PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素在胃癌患者組織中的表達及作用研究

李 明，徐光輝，楊利萍，李 汀，宋 巍

1.西安市第四醫(yī)院消化內科，陜西 西安710004；2.空軍軍醫(yī)大學西京消化病醫(yī)院

胃癌是一種嚴重威脅人類健康的疾病，其發(fā)病率及死亡率均居世界前4位，且有日益年輕化趨勢，它的發(fā)生發(fā)展及分子機制較復雜[1]。原鈣黏蛋白10(PCDH10)是一種表達于細胞膜表面的鈣黏蛋白，主要在細胞與細胞之間的黏附中起調節(jié)作用，還可在細胞間起信號傳導作用[2]。多項研究[3-5]表明，PCDH10基因的甲基化改變在結直腸癌、子宮內膜腺癌、腎癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。因此可將其作為檢測胃癌患者的一種輔助指標，可在淋巴結轉移情況不明時起到輔助判斷患者預后的作用。Neuritin是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族中一種小分子物質，在神經(jīng)突起的生長、成熟及神經(jīng)系統(tǒng)損傷中起重要作用。有研究[6]表明，Neuritin不僅在神經(jīng)系統(tǒng)中表達，還在腫瘤組織中高表達，并且參與了腫瘤的進展。E-鈣黏附素(E-cadherin)是細胞黏附分子家族中一種重要的鈣依賴性黏附分子，主要存在于上皮細胞，可促使細胞與細胞、細胞與外基質間發(fā)生黏附，對維持組織結構穩(wěn)定性、調節(jié)細胞運動具有重要作用。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，其表達水平的高低與腫瘤的惡性程度有關[7]。孫碩彤等[8]研究表明，與正常胃組織相比，胃癌組織中CD44V6、E-鈣黏附素表達差異較大，二者對胃癌細胞的轉移及發(fā)展具有一定的作用。因此，本研究擬將PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素三者聯(lián)合起來檢測其在胃癌患者組織中的表達情況，為臨床上篩查胃癌患者提供新的方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料研究對象：選取2017年1月至2019年11月西安市第四醫(yī)院手術后胃癌組織標本和癌旁組織標本各80例，胃癌組織中男45例，女35例，年齡(52.6±2.5)歲(38～78歲)，TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期：30例，Ⅲ～Ⅳ期：50例，癌旁組織中男50例，女30例，年齡(55.6±2.7)歲(35～80歲)，TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期：30例，Ⅲ～Ⅳ期：50例。兩組患者在性別、年齡、TNM分期等資料中對比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

納入標準：均經(jīng)胃鏡檢查，手術病理確診為胃癌，無放化療史。排除標準：胃癌患者伴有急性感染者；精神病患者；重大器官損傷患者；伴有自身免疫性疾病患者。

1.2 方法使用免疫組化染色及其試劑盒[廠家：齊一生物科技(上海)有限公司；貨號：QY-H12005]檢測PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素陽性表達。將二甲苯放置10 min后進行酒精水化，加入蛋白酶修復液，進行孵化30 min，溫度為37 ℃，棄抗原；將切片移至濕盒中，加入3% H2O2，恒溫冰箱孵育10 min，使用PBS沖洗；加入山羊血清，常溫下封閉30 min，使用濾紙將封閉液吸取，加入PCDH10(廠家：圣克魯斯生物技術公司；克隆號：57575；訂購目錄號：sc-405603)、Neuritin(廠家：圣克魯斯生物技術公司；克隆號：51299；訂購目錄號：sc-402412)、E-鈣黏附素蛋白抗體(廠家：廣州健侖生物科技有限公司；克隆號：EP700Y；訂購目錄號：OB101)，置入濕盒，孵育1 h，進行PBS沖洗，經(jīng)過DAB顯色處理10 min，觀察棕黃色陽性反應，采用PBS沖洗1 min；使用蘇木精染色3 min，自來水沖洗1 min，脫水、封片處理。

2 結果

2.1 不同組織PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素的表達

癌旁組織PCDH10表達高于胃癌組織，而Neuritin、E-鈣黏附素表達低于胃癌組織，且從其免疫組化染色可見，在胃癌組織中，PCDH10在細胞膜的表達低于癌旁組織，而Neuritin、E-鈣黏附素在細胞質和細胞膜中的表達均高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(見表1、圖1)。

表1 不同組織PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素的表達比較Tab 1 Comparison of expressions of PCDH10,Neuritin and E-cadherin in different tissues %)

圖1 不同組織PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素免疫組化染色圖(放大400倍) Fig 1 Immunohistochemical staining of PCDH10,Neuritin,E-cadherin in different tissues

2.2 不同胃癌分期PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素的表達Ⅲ～Ⅳ期PCDH10表達低于Ⅰ～Ⅱ期，Neuritin、E-鈣黏附素表達高于Ⅰ～Ⅱ期，兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(見表2)。

表2 不同胃癌分期PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素的表達比較Tab 2 Comparison of expressions of PCDH10,Neuritin and E-cadherin in different stages of gastric cancer %)

2.3 有無淋巴結轉移時PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素的表達胃癌患者中，淋巴結轉移者47例，無淋巴結轉移者33例。結果表明，淋巴結轉移者PCDH10表達低于無淋巴結轉移者，而Neuritin、E-鈣黏附素表達卻高于無淋巴結轉移者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(見表3)。

表3 有無淋巴結轉移時PCDH10、Neuritin、E-鈣黏附素的表達比較Tab 3 Comparison of expressions of PCDH10,Neuritin and E-cadherin with or without lymph node metastasis %)

3 討論

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率、患病率居腫瘤疾病第三位和第二位[9]，在其發(fā)展過程中，癌細胞的不斷浸潤生長及上皮間質轉化是影響疾病預后的重要環(huán)節(jié)。早期患者可無明顯癥狀或僅有上腹部不適，易被忽視，發(fā)現(xiàn)時已多處于中晚期，故發(fā)現(xiàn)及篩查早期胃癌患者對后續(xù)腫瘤治療及預后具有重要意義。崔金朵等[10]研究表明，腫瘤浸潤深度、脈管累及和分化類型是早期胃癌患者淋巴結轉移的獨立危險因素，對于淋巴結轉移高風險患者應密切隨訪，必要時及時追加外科手術。

洪蓮蓮等[11]研究發(fā)現(xiàn)，PCDH10在胃癌組織中表達下調，與腫瘤發(fā)生進展及患者預后相關。田浩等[12]研究表明，PCDH10在胃癌組織中低表達，并與腫瘤TNM分期、有無淋巴結轉移有關，且PCDH10可影響腫瘤信號通路的激活，抑制癌基因的活性，并能穩(wěn)定腫瘤細胞的周期，抑制腫瘤的發(fā)生及進展；林瑩等[13]研究也表明，PCDH10高表達時，其TNM分期多較早，預后也較好。本研究顯示，癌旁組織PCDH10表達高于胃癌組織，說明PCDH10能夠作為檢測胃癌的指標之一；而Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者PCDH10表達低于Ⅰ～Ⅱ期，說明PCDH10表達與疾病的進展嚴重程度有關。蔡云鵬等[14]研究表明，Neuritin蛋白在腦損傷組織中表達明顯增高，提示其可能在腦損傷后修復中起著重要作用；而張建慶等[15]研究表明，Neuritin可能作為非小細胞肺癌(NSCLC)潛在的生物標志物，在NSCLC的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定的生物學功能；童瑩等[16]研究發(fā)現(xiàn)，Neuritin蛋白在NSCLC及其癌旁組織中均有表達，但在腫瘤組織中呈高表達狀態(tài)，并且與其分化程度、大小、基因突變等均有關，進而說明其表達水平與NSCLC的發(fā)生發(fā)展有關。Neuritin的高表達可能通過Notch信號通路進而激活胃癌細胞的增殖，但其是否能通過Notch信號通路切實影響胃癌的侵襲和轉移，還需進一步研究[17]。本研究顯示，癌旁組織Neuritin表達較低，與胃癌組織的表達相比其差異有統(tǒng)計學意義，說明Neuritin表達水平與不同組織有關，并且Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者Neuritin表達高于Ⅰ～Ⅱ期，說明Neuritin表達與腫瘤TNM分期成正比，即病癥越嚴重，分級越晚，其表達越高；此外，我們也發(fā)現(xiàn)有淋巴結轉移者Neuritin表達高于無淋巴結轉移者，說明Neuritin的表達與淋巴結轉移亦呈正相關。E-鈣黏附素是鈣黏附素家族中的一員。近年來對它的研究顯示：其在多種癌細胞及癌組織中表達下降，但在胃癌中呈高表達[18-19]。本研究顯示：胃癌組織E-鈣黏附素表達高于癌旁組織，即癌旁組織低表達，提示其表達水平能夠作為檢測胃癌的指標。Bure等[20]研究表明，E-鈣黏附素參與多種致癌信號途徑，如Wnt/β-catenin、Rho-GTPase和EGF/EGFR，從而于包括胃癌在內的許多腫瘤中發(fā)揮作用；Chen等[21]研究表明，原鈣黏蛋白7可作為胃癌診斷和預后的新生物標志物。此外，我們還發(fā)現(xiàn)Ⅲ～Ⅳ期胃癌者E-鈣黏附素表達高于Ⅰ～Ⅱ期，說明E-鈣黏附素表達與疾病的嚴重程度呈正相關；有淋巴結轉移患者E-鈣黏附素表達高于無淋巴結轉移者，表明其表達高低程度與胃癌的浸潤轉移也呈正相關。因此可證實降低E-鈣黏附素的表達能夠降低腫瘤轉移的發(fā)生率[22]，與本研究結果一致。

綜上所述，Neuritin、E-鈣黏附素在胃癌組織中高表達，而PCDH10低表達，其能夠作為判斷胃癌生物學行為的重要指標；將三者聯(lián)合起來檢測，可為臨床上提高胃癌患者篩查及評估腫瘤的進展程度、判斷預后提供一個新的手段。