拔毒生肌散中紅粉、輕粉的測(cè)定

李 莉夏 晶彭韋楠曹 帥李麗敏季 申*

（1.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院，上海 201203；2.上海市食品藥品檢驗(yàn)所，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中藥質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201203）

拔毒生肌散來(lái)源于清代名醫(yī)趙廷海秘制傷藥方，由紅粉、黃丹、輕粉、煅石膏等8 味藥材組成，臨床上用于治療久潰不愈的瘡、瘍、癰，能有效改善傷口愈合情況，減少傷口愈后瘢痕攣縮，尤其在糖尿病足上具有良好的效果［1-4]。依據(jù)本草考證結(jié)果，拔毒生肌散中君藥紅粉是水銀、硝石、白礬或水銀和硝酸煉制而成的紅氧化汞（HgO），具有拔毒排膿、去腐生肌的功效，但有大毒；臣藥輕粉是升華法煉制而成的氯化亞汞（Hg2Cl2），可攻毒斂瘡，加強(qiáng)君藥去腐的功效，但也有毒［5-10]，兩者為方中必不可少的功效物質(zhì)，但其所含有的大量汞可通過(guò)皮膚吸收反復(fù)用于局部創(chuàng)面，會(huì)引起慢性蓄積，對(duì)多種器官產(chǎn)生損傷，使用不當(dāng)可能導(dǎo)致汞急性中毒［11-15]。因此，需對(duì)制劑中紅粉、輕粉進(jìn)行科學(xué)有效的質(zhì)量控制。

拔毒生肌散現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［16]以碘量滴定法測(cè)定輕粉含量，電位滴定法測(cè)定紅粉含量，但前者數(shù)據(jù)不穩(wěn)定、重復(fù)性較差，后者數(shù)據(jù)偏高，導(dǎo)致現(xiàn)行方法無(wú)法有效控制制劑中含汞礦物藥的質(zhì)量，產(chǎn)生臨床應(yīng)用安全風(fēng)險(xiǎn)。本研究旨在建立專屬性更強(qiáng)、準(zhǔn)確度更高的含量測(cè)定方法，用于拔毒生肌散中紅粉、輕粉的質(zhì)量控制，以期保證患者用藥安全。

1 材料

1.1 儀器 S and M series 型原子吸收分光光度儀（美國(guó)Thermo 公司）；Milli-Q 超純水機(jī)（美國(guó)Millipore 公司）；電子天平（德國(guó)Sartorius 公司）；MARS 5 型微波消解儀（美國(guó)CEM 公司）；水浴鍋（美國(guó)Polyscience 公司）；渦旋儀（美國(guó)Scientific Industries 公司）。

1.2 試劑與藥物 拔毒生肌散［健民集團(tuán)葉開(kāi)泰國(guó)藥（隨州）有限公司]。汞標(biāo)準(zhǔn)溶液（HC957309，1 000 mg/L，德國(guó)Merck 公司）。硝酸、鹽酸均為分析純（德國(guó)Merck 公司）；水為去離子水（經(jīng)Milli-Q 超純水機(jī)處理）。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器工作條件 針對(duì)拔毒生肌散中汞含量高的問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)采用火焰原子吸收分光光度儀進(jìn)行檢測(cè)，具體見(jiàn)表1。

表1 儀器工作條件

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密量取汞標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，5%硝酸分別制成每1 mL 含1、2、5、10、20、50 μg 該元素的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

2.3.1 溶液1（紅粉提?。┚芊Q取散劑0.1 g，置于250 mL具蓋塑料瓶中，加入200 mL 水后密塞，渦旋2 min，40 ℃水浴加熱7 h，取出，冷卻至室溫，搖勻后取50 mL于離心管中，3 900 r/min 離心5 min，取10 mL 上清液至20 mL 量瓶中，加10%硝酸稀釋至刻度，即得（離心后應(yīng)立即取出上清液）。

2.3.2 溶液2（總汞提取）精密稱取散劑0.1 g，置于聚四氟乙烯消解罐中，加入5 mL 硝酸-鹽酸混合溶液（4∶1）后進(jìn)行消解，程序見(jiàn)表2，完成后將溶液轉(zhuǎn)移至50 mL塑料量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，離心，取1 mL 上清液于10 mL 量瓶中，5%硝酸定容至刻度，即得。同法制備空白溶液。

表2 微波消解程序

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 取對(duì)照品溶液適量，在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定。以吸光度為縱坐標(biāo)（A），溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行回歸，得方程為A=0.001 90X-0.000 7（r=0.999 7），在1～50 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。按“2.3”項(xiàng)下方法制備21 份空白溶液，火焰原子吸收分光光度法測(cè)定吸光度，以S/N=3 時(shí)的質(zhì)量濃度為檢測(cè)限，測(cè)得其數(shù)值為0.62 mg/L。

2.4.2 專屬性試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下方法制備缺紅粉、輕粉+紅粉的陰性樣品，發(fā)現(xiàn)前者中汞含量接近檢測(cè)限，而后者中低于檢測(cè)限，表明制劑中紅粉含量測(cè)定受輕粉等其他藥味的干擾較小，總汞含量測(cè)定幾乎不受影響。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液1、2，于0、20、24 h 在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定，測(cè)得紅粉中汞含量RSD 為2.3%，總汞含量RSD 為2.9%，表明溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取散劑0.09、0.10、0.11 g，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液1，在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定，測(cè)得紅粉中汞含量RSD（n=9）為2.8%；另精密稱取0.09、0.10、0.11 g，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液2，在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定，測(cè)得輕粉中汞含量RSD（n=9）為4.4%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取紅粉中汞含量已知的散劑0.05 g，分為低、中、高3 組，每組加入汞含量已知的紅粉適量，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液1，在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表3；另精密稱取總汞含量己知的散劑0.05 g，分為低、中、高3 組，每組加入汞含量已知的輕粉適量，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液2，在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 紅粉中汞加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

表4 輕粉中汞加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.5 樣品含量測(cè)定 采用上述方法對(duì)9 批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 紅粉、輕粉含量測(cè)定結(jié)果（以汞計(jì)，n=2）

3 討論

3.1 關(guān)鍵性技術(shù) 拔毒生肌散中紅粉、輕粉均為含汞礦物藥，如何實(shí)現(xiàn)兩者分離是本研究的難點(diǎn)。調(diào)研文獻(xiàn)［17-18] 結(jié)合前期研究發(fā)現(xiàn)，紅粉在低濃度酸溶液中的溶解性良好，而輕粉不溶于低濃度酸溶液，由此本實(shí)驗(yàn)創(chuàng)建了一種間接測(cè)定法用于制劑輕粉所含汞含量的測(cè)定：先準(zhǔn)確測(cè)得拔毒生肌散紅粉中汞含量，再準(zhǔn)確測(cè)定拔毒生肌散中總汞量，后者減去前者，即得。

3.2 紅粉、輕粉的差異化提取 在尋找制劑中紅粉的專屬提取溶劑時(shí)，本實(shí)驗(yàn)先選擇10% 硝酸（輕粉原料不溶），發(fā)現(xiàn)提取液中汞含量遠(yuǎn)高于拔毒生肌散中的理論量，其原因可能為方中輕粉所含的汞亦有溶出，而且輕粉原料與制劑中輕粉存在溶解性差異，嚴(yán)重干擾了紅粉的專屬提取。進(jìn)一步考察水（紅粉在20 ℃水中的溶解度為0.005%［18]）及0.1%、0.5%、1%硝酸或鹽酸對(duì)制劑中紅粉所含汞提取率的影響，發(fā)現(xiàn)除水外其余溶劑的提取率均大于100%，表明以水為提取溶劑較為可行。再對(duì)以水為溶劑的提取方式、提取溫度、提取時(shí)間等影響制劑中紅粉所含汞提取的因素進(jìn)行考察，最終確定該藥材提取方法為40 ℃水浴中溫浸7 h，既能實(shí)現(xiàn)制劑中其專屬提取，又能保證其所含的汞基本不溶出。

4 結(jié)論

紅粉、輕粉的功效和毒性均不同，故測(cè)定兩者含量對(duì)拔毒生肌散的質(zhì)量控制具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)建立了拔毒生肌散中紅粉、輕粉的差異化提取方法，采用微波消解法提取總汞，可保證兩者含量的準(zhǔn)確測(cè)定；火焰原子吸收分光光度法專屬性比滴定法更好，準(zhǔn)確度也更高，以其測(cè)定汞含量可解決現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中相關(guān)方法準(zhǔn)確度低、缺乏專屬性的問(wèn)題，能科學(xué)有效地監(jiān)控方中兩者質(zhì)量，保障其臨床安全應(yīng)用。