鴨疫里默氏桿菌研究進(jìn)展

張自軍 李書(shū)光

摘? 要：我國(guó)是水禽養(yǎng)殖量及相關(guān)產(chǎn)品消費(fèi)的第一大國(guó)。鴨疫里默氏桿菌是水禽的一種重要細(xì)菌性病原，主要導(dǎo)致10～50日齡的雛鴨發(fā)病，給水禽的健康養(yǎng)殖帶來(lái)了較大的經(jīng)濟(jì)損失。本文針對(duì)該病原的流行病學(xué)、病原學(xué)、耐藥性及當(dāng)前的疫苗研究工作進(jìn)行了概述，期望對(duì)鴨疫里默氏桿菌的科學(xué)用藥、新型疫苗研發(fā)和疾病的綜合防控提供一定的理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：鴨疫里默氏桿菌;流行病學(xué);耐藥性;疫苗研究

中圖分類(lèi)號(hào)：S858.32? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? 文章編號(hào)：1673-1085（2021）4-0045-04

鴨漿膜炎的病原是鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer，RA），2～8周齡的雛鴨感染后呈急性或慢性經(jīng)過(guò)，其中14～21日齡的雛鴨最易感;同時(shí)該病原也能夠?qū)е蛮Z、火雞和其他禽類(lèi)發(fā)病。雛鴨感染后常因無(wú)有效的治療方案，造成大量的死亡，即使耐過(guò)，雛鴨也會(huì)造成生長(zhǎng)緩慢，飼料報(bào)酬率低，是水禽養(yǎng)殖行業(yè)重大經(jīng)濟(jì)損失的主要原因之一，嚴(yán)重影響了養(yǎng)鴨業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益[1]。

鴨疫里默氏桿菌極易產(chǎn)生耐藥性，除自身的固有耐藥外，臨床上大量抗菌藥物的使用都加劇了耐藥菌株的產(chǎn)生。鴨疫里默氏桿菌血清型共有20多種，在全國(guó)各地分布廣泛，現(xiàn)有的商品化滅活疫苗，無(wú)法提供不同血清型菌株的交叉保護(hù);Jiechi Zou等[2]使用同源重組方法缺失M949_1603基因（O抗原合成相關(guān)）構(gòu)建的鴨疫里默氏桿菌菌株，毒力下降約50倍，制備的滅活疫苗能夠?qū)Χ鄠€(gè)血清型的野毒株起到交叉保護(hù)作用，證實(shí)不同血清型間存在共同抗原蛋白。近年發(fā)展起來(lái)的新型反向疫苗學(xué)技術(shù)從病原的全基因組入手，使用計(jì)算機(jī)分析全基因組的開(kāi)放閱讀框，并進(jìn)行蛋白的定位預(yù)測(cè)，分析定位表面蛋白的開(kāi)放閱讀框及細(xì)菌毒力相關(guān)的閱讀框，對(duì)篩選的目標(biāo)開(kāi)放閱讀框進(jìn)行高通量表達(dá)和純化，并測(cè)試其抗原性，有針對(duì)性地進(jìn)行篩選，能夠克服傳統(tǒng)疫苗學(xué)方法不能解決的問(wèn)題，為疫苗抗原的篩選提供了技術(shù)支持，極大提高了疫苗研制效率[3]。

1? 流行病學(xué)

鴨疫里默氏桿菌是引起雛鴨、鵝、火雞和其它禽類(lèi)感染全身性漿膜炎的病原體，屬于黃桿菌科[4]。鴨疫里默氏桿菌通過(guò)傷口或者其他途徑進(jìn)入鴨體內(nèi)繁殖，并隨著血液循環(huán)到達(dá)全身器官，在體內(nèi)各器官包括鴨腦部引起炎癥，出現(xiàn)典型的氣囊炎、包心包肝癥狀和腦膜炎癥狀。鴨漿膜炎的發(fā)生沒(méi)有明顯的季節(jié)性，通風(fēng)不暢、育雛密度過(guò)大、營(yíng)養(yǎng)不均衡和其他的應(yīng)激因素都可能是本病發(fā)生的誘因。鴨疫里默氏桿菌對(duì)環(huán)境具有一定的耐受性，可伴隨塵土、飼料、飲水等因素接觸易感雛鴨，發(fā)病鴨成為新的傳染源后，大量病原的存在會(huì)導(dǎo)致該病原的高感染率和死亡率。國(guó)內(nèi)自1975年在廣州地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)，其后福建、北京、四川、江蘇、湖北、廣西、山東、河南、河北等地區(qū)陸續(xù)報(bào)道該病的發(fā)生，成為影響我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展的重要細(xì)菌性疾病。

2? 病原學(xué)

鴨疫里默氏桿菌是一種革蘭氏陰性菌，短桿狀、近球形，偶見(jiàn)個(gè)別長(zhǎng)絲狀，有莢膜、無(wú)鞭毛，菌體大小約0.4 μm×1.5 μm[5]。該菌生長(zhǎng)對(duì)培養(yǎng)基要求較高，建議使用加血清的胰酶大豆瓊脂（TSA）進(jìn)行培養(yǎng)，在血液瓊脂、巧克力瓊脂也能生長(zhǎng)，大部分病原初次分離需要在蠟燭罐或者二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行，培養(yǎng)24 h或者時(shí)間更長(zhǎng)一些，能夠觀(guān)察到透明、圓形、邊緣光滑整齊，直徑在1 mm以下的小菌落，該菌落具有藍(lán)綠光芒。鴨疫里默氏桿菌血清型在全國(guó)各地分布廣泛，同一養(yǎng)殖場(chǎng)同批鴨苗中也會(huì)存在多種血清型，這主要是由于鴨疫里默氏桿菌眾多血清型所導(dǎo)致的。目前已知有25種鴨疫里默氏桿菌血清型，國(guó)際上報(bào)道的血清型為1～21型，我國(guó)學(xué)者程安春[6]報(bào)道的22～25型為國(guó)內(nèi)新發(fā)血清型[7]。1987年高福等[8]對(duì)臨床分離的鴨疫里默氏桿菌進(jìn)行分型檢測(cè)，所有菌株均為1型鴨疫里默氏桿菌。1997年張大丙等[9]發(fā)現(xiàn)鴨疫里默氏桿菌血清2、6、10、11、13、14及未知的血清型，其后汪銘書(shū)等[10-12]鑒定到3、4、5、8型，隨后張大丙等[13， 14]又鑒定了鴨疫里默氏桿菌血清7和15型，蘇文良等[15]分離鑒定了血清9型鴨疫里默氏桿菌。目前，在我國(guó)分離到的所有鴨疫里默氏桿菌中，優(yōu)勢(shì)血清型為1、2、10型。

3? 耐藥性

鴨疫里默氏桿菌極易產(chǎn)生耐藥性，且菌體自身還存在著固有耐藥，外加臨床上大量抗菌藥物的使用都加劇了鴨疫里默氏桿菌對(duì)于抗生素的耐藥性[16]。治療鴨疫里默氏桿菌病的常用藥物包括抗菌素、抗菌中藥[17];其中抗菌素包括氟苯尼考、卡那霉素、恩諾沙星、慶大霉素、硫酸鏈霉素等[18];抗菌中藥常用的是大黃、黃連、板藍(lán)根、蒲公英、石榴皮等。生產(chǎn)一線(xiàn)中，鴨疫里默氏桿菌的耐藥譜常常非常廣，達(dá)到20種藥物，常常無(wú)藥可用[19];使用PCR方法擴(kuò)增貴州臨床分離株中的6種抗藥基因，與藥敏試驗(yàn)表型結(jié)果耐藥性在80%以上相符[20]?？咕兴幍念A(yù)防效果不錯(cuò)，但是停藥后仍然會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)的情況，而且使用成本高。隨著社會(huì)對(duì)食品安全的要求越來(lái)越高、國(guó)家無(wú)抗養(yǎng)殖政策的推進(jìn)等因素，疫苗免疫在鴨疫里默氏桿菌病的防治過(guò)程中發(fā)揮的作用越來(lái)越重要[21]。

4? 疫苗研究

預(yù)防鴨疫里默氏桿菌最有效的方法是定期進(jìn)行免疫接種，通過(guò)提高鴨群自身的免疫功能，達(dá)到科學(xué)預(yù)防漿膜炎的發(fā)生[22]。種鴨免疫疫苗后，一是提高母源抗體滴度延長(zhǎng)對(duì)雛鴨的保護(hù)期;二是種鴨免疫后減少自身帶菌量，降低垂直傳播的概率。雛鴨免疫疫苗后，激發(fā)自身的主動(dòng)免疫系統(tǒng)，配合保健藥物，能夠有效降低在應(yīng)激等條件下激發(fā)的漿膜炎癥狀和死亡率。目前，商品化的鴨疫里默氏桿菌疫苗有滅活苗和弱毒活疫苗，在漿膜炎的防控中發(fā)揮了較大的作用;但是由于該病原的血清型較多，存在疫苗株和區(qū)域流行株不一致的情況時(shí)，疫苗免疫效果不好。其中滅活疫苗的優(yōu)勢(shì)在于不散毒、安全性好，且便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸[23];滅活疫苗的劣勢(shì)在于無(wú)法將內(nèi)源性保護(hù)蛋白遞呈給免疫系統(tǒng)，無(wú)法激發(fā)有效的細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng)，同時(shí)滅活疫苗需要多次免疫強(qiáng)化，增加了一定的勞動(dòng)量。在活疫苗研究方面，國(guó)外研究學(xué)者在環(huán)境中篩選到了鴨疫里默氏桿菌1、2、5型自然弱毒株，制備成三價(jià)活疫苗，通過(guò)飲水或者氣霧免疫鴨群后能夠起到較好的保護(hù)效果，飼料中添加的金霉素或磺胺二甲氧嘧啶也不會(huì)影響疫苗的效果[24]。稅蕓和王小蘭[25-27]分別構(gòu)建鐵離子代謝和PncA基因缺失弱毒疫苗株，毒力分別下降了約1萬(wàn)倍和49萬(wàn)倍，并對(duì)自身血清型強(qiáng)毒株起到了良好的保護(hù)效果。與油乳劑滅活苗相比，活疫苗的應(yīng)用，能夠有效激發(fā)粘膜免疫、體液免疫和細(xì)胞免疫，配合有效的佐劑，能夠?qū)喨禾峁┤娴谋Ｗo(hù);同時(shí)，活疫苗通過(guò)氣霧或者飲水免疫方式，能夠節(jié)約勞動(dòng)力，減少動(dòng)物應(yīng)激，提高生長(zhǎng)速度和胴體品質(zhì)?；钜呙巛^之滅活苗有諸多的優(yōu)勢(shì)，但是存在散毒和潛在感染的風(fēng)險(xiǎn)。基因工程亞單位疫苗，是通過(guò)人工的方式表達(dá)具有免疫原性的蛋白抗原[28]，該疫苗可以降低鴨疫里默氏桿菌免疫后的副反應(yīng)問(wèn)題;另一方面通過(guò)篩選不同血清型的內(nèi)在共有抗原制備疫苗，為不同血清型的病原提供交叉保護(hù)。針對(duì)莢膜抗原、外膜蛋白開(kāi)展了較多的研究，部分研究取得了理想的保護(hù)效果[29-31];余波等[32]針對(duì)外膜蛋白o(hù)mpA開(kāi)展真核表達(dá)載體的構(gòu)建及免疫原性研究，對(duì)雛鴨的保護(hù)率達(dá)到了100%;帕提古麗等[33]也開(kāi)展了外膜脂蛋白R(shí)IEAN110的原核表達(dá)和免疫原性研究，證實(shí)其具有良好的免疫原性;蘇敬良[34]和呂敏娜[35]分別開(kāi)展了莢膜抗原的提取和免疫原性研究，對(duì)同血清型病原的攻毒保護(hù)率均達(dá)到了80%。

參考文獻(xiàn)：

[1]? Tao Z，Zhu C，Xu W， et al.Riemerella anatipestifer infection affects intestinal barrier structure and immune reactions in the duck caecum.[J]. Avian pathology ： journal of the W.V.P.A， 2020.

[2]? Zou Jiechi，Wang Xiaolan，Ding Chan，et al.Characterization and cross-protection evaluation of M949_1603 gene deletion Riemerella anatipestifer mutant RA-M1[J].Applied Microbiology and Biotechnology，2015，99（23）：10107-16.

[3]? 顏艷.鴨疫里默氏桿菌外膜蛋白的蛋白質(zhì)組學(xué)分析及其免疫保護(hù)性研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2009.

[4]? 許英民.幼鵝感染鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].家禽科學(xué)，2020（04）：45-47.

[5]? 陳國(guó)權(quán)，吳征卓，姚碧瓊，等. 兩株鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定及生物學(xué)特性分析[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2020，42（12）：1226-1232.

[6]? 程安春，汪銘書(shū)，陳孝躍，等.我國(guó)鴨疫里默氏桿菌血清型調(diào)查及新血清型的發(fā)現(xiàn)和病原特性[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2003（04）：320-323.

[7]? 崔文玉.山東省濰坊市鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定和單因子血清制備[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2020.

[8]? 高福，郭玉璞.小鴨傳染性漿膜炎疫苗的研究—Ⅰ、鴨疫巴氏桿菌的血清型鑒定[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志， 1987（04）：47-48.

[9]? 張大丙，郭玉璞，任艷麗.鴨疫里氏桿菌的血清型[J]. 中國(guó)獸醫(yī)雜志，1998（06）：44-46.

[10]? 汪銘書(shū)，程安春，陳孝躍等.血清3型鴨疫里默氏桿菌在我國(guó)的發(fā)現(xiàn)及其病原特性研究[J].中國(guó)家禽，2001（22）：12-15.

[11]? 汪銘書(shū)，程安春，陳孝躍等.血清4型鴨疫里默氏桿菌在我國(guó)的發(fā)現(xiàn)及其病原特性研究[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2002（12）：5-9.

[12]? 汪銘書(shū)，程安春，陳孝躍等.鴨疫里默氏桿菌血清7型的病原特性[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2003（03）：222-225.

[13]? 張大丙，郭玉璞.15型鴨疫里氏桿菌分離株的鑒定[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2002（03）：23.

[14]? 張大丙，郭玉璞.7型鴨疫里氏桿菌分離株的鑒定[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2003（05）：18-19.

[15]? 蘇文良， 郭玉璞. 鴨疫里默氏菌9型的分離與鑒定[J]. 中國(guó)獸醫(yī)雜志， 2006（07）：34.

[16]? Dekang Z， Mingyu Z， Jinge X， et al. Prevalence of fluoroquinolone resistance and mutations in the gyr A， par C and par E genes of Riemerella anatipestifer isolated from ducks in China[J]. BMC microbiology， 2019，19（3）.

[17]? 蔣永嘉，肖霞，江禮捷，等. 氟苯尼考對(duì)鴨疫里默氏桿菌在鴨中的體內(nèi)藥動(dòng)藥效同步模型研究[C]//中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì).中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集.蘭州：中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)，2019.

[18]? 左春生，李迎曉，徐光科，等.14株鴨疫里默氏桿菌的部分生物學(xué)特性分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，48（15）：221-225.

[19]? 包濤濤，鮮思美，包細(xì)明，等.六株鴨疫里默氏桿菌貴州株的分離鑒定及其耐藥性分析[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)， 2020，50（10）：1278-1285.

[20]? 陳國(guó)權(quán)，吳征卓，姚碧瓊， 等.鴨疫里默氏桿菌貴州流行株的分離鑒定及耐藥性分析[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)， 2020，50（06）：731-739.

[21]? 劉玲俐，趙亞楠，靳亞潔，等.鴨疫里默氏桿菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2020：1-6.

[22]? 孔桂慧，王方昆，孫淑紅，等.一株鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定及其免疫原性研究[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2020，42（05）：451-456.

[23]? 呂文君.不同滅活方法對(duì)鴨疫里默氏桿菌免疫原性的影響[D].重慶：西南大學(xué)， 2020.

[24]? 陳國(guó)權(quán)，丁尊俄，劉麗娟，等.鴨疫里默氏桿菌疫苗研究進(jìn)展[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2019，43（03）：10-15.

[25]? 王小蘭.鴨疫里默氏桿菌煙酰胺酶基因的鑒定及功能研究[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院， 2018.

[26]? 王小蘭.鴨疫里默氏桿菌毒力基因的鑒定及功能分析[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院， 2015.

[27]? 稅蕓.鴨疫里默氏桿菌CH-1株B739_1343基因缺失株的構(gòu)建及免疫保護(hù)效果評(píng)價(jià)[D]. 成都：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2017.

[28]? 劉兆宇.鴨疫里默氏桿菌不同血清型的外膜蛋白特性比較及免疫原性的研究[D]. 成都：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2002.

[29]? Wu H， Chang W， Wu M， et al. Assessment of immunization regimens of duck Riemerella anatipestifer vaccines.[J]. Journal of applied microbiology， 2020.

[30]? Shifa Y， Wenwen D， Guiming L， et al. A recombinant vaccine of Riemerella anatipestifer OmpA fused with duck IgY Fc and Schisandra chinensis polysaccharide adjuvant enhance protective immune response[J].Microbial pathogenesis， 2019，136.

[31]? 徐盼.鴨疫里默氏桿菌OmpA蛋白的免疫原性研究[D].成都：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2014.

[32]? 余波，李婷，徐景峨，等.鴨疫里氏桿菌OmpA基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及免疫效果初步評(píng)價(jià)[J]. 畜牧與獸醫(yī)， 2021，53（03）：84-88.

[33]? 帕提古麗吾馬爾，郭東春，張愛(ài)芹，等.鴨疫里氏桿菌外膜脂蛋白的表達(dá)及其免疫原性的分析[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2013：43（06）

[34]? 蘇敬良，郭玉璞，呂艷麗. 鴨疫里默氏桿菌免疫原性研究Ⅱ.莢膜提取物免疫原性測(cè)定[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志， 1998（08）：3-5.

[35]? 呂敏娜，黃承鋒，張玉團(tuán)等. 鴨傳染性漿膜炎莢膜多糖苗研究初報(bào)[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技， 1999（03）：16-18.