后良好患者比較，預(yù)后不良患者入院時(shí)NIHSS 評(píng)分、Hcy、hs?CRP 水平明顯升高，發(fā)病到入院時(shí)間明顯延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 不同預(yù)后患者臨床特征的比較［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of clinical characteristics of patients with different prognosis［n（%），（±s）］

表3 不同預(yù)后患者臨床特征的比較［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of clinical characteristics of patients with different prognosis［n（%），（±s）］

因素性別（男/女）年齡（歲）高血壓病冠心病糖尿病發(fā)病到入院時(shí)間（h）入院時(shí)NIHSS 評(píng)分TC（mmol/L）LDLC（mmol/L）HDLC（mmol/L）隨機(jī)血糖（mmol/L）Hcy（μmol/L）hs?CRP（mg/L）預(yù)后良好患組者（n=46）27/19 60.27±12.09 21（45.65）2（4.35）12（26.09）3.85±0.94 4.51±0.93 3.94±0.94 2.74±0.71 1.08±0.22 6.93±1.32 11.45±2.14 6.67±1.05預(yù)后不良患組者（n=34）21/13 62.44±10.84 18（52.94）3（8.82）10（29.41）4.23±0.78 7.97±1.42 4.21±1.05 3.03±0.82 1.01±0.25 7.61±1.94 17.94±4.09 10.77±2.46 χ2/t 值0.077 0.803 0.416 0.668 0.108 2.321 13.157 1.208 1.691 1.327 1.866 9.204 10.140 P 值0.782 0.425 0.519 0.414 0.742 0.023 0.000 0.231 0.095 0.188 0.066 0.000 0.000

圖1 miR?132、Ang?1 表達(dá)預(yù)測急性腦梗死患者預(yù)后的ROC 曲線

Figure 1 ROC curve of miR?132、Ang?1 expression in predicting prognosis of patients with acute cerebral infarction

2.6 急性腦梗死患者預(yù)后影響因素的logistics 回歸分析

以急性腦梗死患者預(yù)后情況作為因變量，以2.3 和2.5 中有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的因素作為自變量，在Logistics 回歸模型中進(jìn)行分析可知：miR?132、Ang?1、入院時(shí)NIHSS 評(píng)分是腦梗死組患者預(yù)后不良的影響因素。見表4。

表4 急性腦梗死患者預(yù)后影響因素的logistics 回歸分析Table 4 Logistic regression analysis of prognostic factors in patients with acute cerebral infarction

3 討論

溶栓是臨床上治療急性腦梗死的有效手段之一，能夠及時(shí)恢復(fù)缺血腦組織的血流灌注、減輕神經(jīng)功能缺血缺氧損害［6?7］。在臨床實(shí)踐中，早期篩選可能出現(xiàn)預(yù)后不良的急性腦梗死患者并盡早開始進(jìn)行干預(yù)，對促進(jìn)神經(jīng)功能重建、改善預(yù)后具有積極意義。

miR?132 促進(jìn)血管新生的效應(yīng)涉及復(fù)雜的分子機(jī)制，國內(nèi)陳澎［3］的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miR?132通過Ang?1/Tie?2 途徑促進(jìn)缺血腦組織周圍的血管新生。Ang?1 是一類分泌型細(xì)胞因子，在血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、成熟中起重要作用，與受體Tie?2 結(jié)合后能夠促進(jìn)新生血管形成、成熟及重塑。國內(nèi)閆薪［4］的臨床研究及本研究的檢測均發(fā)現(xiàn)急性腦梗死患者血清Ang?1 含量明顯降低，同時(shí)閆薪的研究還證實(shí)Ang?1 含量降低與急性腦梗死的病情加重有關(guān)。本研究結(jié)果提示在急性腦梗死的發(fā)病過程中，miR?132 表達(dá)降低可能使Ang?1 含量減少、削弱Ang?1 介導(dǎo)的促血管新生效應(yīng)，進(jìn)而不利于血管新生對神經(jīng)功能的修復(fù)和重建、影響患者的預(yù)后。

國內(nèi)多項(xiàng)關(guān)于急性腦梗死患者預(yù)后的研究均以出院后90 d 作為評(píng)估預(yù)后的時(shí)間點(diǎn)，在翟萌萌［8］、郭志良［9］、閆薪如［10］的臨床研究中，急性腦梗死預(yù)后不良的發(fā)生率分別為36.48%、51.43%、41.41%。本研究對急性腦梗死患者的90d 預(yù)后進(jìn)行了隨訪，其中預(yù)后不良利患者34 例、發(fā)生率42.5%，與國內(nèi)幾項(xiàng)研究基本一致。本研究結(jié)果提示miR?132 表達(dá)降低、Ang?1 含量減少可能與急性腦梗死患者預(yù)后不良有關(guān)。進(jìn)一步經(jīng)ROC 曲線分析miR?221、Ang?1對預(yù)后的預(yù)測價(jià)值發(fā)現(xiàn)：miR?132 對急性腦梗死患者的90 d 預(yù)后具有預(yù)測價(jià)值，但Ang?1 卻不能直接預(yù)測90 d 預(yù)后，可能原因是miR?132 不僅通過Ang?1發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，還能通過促進(jìn)VEGF 途徑、抑制細(xì)胞凋亡途徑、減輕氧化應(yīng)激等方式來減輕神經(jīng)功能損害、改善患者預(yù)后［11?13］，但miR?132 發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的其他方式仍有待今后的研究來證實(shí)。

急性腦梗死患者預(yù)后的影響因素復(fù)雜，國內(nèi)多項(xiàng)關(guān)于急性腦梗死預(yù)后影響因素的研究發(fā)現(xiàn)，入院時(shí)NIHSS 評(píng)分增加、Ang?1 減少與急性腦梗死預(yù)后不良的發(fā)生有關(guān)［8?9］。本研究結(jié)果提示盡早進(jìn)行溶栓、再通血管的重要性；miR?132、Ang?1 與急性腦梗死患者預(yù)后不良相關(guān)的結(jié)果與miR?132、Ang?1 介導(dǎo)的血管新生效應(yīng)、神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)吻合。

綜上所述，急性腦梗死患者外周血miR?132 表達(dá)降低、Ang?1 含量減少且存在正相關(guān)；miR?132 的低表達(dá)可能引起血管新生不足，并且miR?132 是90 d 預(yù)后的影響因素、對預(yù)后不良具有預(yù)測價(jià)值。但miR?132 是否還通過其他機(jī)制影響急性腦梗死患者的預(yù)后需要今后進(jìn)一步的研究來證實(shí)。此外，本研究未納入未接受溶栓治療的腦梗死患者，存在一定不足，在今后應(yīng)納入未接受溶栓治療的腦梗死患者來探究miR?132、Ang?1 對腦梗死預(yù)后的評(píng)估價(jià)值。