一種物理振蕩制備溶血標(biāo)本的改進(jìn)方法

武文平，劉冰，佟瑞

（秦皇島市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 秦皇島）

0 引言

溶血是臨檢工作中最常見的干擾因素，標(biāo)本溶血后會(huì)對(duì)血常規(guī)、生化、免疫等多項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果造成干擾[1-3]。溶血對(duì)各項(xiàng)目的影響及相應(yīng)的補(bǔ)救措施一直是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究熱點(diǎn)，選用一種合理有效的制備溶血標(biāo)本的方法是進(jìn)行相關(guān)研究的基礎(chǔ)。物理振蕩法是人工制備溶血標(biāo)本的常用方法，但在實(shí)際操作中，制備高濃度的溶血標(biāo)本需要很長(zhǎng)的振蕩時(shí)間，且溶血濃度不理想。本實(shí)驗(yàn)在傳統(tǒng)方法基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，采取預(yù)處理措施，提高溶血效果，以期為臨檢工作中快速制備溶血標(biāo)本提供一種參考方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取秦皇島市中醫(yī)醫(yī)院2020年1月14日血常規(guī)標(biāo)本20例（HGB 140.25±11.74 g/L），3000 rpm，5min，血漿無溶血（血漿HGB濃度為0 g/L），然后混勻，每例標(biāo)本平均分為2份，設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組 ；隨機(jī)選取2020年1月15日促凝血標(biāo)本20例[血清血紅蛋白（hemoglobin，HGB） 139.15±11.17 g/L]，每例留取2份血樣，待凝固后，3000 rpm，5min，血清無溶血（血清HGB濃度為0 g/L），設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。隨機(jī)選取2020年1月16日體檢人員20例，抗凝血（HGB 136.40±9.69 g/L）和促凝血（HGB 136.00±8.52 g/L）樣本各留取8ml，立即分為7份，每份1ml，離心后血清或血漿均無溶血。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組溶血效果比較

實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本預(yù)先3000 rpm，5min離心處理，分離血漿或血清備用，底部血細(xì)胞旋渦振蕩5min，加入分離好的原血漿或血清混勻，3000 rpm，5min離心，測(cè)上層血漿或血清HGB濃度； 對(duì)照組標(biāo)本旋渦振蕩儀振蕩5min，3000 rpm，5min離心，測(cè)上層血漿HGB濃度，采用配對(duì)t檢驗(yàn)比較兩組HGB水平有無差異。

1.2.2 采用上述實(shí)驗(yàn)組方法，研究不同時(shí)間振蕩條件下所制備的溶血HGB濃度

將2020年1月16日收集的20例抗凝血和促凝血標(biāo)本分各為7份，每份1ml，按實(shí)驗(yàn)組方法，分別給予2min、5min、10min、15 min、20 min、25 min、30 min 不同時(shí)間振蕩，加入分離好的原血漿或血清混勻，3000 rpm，5min離心，測(cè)上層血漿或血清HGB濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，服從正態(tài)分布的定量資料以（±s）表示，兩組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩兩間比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組HGB濃度比較

抗凝血與促凝血的實(shí)驗(yàn)組HGB濃度均明顯高于對(duì)照組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血漿（血清）HGB濃度比較[（±s），g/L]

表1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血漿（血清）HGB濃度比較[（±s），g/L]

組別 n 抗凝血HGB 促凝血HGB實(shí)驗(yàn)組 20 6.55±0.83 7.40±0.88對(duì)照組 20 0.85±0.37 0.95±0.39 t 38.803 48.367 P 0.000 0.000

2.2 不同振蕩時(shí)間所制備的血紅蛋白濃度

采用實(shí)驗(yàn)組方法，隨著振蕩時(shí)間的延長(zhǎng)，所制備的標(biāo)本HGB濃度不斷增加，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 不同振蕩時(shí)間所制備的血紅蛋白濃度（±s）

表2 不同振蕩時(shí)間所制備的血紅蛋白濃度（±s）

注：與2min比較，*P<0.05；與5min比較，# P<0.05；與10min比較，△P<0.05；與15min比較，αP<0.05；與20min比較，βP<0.05；與25min比較，γ P <0.05

振蕩時(shí)間（min）抗凝血HGB濃度（g/L） 促凝血HGB濃度（g/L）2 0.80±0.41 0.85±0.37 5 6.10±0.91* 7.45±0.89*10 8.40±1.31* # 9.20±1.11*#15 11.70±1.22*#△ 12.65±1.09*#△20 14.55±1.23*#△α 15.15±1.42*#△α 25 17.55±1.43*#△αβ 18.10±1.33*#△αβ 30 19.65±1.27*#△αβγ 20.15±1.39*#△αβγ

3 討論

物理振蕩法制備溶血標(biāo)本是通過外部力量破壞紅細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，達(dá)到溶血目的[4]。不需要添加外來物質(zhì)（生理鹽水或去離子水），不改變樣本原有成分，非常適用于生化免疫類項(xiàng)目的研究。傳統(tǒng)方法直接將樣本振蕩，制備HGB>5g/L溶血標(biāo)本，即需要30min以上的振蕩時(shí)間。如果要制備>10g/L溶血標(biāo)本，意味著更長(zhǎng)的振蕩時(shí)間。采用細(xì)針（30號(hào)）反復(fù)抽吸樣本來制備溶血樣本，操作過程產(chǎn)生大量泡沫，需要長(zhǎng)時(shí)間靜置才能消除，且只能應(yīng)用于抗凝血樣本[5]。反復(fù)凍融法雖然能取得高濃度的溶血標(biāo)本，但實(shí)驗(yàn)過程需要反復(fù)洗滌、凍融，耗時(shí)長(zhǎng)。田耘博等[6]用超聲波破壞紅細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了快速溶血，且建立了不同溶血程度的溶血梯度模型。

本研究從血液中液體成分對(duì)細(xì)胞膜穩(wěn)定所起保護(hù)性作用的角度出發(fā)，預(yù)先離心分離血漿或血清，去除紅細(xì)胞保護(hù)因素，同時(shí)拉近了紅細(xì)胞之間的空間距離[7]，再對(duì)細(xì)胞進(jìn)行振蕩破壞，細(xì)胞間的撞擊頻率增加，最終達(dá)到了理想的溶血效果。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果在時(shí)間上加以精確控制，可以制備出與臨檢工作中相符的溶血濃度的樣本，省去了用生理鹽水或去離子水調(diào)節(jié)溶血濃度的步驟[8-10]。此外，本實(shí)驗(yàn)制備的溶血標(biāo)本會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞碎片，溶血濃度越高，碎片越多，一部分懸浮在血漿或血清中，可考慮使用高速離心機(jī)12000rpm，10min 去除。

改進(jìn)的物理振蕩法可以快速制備溶血標(biāo)本，所需設(shè)備簡(jiǎn)單，在一般實(shí)驗(yàn)室即可開展，為基層醫(yī)務(wù)工作者制備溶血標(biāo)本，開展溶血對(duì)檢驗(yàn)項(xiàng)目影響研究提供一種實(shí)驗(yàn)方法[11,12]。