關于HPLC法測定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中N-甲基莫西沙星含量的研究

谷開保 宋小桂 張小軍

揚子江藥業(yè)集團江蘇海慈生物藥業(yè)有限公司 江蘇 泰州 225300

引言

莫西沙星為藥物鹽酸莫西沙星注射液的重要成分。其屬于一種新式8-甲氧基喹諾酮類制劑。其有著相當強的抗菌活性，有著良好的抗菌譜。莫西沙星具有相當好的藥動力特點以及安全度，吸收滿意。生物利用度為90.00%[1]，血漿蛋白結(jié)合率達到了50.00%[2]，有著比較好的組織穿透性。為了全面分析HPLC法測定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中N-甲基莫西沙星含量，本文對上述命題進行全面分析，現(xiàn)匯報如下。

1 基線資料

實驗使用日本島津公司生產(chǎn)的LC-20A型高效液相色譜設備；電子天平；pH計；莫西沙星對照品（純度水平96.1%，歐洲藥典委員會）；雜質(zhì)1（純度99.9%）、雜質(zhì)2（96.4%）、雜質(zhì)3（99.6%）、雜質(zhì)4（95.6%）、雜質(zhì)5（99.9%），上述物質(zhì)提供廠家為蘇州朗科生物技術有限公司。鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液生產(chǎn)廠家為揚子江藥業(yè)江蘇海慈生物藥業(yè)有限公司，國藥準字H20193112。

甲醇色譜純，實驗用水為純化水，其他試劑則為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件

實驗選擇G e m i n i—N X C 1 8為色譜柱，條件為(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為濃度1.0%三乙胺溶液（磷酸調(diào)節(jié)為PH2.5）:甲醇（7:3）。柱溫為40℃；波長為293nm；進樣量設定為10μL，流量設定為1.0ml/min。

2.2 溶液制備方法

2.2.1 空白輔料溶液。依照既定處方，配置好內(nèi)部不存在鹽酸莫西沙星溶液，滅菌處理獲得。

2.2.2 專屬性試驗溶液。擇取對照品藥物、雜質(zhì)1-5、N-甲基莫西沙星適量。加入溶劑（水500ml、磷酸1ml、0.05g無水亞硫酸鈉，加水稀釋到1000ml）。制作為莫西沙星1.0mg/ml的溶液。雜質(zhì)1-5、N-甲基莫西沙星分別為1.0μg混合性溶液。

2.2.3 適用性試驗溶液。擇取適當N-甲基莫西沙星以及對照品藥物適當，依照專屬性試驗溶液制備方法制作溶劑，將其溶解成1ml內(nèi)含有0.8mg莫西沙星、0.8μgN-甲基莫西沙星混合溶液。

2.2.4 對照品溶液。取用適當N-甲基莫西沙星，加入項目（2）內(nèi)的溶劑，制作0.8μg/ml的N-甲基莫西沙星混合溶液。

2.2.5 供試品。取用適當供試品，依照既定方式流動相制作為0.8mg/ml莫西沙星的溶液。

2.3 適用性試驗

取用適當適用性溶液，進樣共計6次，全面記錄色譜圖。所取得的N-甲基莫西沙星和莫西沙星的分離度在2.0以上；而拖尾因子在2.0以下；關于理論板的莫西沙星峰計均情況完全符合規(guī)定。N-甲基莫西沙星峰面積RSD值0.63%，其保留時間RSD0.17%。

2.4 專屬實驗

取用空白的輔料溶液、專屬溶液，進樣處理，全面記錄色譜圖。保證空白的輔料溶液不存在干擾。N-甲基莫西沙星和相關成分的色譜峰分離度符合要求。

2.5 定量限以及檢測限

選擇濃度既定的N-甲基莫西沙星溶液稀釋處理。測定空白位置信號，加以對比。如果信噪比的S／N在10以上，并且進樣6次之后密度RSD在5.0%以上后，將其視為定量限，把其稀釋處理3倍之后確定好檢測限。詳細結(jié)果為：N-甲基莫西沙星的具體檢測限為0.0510μg/ml，定量限為0.1527μg/ml。

2.6 線性范圍

選擇適當N-甲基莫西沙星。加入項目2.1中的（2）項溶劑制作方案，溶解制作濃度為0.103～1.527μg/ml的N-甲基莫西沙星，進樣后記錄好色譜圖。本實驗中，縱坐標為峰面積、橫坐標為濃度水平，繪制曲線。取得N-甲基莫西沙星回歸方程為A=53074C+464.92（r=0.9989）。

詳細實驗結(jié)果為：當N-甲基莫西沙星于0.103～1.527μg/ml范圍中，濃度水平和峰面積線性關系良好。

2.7 加樣回收實驗詳細結(jié)果

取用適當供試品，一共9份。依照限度水平的120.0%、100.0%以及80.0%幾個濃度水平加入N-甲基莫西沙星溶液內(nèi)，完成測定工作。計算出N-甲基莫西沙星詳細回收率情況，具體結(jié)果參照表1。

續(xù)表

在表內(nèi)我們能夠看出，N-甲基莫西沙星回收率均值為94.24%。RSD水平2.51%。這種方式精準度滿意。

2.8 重復性實驗

選擇6份相同的供試品。精密性稱量，加入到N-甲基莫西沙星溶液之內(nèi)。依照項目2.1條件中的（2）項目制作成溶劑，0.8mg/ml西莫沙星以及0.8μg/ml的N-甲基莫西沙星混合液?；旌暇鶆?。將其視為供試品溶液。分別選擇供試品溶液按照上述方式進樣處理，記錄好色譜圖資料，分析并計算出溶液內(nèi)雜質(zhì)水平。具體檢測結(jié)果為：溶液中的N-甲基莫西沙星含量水平為0.13%，而RSD則為1.59%。代表該方法有著滿意的重復性。

2.9 耐用性實驗

2.9.1 依照2.1中項目（3）的方法，制作出藥物供試品。于避光以及室溫環(huán)境下放置處理，時間為12h。

于0.0h、2.0h、4.0h、6.0h、8.0h、12.0h取樣，開展檢驗工作。相關實驗結(jié)果證實：在既定時間中，N-甲基莫西沙星均值達到了9509，RSD則為1.61%。代表溶液有著良好的穩(wěn)定性。

2.9.2 色譜條件參數(shù)改變情況。變更柱溫，范圍為±5℃、流動相pH值±0.2、流動相為±0.1ml/min、各類品牌的色譜柱等等參數(shù)。全面評價N-甲基莫西沙星含量水平影像情況，證實當以上參數(shù)發(fā)生輕微變化后，對于N-甲基莫西沙星水平測定影響不顯著，代表該法的耐用性滿意。

2.1 0 關于樣品測定

針對于共計3批次鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液實施測定，結(jié)果證實：樣本內(nèi)的N-甲基莫西沙星含量水平為0.03%。

3 討論

高效液相色譜法（HPLC）也被稱之為“高分離度液相色譜”、“高壓液相色譜”之稱。該法屬于總色譜法重要分支[3]。流動項為液體，經(jīng)高壓力輸液體系，把各類極性單一溶劑/各個比例混合溶劑、緩沖液體等泵入到帶有固定相色譜柱之內(nèi)。當內(nèi)部的相關成分被全面分離之后，完成檢測工作，利用這種方式分析試樣情況?，F(xiàn)如今，高效液相色譜法已經(jīng)在諸多領域內(nèi)得以應用。

結(jié)合鹽酸莫西沙星藥物的雜質(zhì)譜解析情況，不難發(fā)現(xiàn)，在其內(nèi)部存在很多雜質(zhì)以及N-甲基莫西沙星。但值得說明的是，揚子江藥業(yè)江蘇海慈生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品內(nèi)僅僅包含N-甲基莫西沙星物質(zhì)?；谶@種情況，為了在根本上確保藥物的質(zhì)量水平，相關工作人員有必要對于注射液內(nèi)的N-甲基莫西沙物質(zhì)水平加以控制。