細(xì)菌鑒定中應(yīng)注意哪些問題

陳濤

自然界中的細(xì)菌種類繁多，分布廣、數(shù)量大、繁殖快、代謝活力強(qiáng)、易變異，大大增加了細(xì)菌鑒定的難度。在細(xì)菌鑒定中，為了獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，需要注意相關(guān)事宜。下面分享有關(guān)細(xì)菌鑒別的一些知識。

1細(xì)菌鑒定方法

細(xì)菌（Bacteria）是指生物的主要類群之一，屬于細(xì)菌域。細(xì)菌對人類活動有較大的影響：一方面，細(xì)菌是許多疾病的病原體，可通過多種途徑（如消化道、接觸、呼吸道、蚊蟲叮咬等）在正常人群中傳播，具有較強(qiáng)的傳染性，對社會造成的危害較大;另一方面，人類也時常利用細(xì)菌，如乳酪、酸奶和酒釀的制作，部分抗生素的制造，廢水的處理等。

細(xì)菌鑒定是指將未知細(xì)菌按生物學(xué)特征放入系統(tǒng)中某一適當(dāng)位置，和已知菌種比較其相似性，通過對比分析方法確定細(xì)菌分類地位的過程。常用的細(xì)菌鑒定方法有：（1）生物鑒定法，主要利用細(xì)菌對營養(yǎng)物質(zhì)分解能力的差異以及代謝產(chǎn)物的差異進(jìn)行細(xì)菌鑒定，如糖分解產(chǎn)物試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)等。（2）血清學(xué)鑒定，適用于含較多血清型的細(xì)菌，常用的方法有玻片凝集試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、協(xié)同凝集試驗(yàn)等，也屬于血清學(xué)鑒定方法。（3）分子生物學(xué)檢測，較適用于人工培養(yǎng)基無法生長、生長速度緩慢、對營養(yǎng)要求高、不易培養(yǎng)的細(xì)菌，如核酸雜交、生物芯片、核酸擴(kuò)增技術(shù)等。（4）微生物自動鑒定系統(tǒng)鑒定，能快速、準(zhǔn)確地鑒定常見分離菌，在臨床應(yīng)用較廣泛。（5）質(zhì)譜技術(shù)，這是一種新型技術(shù)，靈敏度高。

2細(xì)菌鑒定注意事項(xiàng)

2.1 確保純培養(yǎng)物

若一個菌落的所有細(xì)菌來源一個親代細(xì)胞，那么稱這一菌落為“純培養(yǎng)”。一般而言，直接從植物、動物、一般環(huán)境中分離出來的細(xì)菌，較少獲得純培養(yǎng)。細(xì)菌鑒定的第一步是獲得每種細(xì)菌的純培養(yǎng)物，因?yàn)榛旌吓囵B(yǎng)物的特征試驗(yàn)反應(yīng)不可用于鑒定。獲得純培養(yǎng)物的技術(shù)需要根據(jù)所研究的菌株而選擇，常用的方法包括涂布平板法、傾注平板法、平板劃線法、厭氧法、富集培養(yǎng)法、單細(xì)胞挑取法等。不純培養(yǎng)物比較普遍的來源是選擇性或抑制性培養(yǎng)基上的單個菌落挑取物，因此，在純化以及驗(yàn)證過程中，盡量避免選擇使用此類培養(yǎng)基。

2.2 關(guān)注菌株的形態(tài)學(xué)

形態(tài)學(xué)指的是菌落的形態(tài)、液體培養(yǎng)生長狀況、細(xì)胞個體形態(tài)以及微生物細(xì)胞的超顯微結(jié)構(gòu)等。近年來，我國微生物技術(shù)迅速發(fā)展，細(xì)胞鑒定技術(shù)隨之進(jìn)步，但部分基層工作人員并未重視形態(tài)學(xué)的研究。最初的微生物分類標(biāo)準(zhǔn)以形態(tài)為主，即以形態(tài)特征為基本特征進(jìn)行分類，這一方法應(yīng)用廣泛，建議作為細(xì)菌鑒定的第一步。細(xì)菌形態(tài)是一種穩(wěn)定的特征，對環(huán)境的影響具有獨(dú)立性。從遺傳的角度分析，即使是單個基因突變，通常也不會引起較大的形態(tài)改變。在實(shí)際工作中，相差顯微鏡非常有用，它可觀察到活體，且可避免電鏡術(shù)中染色或干燥和色埋造成的破壞。革蘭氏反應(yīng)仍是目前最常見、最有效的染色方法，應(yīng)用相差顯微鏡也較為方便。細(xì)菌鑒定中可根據(jù)細(xì)菌具有莢膜、芽孢、鞭毛、菌毛等特殊結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)對細(xì)菌進(jìn)行分類。

2.3 盡量少數(shù)目的試驗(yàn)鑒定

從實(shí)踐觀點(diǎn)出發(fā)，細(xì)菌鑒定所需的試驗(yàn)數(shù)目應(yīng)盡量保持在最低標(biāo)準(zhǔn)?；跀?shù)百個特征試驗(yàn)中，選擇一個快速簡便地鑒定所要研究的細(xì)菌的試驗(yàn)類型十分有必要。了解菌株來源以及原始分離對細(xì)菌鑒定是有益的，根據(jù)這種資料及純化程序，比較容易獲得形態(tài)學(xué)與革蘭染色反應(yīng)的細(xì)節(jié)反應(yīng)，經(jīng)常用于研究對象縮小到少量的屬。例如，由好氧的非選擇性培養(yǎng)基上分離的革蘭陽性、產(chǎn)運(yùn)動孢子的桿菌，基本上可肯定其是芽孢桿菌（Bacillus），而且無需將其與專性厭氧菌、革蘭陰性桿菌、革蘭陽性桿菌等細(xì)菌鑒定分析。

3結(jié)語

細(xì)菌鑒定是實(shí)驗(yàn)室工作的重要內(nèi)容，可幫助明確細(xì)菌的種類、特征，輔助各項(xiàng)工作的開展。同時，需要注意相關(guān)事宜，確保細(xì)菌鑒定工作的準(zhǔn)確性與有效性。