胸苷激酶1在胃癌診斷及預(yù)后評估中的意義

徐綺華，林秀強(qiáng)，胡 斌 （廣東省佛山市第一人民醫(yī)院胃腸腫瘤內(nèi)科，廣東佛山 528000）

胸苷激酶1（TK1）是脫氧核糖核酸補(bǔ)救合成途徑的限速酶，能在腺嘌呤核苷三磷酸存在的情況下催化脫氧胸腺嘧啶形成單磷酸胸腺嘧啶，在反映細(xì)胞增殖活性中具有較高的可信度[1?2]。TK1 已成為許多惡性腫瘤診斷及預(yù)后判斷的特異性物質(zhì)，許海周等[3]研究發(fā)現(xiàn)血清TK1 水平越高，直腸癌患者預(yù)后越差。薄維波等[4]研究發(fā)現(xiàn)TK1 在原發(fā)性肝癌的診斷和預(yù)后預(yù)測中均具有良好的效能。本研究觀察了胃癌（GC）患者血清TK1 水平及病灶組織內(nèi)TK1 的表達(dá)情況，并分析其在胃癌診斷及評估預(yù)后的價(jià)值，結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 病例與分組

選取本院2014.01－2016.01 間收治的60 例胃癌（胃癌組）、20 例胃潰瘍（胃潰瘍組）、20 例萎縮性胃炎（萎縮性胃炎組）和20 例胃息肉（胃息肉組）納為研究對象。胃癌、胃潰瘍、萎縮性胃炎及胃息肉患者均行胃鏡檢查，必要時(shí)行組織活檢確診。其中胃癌組男33例，女27例；胃潰瘍組男11例，女9例；萎縮性胃炎組男12例，女8例；胃息肉組男10例，女10例。胃癌、胃潰瘍、萎縮性胃炎、胃息肉組患者的平均年齡分別為63.2、60.6、59.9、62.3 歲。4 組患者的年齡、性別無明顯差別。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)標(biāo)本采集（1）分別采集4 組患者血清，3 500 r/min 離心5 min 分離，吸取適量血清儲存于EP管內(nèi)待用。（2）收集60例胃癌標(biāo)本病灶組織標(biāo)本及60例胃良性病變者(胃潰瘍組、萎縮性胃炎組和胃息肉組)病灶組織，置于4%福爾馬林溶液中固定，酒精梯度脫水，石蠟包埋，5 μm厚度連續(xù)切片。

1.2.2 檢測方法（1）血清TK1 檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清TK1 含量，試劑盒為武漢華美生物技術(shù)有限公司提供的人可溶性TK1 酶聯(lián)免疫試劑盒。嚴(yán)格按照實(shí)際和相關(guān)步驟進(jìn)行操作，最后以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的OD 值作為橫坐標(biāo)，輸入軟件后繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出樣本中血清TK1 含量。（2）免疫組化SABC 法檢測病灶組織內(nèi)TK1表達(dá)量：石蠟切片行HE染色，后依次進(jìn)行切片常規(guī)脫蠟至水?抗原修復(fù)?阻斷內(nèi)源性過氧化物酶?滴加一抗?DAB 顯色?復(fù)染和反藍(lán)?梯度酒精脫水?透明?封片等步驟。

1.2.3 結(jié)果判斷 兩位醫(yī)師采用半定量法單獨(dú)判斷染色結(jié)果。TK1 免疫組化染色主要定位于癌細(xì)胞胞漿內(nèi)，呈棕黃色至棕褐色，灶性或彌漫性分布。每張切片首先在低倍鏡下觀察，再在高倍鏡下觀察同一標(biāo)本切片癌組織陽性染色區(qū)，至少測定10 個視野，以100 個細(xì)胞中陽性反應(yīng)細(xì)胞占比計(jì)算染色強(qiáng)度指數(shù)，其中陽性反應(yīng)細(xì)胞占比0～5%記為－，占比6%～25%記為+，占比26%～50%記為++，占比≥51%記為+++。

1.2.4 觀察指標(biāo)及評價(jià)方法 ⑴4 組血清TK1 水平；⑵以胃癌患者作為疾病組，其他良性胃病變患者（胃潰瘍、萎縮性胃炎、胃息肉）作為對照組，繪制ROC 曲線，分析血清TK1 在診斷胃癌中的價(jià)值；⑶比較胃癌組織與良性胃病變組織內(nèi)TK1 陽性表達(dá)情況；⑷分析胃癌組織中TK1 陽性表達(dá)量與患者臨床病理特征間的關(guān)系；⑸繪制Kaplan?Meier 生存曲線，分析TK1陽性表達(dá)量者與陰性表達(dá)者生存情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0 軟件處理，計(jì)量資料以表示；計(jì)數(shù)資料采用(校正) χ2檢驗(yàn)，繪制ROC 曲線，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清TK1水平

胃癌組、胃潰瘍組、萎縮性胃炎組及胃息肉組患者的血清TK1水平分別為(121.15±22.05)、(80.15±11.36)、(78.69±12.41)和(81.25±12.03) μg/L，胃癌組的血清TK1 水平明顯高于其他3 組（均P<0.01），其他3組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 血清TK1對胃癌的診斷效能

以胃癌組作為疾病組，胃潰瘍、萎縮性胃炎等其他胃病變組作為對照組，繪制ROC 曲線發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血清TK1 超過95.59 μg/L 時(shí)，其診斷胃癌的效能最高，AUC=0.750，95%CI為0.658～0.842，靈敏度、特異度分別為83.3%和70.0%。

2.3 胃癌組與胃良性病變組病灶組織內(nèi)TK1 陽性的表達(dá)情況

胃癌組織中TK1 陽性表達(dá)率顯著高于胃良性病變組織（P<0.05），見表1。

表1 胃癌組與胃良性病變組病灶組織內(nèi)TK1陽性表達(dá)情況比較

2.4 TK1與胃癌患者臨床病理特征間的關(guān)系

病灶組織內(nèi)TK1 陽性表達(dá)與胃癌組織學(xué)分級及腫瘤直徑有關(guān)（P<0.05），見表2。

表2 TK1與胃癌患者臨床病理特征間的關(guān)系分析 (例)

2.5 胃癌組織內(nèi)TK1 陽性表達(dá)組與陰性組5 a 生存曲線的比較

TK1 陽性表達(dá)者5 a 無瘤生存期低于陰性組，兩組5 a 生存曲線差異顯著（Log Rank=3.402，P=0.034），見圖1。

圖1 胃癌組織內(nèi)TK1陽性表達(dá)組與陰性組5 a生存曲線的比較

3 討論

GC 是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，其病死率位居腫瘤相關(guān)死因第二[5?7]。早期胃癌無特異性表現(xiàn)，且缺乏胃癌根治術(shù)后患者預(yù)后判斷的有效標(biāo)準(zhǔn)，故胃癌的早期診斷及預(yù)后判斷依舊是臨床研究的重點(diǎn)。

腫瘤細(xì)胞過度增殖與癌變發(fā)生、發(fā)展及術(shù)后腫瘤轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)間均存在密切關(guān)聯(lián)，TK是DNA補(bǔ)救合成途徑的限速酶，在細(xì)胞增殖活動中發(fā)揮重要作用[8?10]。TK1是TK亞型中的一種，存在于細(xì)胞漿內(nèi)，其活性與細(xì)胞周期性改變密切相關(guān)。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入休眠期時(shí)，TK1 活性低；當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入S 期時(shí)，其活性迅速增長，至G2 期達(dá)到高峰。成人體內(nèi)TK1 含量很少，但機(jī)體存在癌變時(shí)，機(jī)體TK1含量劇增[11]。血清學(xué)檢查操作簡便，對被篩查者造成的痛苦小，是臨床上常使用的檢查方法。

本研究對胃癌、胃潰瘍、萎縮性胃炎及胃息肉患者的血清TK1水平進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示胃癌患者血清TK1水平明顯高于其他3組(P<0.01)。將胃癌患者作為疾病組，其他胃病變患者作為對照組，繪制ROC 曲線發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血清TK1 超過95.59 μg/L 時(shí)，其在診斷胃癌中的效能最高，AUC=0.750，95%CI為0.658～0.842，靈敏度、特異度分別為83.3%和70.0%，提示血清TK1在診斷胃癌中具有較高的效能。但本研究將其他胃病變組納為對照組，并未對血清TK1在篩查早期胃癌中的價(jià)值進(jìn)行研究，存在一定的局限性。

除篩查胃癌外，對行胃癌根治術(shù)治療患者預(yù)后的判斷也是臨床關(guān)注的重點(diǎn)。本研究對60 例胃癌患者進(jìn)行5 a 隨訪，其中39 例預(yù)后良好，21 例發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。比較其與胃良性病變患者病灶內(nèi)TK1 陽性表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，胃癌患者病灶組織內(nèi)TK1陽性表達(dá)率明顯高于良性病變組織；此外，胃癌預(yù)后良好組病灶組織內(nèi)TK1 陽性表達(dá)量也明顯高于預(yù)后不良組(P<0.05)，提示病灶內(nèi)TK1 陽性表達(dá)量可能影響患者預(yù)后。

目前，TK1 已被證實(shí)與多種惡性病變相關(guān)。鄭建坤等[12]研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織內(nèi)TK1表達(dá)水平明顯高于前列腺增生組織，且其表達(dá)量與前列腺癌組織學(xué)分級和臨床分期明顯相關(guān)。王永堂等[13]研究發(fā)現(xiàn)，骨肉瘤組織內(nèi)TK1 陽性表達(dá)率為80.82%，明顯高于骨軟骨瘤組織的13.04%，且TK1 表達(dá)水平與骨肉瘤Eneeking分期、軟組織浸潤、肺轉(zhuǎn)移間呈明顯相關(guān)性。本研究分析胃癌患者臨床病理特征與TK1 表達(dá)情況間的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，組織低/未分化者及腫瘤直徑＞5 cm者病灶組織內(nèi)TK1 陽性表達(dá)率明顯高于高分化及腫瘤直徑≤5 cm 者(P<0.05)，提示TK1 表達(dá)量與胃癌患者組織分化及腫瘤直徑間關(guān)系密切。江蓓蕾等[14]研究也發(fā)現(xiàn)，消化道惡性病變患者的血清TK1水平明顯高于正常者，且隨著患者癌變TNM 分期的上升，血清TK1水平不斷升高，提示TK1與消化道惡性腫瘤病情關(guān)系密切。

繪制Kaplan?Meier 生存曲線，比較TK1 陽性胃癌患者及陰性患者5 a 無病生存情況發(fā)現(xiàn)，TK1 陽性表達(dá)者5 a無瘤生存期低于陰性組，兩組5 a生存曲線差異顯著（Log Rank=3.402，P=0.034），提示TK1 在患者預(yù)后判斷中的價(jià)值。

綜上，TK1 與胃癌發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)，在診斷胃癌及預(yù)測患者預(yù)后中均具有一定的效能。