探討歸連胃康方治療慢性萎縮性胃炎大鼠的作用機(jī)制

李維康，王力普，翟付平，劉凱娟，郝旭蕊，白海燕

(1.河北中醫(yī)學(xué)院研究生院，河北 石家莊 050091；2.河北中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北 石家莊 050011)

0 引言

慢性萎縮性胃炎(Chronic atrophic gastritis，CAG)是消化系統(tǒng)常見病，以胃黏膜腺體萎縮或消失，或伴有幽門腺化生和腸腺化生或有不典型增生為特征的慢性消化性疾病。目前認(rèn)為及時有效的治療CAG、PLGC對降低胃癌的發(fā)生率十分重要，筆者以化濁解毒，活血通絡(luò)為治則，自擬歸連胃康方在臨床治療CAG、PLGC效果確切，今進(jìn)一步進(jìn)行動物實驗，明確其具體作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動物[1]

SPF級Wistar大 鼠60只，雌 雄 各 半，6～8周 齡，體重(180±20)g，由華中科大同濟(jì)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心 (合格證號為SCXR(鄂)2004～0007)提供。

1.2 實驗藥品[2]

歸連胃康方：當(dāng)歸12g、黃連6g、連翹20g、藿香12g、佩蘭12g、川芎9g、莪術(shù)6g、三七粉2g、郁金12g、八月札20g、敗醬草12g、白花蛇舌草20g、蒲公英20g、藤梨根20g、茯苓20g，由廣州一方藥業(yè)提供免煎顆粒。胃復(fù)春片(由紅參，香茶菜、枳殼等組成，國藥準(zhǔn)字Z20040003杭州胡慶余堂藥廠出品)，0.359g/片。

1.3 實驗試劑

N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍(MNNG，日本TCI公司)；鹽酸雷尼替丁膠囊：(石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，規(guī)格：0.15g×30粒，批號：331131001)；水楊酸鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：30169317)；ELISA試劑盒(北京博奧森生物技術(shù)公司)。

2 方法

2.1 動物造模

采用隨機(jī)數(shù)字表法，將60只大鼠隨機(jī)分為空白對照組(n=10)和造模組，查閱相關(guān)文獻(xiàn)[3-4]，空白對照組每天予等體積蒸餾水灌胃，正常飼養(yǎng)；造模組采用綜合造模方法，具體如下：①將N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基(MNNG)溶于蒸餾水中配制成濃度為1g/L的溶液，存放于4℃冰箱備用，每周制備1次，使用時將其稀釋成120μg/m L的溶液，置于黑色飲水瓶中，供大鼠自由飲用，每天更換1次，持續(xù)3個月。②鹽酸雷尼替丁膠囊，每天0.03g /kg灌胃，每日1次，不間斷喂養(yǎng)3個月。③2天足量喂食，1天禁食，饑飽交替持續(xù)喂養(yǎng)3個月。

2.2 分組及給藥

根據(jù)《中國慢性胃炎共識意見》和《慢性胃炎及上皮性腫瘤胃黏膜活檢病理斷共識》[5-6]，造模中死亡10只，剩余40只CAG大鼠，隨機(jī)分為4組，每組各10只，模型組予等體積蒸餾水灌胃，正常飼養(yǎng)；胃復(fù)春組予0.72g/kg.d胃復(fù)春溶液灌胃；歸連胃康大劑量組予30g/kg.d中藥溶液灌胃；歸連胃康小劑量組予10g/kg.d中藥溶液灌胃，每組均持續(xù)進(jìn)行灌胃12周，除藥物不同外，其余飲食均無差異。

2.3 取材

各組大鼠在給予對應(yīng)治療方案12周后，禁食16小時，不禁水，乙醚麻醉后，在腹主動脈處抽取血液標(biāo)本，放置離心機(jī)，離心10min后，抽取上層血清，-80℃保存，完成后將大鼠固定，沿腹正中線切開，取胃，沿胃大彎切開，清洗后觀察胃黏膜表面情況，取胃組織標(biāo)本，放入10%福爾馬林溶液中，石蠟包埋，切片，HE染色觀察病理學(xué)改變。

2.4 觀察指標(biāo)

觀察各組大鼠實驗期間一般生理狀況；采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，按照試劑盒操作說明對IL-1、TNF-α、COX-2、PGE2進(jìn)行檢測。

2.5 統(tǒng)計方法

3 結(jié)果

3.1 一般觀察

空白對照組大鼠毛色色澤鮮明，反應(yīng)靈敏，體重增加，活動及進(jìn)食可，大便正常；模型組大鼠毛色發(fā)暗，稀疏，逐漸枯槁，體重進(jìn)行性減輕，反應(yīng)遲鈍，大便偏?。桓髦委熃M大鼠在接受治療6周后均出現(xiàn)毛色逐漸鮮明，進(jìn)食增加，活動靈活，反應(yīng)靈敏，大便逐漸改善，其中以歸連胃康大劑量組大鼠恢復(fù)最快，改善最明顯。

3.2 鏡下觀察

空白對照組大鼠胃黏膜表面光滑，腺腔結(jié)構(gòu)完整，胃體及胃竇無或極少炎細(xì)胞浸潤；模型組大鼠胃黏膜變薄，表面粗糙，呈粗顆粒狀，腺上皮細(xì)胞受損，腺腔結(jié)構(gòu)萎縮消失，炎細(xì)胞浸潤黏膜全層，部分可見腸上皮化生及不典型增生杯狀細(xì)胞；歸連胃康大劑量組大鼠胃黏膜表面相對光滑，腺體結(jié)構(gòu)基本完整，細(xì)胞形態(tài)均一，有少量炎細(xì)胞浸潤；胃復(fù)春組大鼠胃黏膜局部變薄，表面粗糙，呈細(xì)顆粒狀，黏膜淺層有炎細(xì)胞浸潤，腺上皮、腺管分界稍模糊；歸連胃康小劑量組大鼠胃黏膜厚度變薄，腺上皮細(xì)胞脫落，腺上皮、腺管分界不清，有大量炎細(xì)胞浸潤，少數(shù)可見腸上皮化生及不典型增生杯狀細(xì)胞。

3.3 各 組 大 鼠IL-1(pg/mL)、TNF-α(pg/mL)、COX-2(ng/mL)、PGE2(ng/mL)血清表達(dá)水平(`X±S)

見表1。

表1 各組大鼠IL-1(pg/mL)、TNF-α(pg/mL)、COX-2(ng/mL)、PGE2(ng/mL)血清表達(dá)水平

表1 各組大鼠IL-1(pg/mL)、TNF-α(pg/mL)、COX-2(ng/mL)、PGE2(ng/mL)血清表達(dá)水平

注：與空白對照組相比，*P＜0.05；與模型組相比，#P＜0.05；與胃復(fù)春組相比，△P＜0.05；與胃復(fù)春組相比，▲P＞0.05。

分組 n IL-1 TNF-α COX-2(ng/mL) PGE2(ng/mL)空白對照組 10 52.34±4.53 41.09±3.05 118.26±10.29 19.53±2.18模型組 10 125.63±9.78 98.92±7.68 40.58±3.05 15.61±2.07胃復(fù)春組 10 73.98±5.23*# 77.36±5.69*# 82.23±4.67*# 17.29±1.49*#歸連胃康大劑量組 10 62.04±5.06*#△ 50.24±4.31*#△ 98.63±6.67*#△ 19.91±2.31*#△歸連胃康小劑量組 10 82.71±6.39*#▲ 88.07±5.23*#▲ 70.28±8.34*#▲ 18.83±2.73*#▲

4 討論

IL-1是強(qiáng)效抑酸劑，能促進(jìn)白細(xì)胞黏附分子表達(dá)，趨化中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞在胃腸道病變部位分泌聚集，從而損傷胃黏膜，加重萎縮；TNF-α能活化單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞而提高其殺傷活性，也能增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞輔助性T細(xì)胞及腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性加重對胃黏膜細(xì)胞的損害[7-8]；COX-2能夠催化細(xì)胞膜釋放的花生四烯酸，產(chǎn)生一系列炎癥遞質(zhì)，損傷微血管內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致胃黏膜微循環(huán)障礙，終至胃黏膜腺體萎縮；PGE2能夠促進(jìn)胃黏液的生成與分泌，保護(hù)胃黏膜微循環(huán)結(jié)構(gòu)的完整，維持胃黏膜的血液供應(yīng)[9]。

歸連胃康方從化濁解毒、活血化瘀立論在臨床治療中取得顯著療效，方中藿香味辛，性溫，歸脾、胃、肺經(jīng)，能化濕醒脾，辟穢和中，通過振奮脾胃之氣來達(dá)到祛濕化濁的效果，佩蘭，辛、平，歸脾、胃、肺經(jīng)，《本草綱目》指出：“蘭草，氣香而溫，味辛而散，……，足太陰、厥陰經(jīng)藥也。脾喜芳香，肝宜辛散，脾氣舒，則三焦通利而正氣和；肝郁散，則營衛(wèi)流行而病邪解?！鞭较?、佩蘭二者合用是辟穢化濁，芳香化濕常用對藥；茯苓，甘、淡，平，歸心、肺、脾、腎經(jīng)，能夠利水滲濕，健脾寧心，三藥為君，合用共奏化濁、滲濕、解毒之功效。連翹清透郁熱，黃連苦寒燥中焦之濕熱，敗醬草清熱利濕，導(dǎo)濕熱從大腸而出，蒲公英、白花蛇舌草、藤梨根、八月札合用共共奏清熱解毒之功效，諸藥合用共為臣藥，其中八月札、藤梨根、白花蛇舌草在治療慢性萎縮性胃炎預(yù)防癌變上有很好的療效，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)藤梨根中的正丁醇提取物、白花蛇舌草中的黃酮類成分有一定的抗腫瘤作用因此三藥合用還能預(yù)防癌變?！皻鉃檠畮洝保瑵岫疽鬃铓鈾C(jī)，氣不行則形成血瘀，郁金行氣活血，當(dāng)歸、川芎、莪術(shù)為佐共奏活血化瘀之功效，三七粉活血化瘀，且現(xiàn)代藥理研究具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用，在此為使藥。

實驗研究表明：歸連胃康方在治療慢性萎縮性胃炎時通過降低IL-1、TNF-α、COX-2表達(dá)，促進(jìn)PGE2分泌能夠有效緩解其臨床癥狀，逆轉(zhuǎn)萎縮，其中歸連胃康大劑量治療效果最優(yōu)。其具體機(jī)理可概括如下：本方能夠通過化濁、清熱、解毒減少IL-1、TNF-α、COX-2等炎性因子的釋放，減輕胃黏膜炎癥反應(yīng)；通過活血化瘀改善微循環(huán)，增加局部組織有效循環(huán)血容量，進(jìn)而促進(jìn)萎縮腺體的修復(fù)。同時應(yīng)增加胃癌大鼠的指標(biāo)檢測，進(jìn)一步完善實驗數(shù)據(jù)。