miR-132通過(guò)靶向KLF7抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖和遷移

張可，姜嵐，僧東杰，朱卿文

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）起源于解剖位置較為隱秘的鼻咽部，屬于頭頸部腫瘤之一，在我國(guó)南方發(fā)病率較高。臨床多采用放射聯(lián)合化學(xué)療法治療NPC，然而其早期易出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)，且復(fù)發(fā)率較高［1］。腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲是發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的病理基礎(chǔ)［2］，探究NPC細(xì)胞增殖、遷移的分子機(jī)制，尋找相關(guān)治療靶點(diǎn)可能有益于其治療效果的提高。微小RNA（miRNA）是高度保守的短鏈（20～25個(gè)核苷酸）非編碼RNA分子，可以調(diào)控基因表達(dá)。研究顯示，miRNA表達(dá)失調(diào)及功能障礙可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移，在NPC等腫瘤中發(fā)揮癌基因或腫瘤抑制基因的作用［3］。本研究旨在通過(guò)探討miR-132和Kruppel樣因子（KLF）7在NPC增殖、遷移和侵襲中的作用，以期為NPC的治療提供新靶標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級(jí)7周齡NIH-Foxn1rnu裸大鼠（均為雄性）70只，購(gòu)自北京維通利華公司［許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006］，體質(zhì)量200～220 g，于鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（豫）2018-0004］進(jìn)行本項(xiàng)研究，且實(shí)驗(yàn)過(guò)程遵守3R原則。鼻咽癌組織及正常鼻咽上皮組織均來(lái)自鄭州兒童醫(yī)院病理科。CNE-2Z鼻咽癌細(xì)胞和NP69永生化正常鼻咽上皮細(xì)胞均購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院細(xì)胞資源中心。RNA TriPure、反轉(zhuǎn)錄試劑及熒光定量PCR（qPCR）試劑購(gòu)自Roche公司，LipofectamineTM3000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自Invitrogen公司；miR-132 mimics及陰性對(duì)照、KLF7-WT質(zhì)粒（攜帶KLF7 3'UTR原始序列）、KLF7-MUT質(zhì)粒（攜帶KLF7 3'UTR突變序列）、KLF7-OE質(zhì)粒及空質(zhì)粒均購(gòu)自上海吉瑪公司；雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Promega公司；引物、二辛可寧酸二鈉（BCA）、HE及CCK-8試劑盒購(gòu)自上海生工公司；β-actin兔多克隆抗體、KLF7兔多克隆抗體、CD34兔多克隆抗體及山羊抗兔IgG（HRP）購(gòu)自Abcam公司；培養(yǎng)基購(gòu)自HyClone公司；qPCR儀器購(gòu)自Thermo公司；顯微鏡購(gòu)自O(shè)lympus公司；電泳儀、酶標(biāo)儀購(gòu)自BioRad公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 CNE-2Z鼻咽癌細(xì)胞采用RPMI 1640培養(yǎng)基（含10%FBS、1%鏈霉素和青霉素）進(jìn)行培養(yǎng)，NP69永生化正常鼻咽上皮細(xì)胞采用Keratinocyte-SFM培養(yǎng)基（含10%FBS）進(jìn)行培養(yǎng)，每日早晚觀察細(xì)胞情況，2～3 d傳代1次，取第3代狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。CNE-2Z細(xì)胞分組：空白組（不轉(zhuǎn)染）、NC組（轉(zhuǎn)染miR-132 NC和空質(zhì)粒）、miR-132 mimics組（轉(zhuǎn)染miR-132 mimics）、KLF7-OE組（轉(zhuǎn)染KLF7-OE質(zhì)粒）和miR-132 mimics+KLF7-OE組（轉(zhuǎn)染miR-132 mimics和KLF7-OE質(zhì)粒）。根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑盒操作說(shuō)明，采用無(wú)血清培養(yǎng)基制備LipofectamineTM3000脂質(zhì)體和miR-132 mimics或（和）KLF7-OE質(zhì)?；鞈乙?，分別加入到相應(yīng)組細(xì)胞中，混勻后置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。

1.2.2 qPCR檢測(cè)miR-132表達(dá) Trizol法提取鼻咽癌、正常鼻咽組織和細(xì)胞中的RNA，測(cè)定濃度后用試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。以反轉(zhuǎn)錄所得cDNA為模板根據(jù)試劑盒說(shuō)明配置qPCR反應(yīng)體系，檢測(cè)miR-132表達(dá)。擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性1 min；95℃變性15 s，65℃退火35 s，68℃延伸45 s，設(shè)置40個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參根據(jù)公式2-ΔΔCt計(jì)算組織及細(xì)胞中miR-132相對(duì)表達(dá)量。miR-132上游引物5'-ACCGTGGCTTTCGATTG-3'，下游引物5'-GAACATGTCTGCGTATCTC-3'，產(chǎn)物大小143 bp；U6上游引物5'-CCTCACTGTCCACCTTCCA-3'，下游引物5'-GGGTGTAAAACGCAGCTCA-3'，產(chǎn)物大小127 bp。

1.2.3 Western blot檢測(cè)KLF7蛋白表達(dá) 制備鼻咽癌及正常鼻咽組織的PBS勻漿液，收集各組細(xì)胞并經(jīng)PBS漂洗3次，加入蛋白裂解液混勻，冰上裂解15 min，離心分離上清液，BCA法測(cè)定所提取的蛋白濃度。分別取20μg按順序進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉(zhuǎn)印至PVDF膜，奶粉封閉，兔源一抗KLF7抗體（1∶1 000）和β-actin抗體（1∶500）4℃過(guò)夜孵育，洗膜后加入山羊抗兔IgG（HRP）二抗（1∶3 000）室溫孵育50 min，加入ECL發(fā)光液曝光拍照，根據(jù)目的蛋白和內(nèi)參β-actin條帶的灰度值計(jì)算組織及細(xì)胞中KLF7蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.2.4 網(wǎng)站預(yù)測(cè)及雙熒光素酶檢測(cè)KLF7與miR-132的靶向關(guān)系 經(jīng)TargetScan網(wǎng)站預(yù)測(cè)顯示，KLF7 mRNA 3'UTR區(qū)存在與miR-132序列配對(duì)結(jié)合的連續(xù)位點(diǎn)，進(jìn)一步用雙熒光素酶檢測(cè)驗(yàn)證KLF7與miR-132的靶向關(guān)系。CNE-2Z細(xì)胞分為KLF7-3'UTR-WT+miR-132 NC組、KLF7-3'UTR-WT+miR-132 mimics組、KLF7-3'UTR-MUT+miR-132 NC組和KLF7-3'UTR-MUT+miR-132 mimics組，用LipofectamineTM3000試劑盒分別將KLF7-WT質(zhì)粒、KLF7-MUT質(zhì)粒和miR-132 NC、miR-132 mimics轉(zhuǎn)染相應(yīng)細(xì)胞，48 h后收集細(xì)胞裂解后采用熒光素酶試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。以海腎熒光素酶為對(duì)照，根據(jù)螢火蟲(chóng)熒光素酶活性/海腎熒光素酶活性×100%計(jì)算報(bào)告基因的熒光素酶活性。

1.2.5 CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力 收集各組細(xì)胞重新接種于96孔板（每孔100μL含1×104個(gè)細(xì)胞），培養(yǎng)12、24、36、48、60 h后，將10μL CCK-8溶液加入各孔，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，輕輕混勻后上酶標(biāo)儀測(cè)量各孔在450 nm處的光密度（OD）值，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

1.2.6 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移及侵襲能力 收集各組細(xì)胞接種于Transwell小室上層（每孔200μL含5×104個(gè)細(xì)胞），下層加入500μL RPMI培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中24 h后取出小室上層，棉簽拭去上層凝膠和（或）細(xì)胞，浸沒(méi)在70%乙醇中固定15 min，PBS洗滌3次后蘇木精染色，封片并觀察。每個(gè)小室隨機(jī)讀取5個(gè)視野計(jì)算通過(guò)小室上層的平均細(xì)胞數(shù)，以評(píng)估CNE-2Z細(xì)胞遷移、侵襲能力。侵襲實(shí)驗(yàn)前，將100μL基質(zhì)膠加在上層小室中，室溫過(guò)夜凝固，遷移實(shí)驗(yàn)則不作此處理。

1.2.7 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤體內(nèi)生長(zhǎng)情況 將雄性裸大鼠按照體質(zhì)量標(biāo)號(hào)后采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組（CNE-2Z）、NC組、miR-132 mimics組、KLF7-OE組和miR-132 mimics+KLF7-OE組，每組至少12只。取1.2.1中各組CNE-2Z細(xì)胞，用胰蛋白酶分離并計(jì)數(shù)。各組裸大鼠均經(jīng)腋窩外側(cè)皮下注射相應(yīng)0.2 mL細(xì)胞懸液（1.0×107細(xì)胞/mL）。每2天用游標(biāo)卡尺測(cè)量一次裸大鼠腋窩處腫瘤的最小直徑（a）和最大直徑（b），根據(jù)公式1/2（a2×b）計(jì)算瘤體體積。

1.2.8 免疫組化檢測(cè)腫瘤血管密度 取各組裸大鼠的腫瘤組織制備石蠟切片，按順序進(jìn)行脫蠟、水化、滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶、抗原修復(fù)、一抗（CD34抗體）孵育、二抗孵育、鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶孵育后，加入DAB顯色，蘇木素染液復(fù)染后脫水、透明、封片，顯微鏡下拍照觀察。每片任取6個(gè)視野，通過(guò)Image Pro Plus 6.0軟件進(jìn)行圖像分析。判斷標(biāo)準(zhǔn)：CD34陽(yáng)性表示內(nèi)皮細(xì)胞，由內(nèi)皮細(xì)胞圍繞成的不規(guī)則管腔結(jié)構(gòu)判斷為微血管。每張切片取6個(gè)視野進(jìn)行微血管計(jì)數(shù)，以平均值代表腫瘤微血管密度（microvessel density，MVD）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad 8.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以±s表示，2組間比較采用t檢驗(yàn)，多組比較間比較采用one-way ANOVA，組間多重比較采用Bonferroni校正t檢驗(yàn)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-132在鼻咽癌組織及細(xì)胞中的表達(dá) 鼻咽癌組織中miR-132表達(dá)水平（0.35±0.05）較正常鼻咽組織（1.00±0.02）降低（n=30，t=66.111，P＜0.01）；鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞中miR-132表達(dá)水平（0.41±0.02）較正常鼻咽上皮細(xì)胞NP69（1.00±0.03）降低（n=6，t=40.083，P＜0.01）。

2.2 KLF7與miR-132靶向關(guān)系驗(yàn)證及KLF7在鼻咽癌組織及細(xì)胞中的表達(dá) 經(jīng)TargetScan預(yù)測(cè)顯示，KLF7為miR-132的靶基因，見(jiàn)圖1。雙熒光素酶檢測(cè)結(jié)果顯示，KLF7-3'UTR-WT+miR-132 NC組、KLF7-3'UTR-WT+miR-132 mimics組、KLF7-3'UTR-MUT+miR-132 NC組和KLF7-3'UTR-MUT+miR-132 mimics組熒光素酶活性分別為1.00±0.03、0.45±0.03、1.02±0.05和1.01±0.02，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=6，F(xiàn)=400.681，P＜0.01）。與KLF7-3'UTRWT+miR-132 NC組比較，KLF7-3'UTR-WT+miR-132 mimics組熒光素酶活性顯著降低（P＜0.05），KLF7-3'UTR-MUT+miR-132 NC組和KLF7-3'UTRMUT+miR-132 mimics組無(wú)明顯變化。Western blot結(jié)果顯示，鼻咽癌組織中KLF7蛋白表達(dá)水平（3.41±0.09）較正常鼻咽組織（1.00±0.03）增高（n=30，t=139.141，P＜0.01）；鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞中KLF7蛋白表達(dá)水平（3.37±0.06）較正常鼻咽上皮細(xì)胞NP69（1.00±0.02）增高（n=6，t=91.790，P＜0.01），見(jiàn)圖2。

Fig.1 The targeting relationship between KLF7 and miR-132圖1 KLF7與miR-132的靶向關(guān)系分析

Fig.2 The expression levels of KLF7 in nasopharyngeal carcinoma tissues and cells圖2 KLF7在鼻咽癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)

2.3 轉(zhuǎn)染miR-132 mimics和（或）KLF7-OE質(zhì)粒對(duì)KLF7表達(dá)的影響 空白組、NC組、miR-132 mimics組、KLF7-OE組和miR-132 mimics+KLF7-OE組KLF7蛋白表達(dá)水平分別為1.05±0.03、1.04±0.04、0.49±0.02、2.38±0.07和1.11±0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=6，F(xiàn)=1 421.155，P＜0.01）。與空白組和NC組比較，miR-132 mimics組CNE-2Z細(xì)胞中KLF7蛋白表達(dá)水平顯著降低，KLF7-OE組其表達(dá)水平顯著增高（P＜0.05）。與miR-132 mimics組比較，miR-132 mimics+KLF7-OE組KLF7蛋白表達(dá)顯著增高（P＜0.05）。

2.4 miR-132靶向KLF7對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖的影響 CKK-8分析結(jié)果顯示，相比空白組和NC組，miR-132 mimics組的CNE-2Z細(xì)胞36、48、60 h增殖活力顯著降低，KLF7-OE組則顯著增高（P＜0.05）。相比miR-132 mimics組，miR-132 mimics+KLF7-OE組的CNE-2Z細(xì)胞36、48、60 h增殖活力顯著增高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.5 miR-132靶向KLF7對(duì)鼻咽癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響 Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相比空白組和NC組，miR-132 mimics組的CNE-2Z細(xì)胞遷移和侵襲數(shù)量顯著降低（P＜0.05），KLF7-OE組遷移和侵襲數(shù)量均顯著增高（P＜0.05）。相比miR-132 mimics組，miR-132 mimics+KLF7-OE組的CNE-2Z細(xì)胞遷移和侵襲數(shù)量顯著增高（P＜0.05）。見(jiàn)圖3、表2。

Tab.1 Comparison of CNE-2Z cell proliferation ability between the five groups at different time points表1 各組CNE-2Z細(xì)胞不同時(shí)點(diǎn)增殖能力比較 （n=6，OD值，±s）

Tab.1 Comparison of CNE-2Z cell proliferation ability between the five groups at different time points表1 各組CNE-2Z細(xì)胞不同時(shí)點(diǎn)增殖能力比較 （n=6，OD值，±s）

＊＊P＜0.01；a與空白組比較，b與NC組比較，c與miR-132 mimics組比較，d與KLF7-OE組比較，P＜0.05

?

Fig.3 Comparison of CNE-2Z cell migration and invasion between the five groups(hematoxylin dyeing,×200)圖3 各組CNE-2Z細(xì)胞遷移及侵襲情況比較（蘇木精染色，×200）

Tab.2 Comparison of CNE-2Z cell migration and invasion between the five groups表2 各組CNE-2Z細(xì)胞遷移及侵襲情況比較（n=6，個(gè)/視野，±s）

Tab.2 Comparison of CNE-2Z cell migration and invasion between the five groups表2 各組CNE-2Z細(xì)胞遷移及侵襲情況比較（n=6，個(gè)/視野，±s）

＊＊P＜0.01；a與空白組比較，b與NC組比較，c與miR-132 mimics組比較，d與KLF7-OE組比較，P＜0.05

?

2.6 miR-132靶向KLF7對(duì)裸鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響 相比空白組和NC組，miR-132 mimics組的腫瘤體積在第8～20天均顯著降低（P＜0.05），KLF7-OE組的腫瘤體積在第8～20天均顯著增高（P＜0.05）。相比miR-132 mimics組，miR-132 mimics+KLF7-OE組的腫瘤體積在第8～20天顯著增高（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

2.7 miR-132靶向KLF7對(duì)裸鼠腫瘤內(nèi)血管生成的影響 免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，空白組、NC組、miR-132 mimics組、KLF7-OE組和miR-132 mimics+KLF7-OE組MVD（條/視野）分別為65.47±5.06、62.86±4.93、35.14±4.51、184.83±8.50和68.07±4.28，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=12，F(xiàn)=1 268.092，P＜0.01）。相比空白組和NC組，miR-132 mimics組的腫瘤內(nèi)血管減少，MVD降低（P＜0.05），KLF7-OE組的腫瘤內(nèi)血管增多，MVD顯著增高（P＜0.05）；相比miR-132 mimics組，miR-132 mimics+KLF7-OE組的腫瘤內(nèi)血管增多，MVD顯著增高（P＜0.05）。見(jiàn)圖4。

3 討論

隨著放射和化學(xué)療法的進(jìn)步，放療的敏感性和局部控制效果明顯改善，然而仍有30%～40%的NPC患者會(huì)在4年內(nèi)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響預(yù)后［4］。進(jìn)一步認(rèn)識(shí)NPC轉(zhuǎn)移的分子模式，對(duì)于開(kāi)發(fā)有效的新治療策略至關(guān)重要。目前，已在NPC中觀察到多種miRNA表達(dá)失調(diào)，且特定miRNA異常表達(dá)與NPC細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲有關(guān)［5］。

miR-132在腫瘤中的作用具有差異性，其在膽管癌、胰腺癌中高表達(dá)，發(fā)揮促增殖、促侵襲等致癌作用［6-7］。然而，miR-132在更多腫瘤中表達(dá)降低，發(fā)揮腫瘤抑制作用，其中miR-132在前列腺癌中低表達(dá)，且在轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)中的表達(dá)更低，miR-132的功能喪失可能通過(guò)提高葡萄糖代謝，促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)［8］。在卵巢癌和非小細(xì)胞肺癌中miR-132亦低表達(dá)，過(guò)表達(dá)miR-132可抑制細(xì)胞的增殖、克隆形成、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、遷移和侵襲等過(guò)程［9-10］。Chen等［11］研究顯示，miR-132在甲狀腺癌組織和細(xì)胞系中顯著下調(diào)，過(guò)表達(dá)miR-132可通過(guò)靶向FOXA1等發(fā)揮抑癌作用。另有研究顯示，miR-132在胃癌中通過(guò)靶向黏蛋白（MUC13）、CD44、纖連蛋白1（FN1）等促進(jìn)胃癌細(xì)胞的擴(kuò)散和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［12-13］。Yang等［14］采用GSE36682芯片分析發(fā)現(xiàn)miR-132在NPC腫瘤組織中表達(dá)降低，且miR-132低表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有關(guān)。本研究也在NPC組織和細(xì)胞系中觀察到miR-132表達(dá)下調(diào)，過(guò)表達(dá)miR-132可抑制CNE-2Z細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，進(jìn)一步體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明過(guò)表達(dá)miR-132可抑制NPC細(xì)胞在裸鼠內(nèi)生長(zhǎng)和腫瘤內(nèi)血管形成，表明在鼻咽癌中miR-132亦發(fā)揮抑癌作用，其機(jī)制有待探索。

Tab.3 Comparison of tumor volume in nude mice between the five groups at different time points表3 各組裸鼠體內(nèi)不同時(shí)點(diǎn)腫瘤體積的比較 （n=12，mm3，±s）

Tab.3 Comparison of tumor volume in nude mice between the five groups at different time points表3 各組裸鼠體內(nèi)不同時(shí)點(diǎn)腫瘤體積的比較 （n=12，mm3，±s）

＊＊P＜0.01；a與空白組比較，b與NC組比較，c與miR-132 mimics組比較，d與KLF7-OE組比較，P＜0.05

?

Fig.4 Comparison of angiogenesis in tumor of nude mice between the five groups(SP immunohistochemistry,×200)圖4 各組裸鼠腫瘤內(nèi)血管生成的比較（SP免疫組化，×200）

本研究結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)miR-132可顯著降低CNE-2Z細(xì)胞中KLF7蛋白表達(dá)，進(jìn)一步通過(guò)TargetScan網(wǎng)站預(yù)測(cè)［15］和雙熒光素酶檢測(cè)證實(shí)KLF7為miR-132的直接靶標(biāo)之一，推測(cè)KLF7可能是miR-132的作用靶點(diǎn)。KLF可與DNA轉(zhuǎn)錄區(qū)域結(jié)合并充當(dāng)轉(zhuǎn)錄激活因子或阻遏因子，可影響細(xì)胞增殖、分化和遷移等過(guò)程［16］。近年研究發(fā)現(xiàn)，KLF7在宮頸癌［17］、肺癌［18］等多種腫瘤組織或細(xì)胞中高表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，造成患者不良預(yù)后。Li等［19］報(bào)道，KLF7可調(diào)節(jié)非小細(xì)胞肺癌組織中Wnt/β-catenin信號(hào)介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程，并作為miR-103的直接靶標(biāo)，KLF7表達(dá)上調(diào)可能促進(jìn)胃癌發(fā)展。另有研究發(fā)現(xiàn)，KLF7在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中高度表達(dá)，可通過(guò)激活精氨酸琥珀酸裂合酶（ASL）轉(zhuǎn)錄，觸發(fā)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的異常生長(zhǎng)，上述作用受到miR-136-3p的負(fù)調(diào)控［20-21］。Gupta等［22］報(bào)道，KLF7可通過(guò)維持高爾基體結(jié)構(gòu)和功能復(fù)雜性，促進(jìn)胰腺導(dǎo)管腺癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。本研究證實(shí)，KLF7蛋白在NPC組織和細(xì)胞系中均表達(dá)上調(diào)，過(guò)表達(dá)KLF7可促進(jìn)CNE-2Z細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及其在裸鼠內(nèi)生長(zhǎng)和腫瘤內(nèi)血管形成，且過(guò)表達(dá)KLF7可減弱miR-132 mimics的抑腫瘤作用，進(jìn)一步表明miR-132可靶向KLF7，對(duì)NPC細(xì)胞增殖、遷移及侵襲產(chǎn)生影響。

綜上所述，miR-132在NPC組織和細(xì)胞中呈低表達(dá)，KLF7呈高表達(dá)，miR-132可通過(guò)負(fù)調(diào)控KLF7，影響NPC細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲，這為NPC靶向治療提供了新思路。然而miR-132具有多個(gè)靶點(diǎn)，且基因表達(dá)可受到多種miRNA調(diào)控。本研究?jī)H揭示了miR-132和KLF7在NPC中的作用，因此后續(xù)還需要對(duì)miR-132的其他靶標(biāo)及調(diào)控KLF7的其他miRNA進(jìn)行系統(tǒng)分析。