犬乳頭瘤病毒研究概況

李亞蘭，馮 園，楊雅娣，胡 意，譚 磊，鄧治邦，楊凌宸，王愛(ài)兵*

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128；2.獸用蛋白質(zhì)工程疫苗湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙 410128；3.湘潭市中心醫(yī)院，湖南湘潭 411100)

近年來(lái)，越來(lái)越多的脊椎動(dòng)物乳頭瘤病毒(Papilloma viruses,PVs)被發(fā)現(xiàn)和鑒定，該類(lèi)病毒通過(guò)感染機(jī)體的鱗狀或粘膜上皮細(xì)胞導(dǎo)致亞臨床感染或良性增生，但某些病毒亞型或持續(xù)感染會(huì)導(dǎo)致人、牛、犬、貓家畜及野生動(dòng)物(如野豬)等出現(xiàn)上皮增生性病變，而表現(xiàn)出各種臨床癥狀，甚至包括癌癥，如人類(lèi)宮頸癌的發(fā)生與人類(lèi)乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)、犬類(lèi)鱗狀細(xì)胞癌與犬類(lèi)乳頭瘤病毒(Canine papilloma virus,CPV)的感染密切相關(guān)。PVs不僅具有宿主特異性特點(diǎn)，而且基因型多，如已報(bào)道的HPV超過(guò)200個(gè)基因型、CPV有23個(gè)基因型[1]。

國(guó)外學(xué)者在1898年首次發(fā)現(xiàn)疣可在犬之間傳播，直到1959年才從無(wú)細(xì)胞提取物中獲得可傳播的CPV。不同類(lèi)型的CPV感染犬類(lèi)的不同部位(如口腔、皮膚、足部等)從而誘發(fā)不同的病理特征及臨床癥狀，包括皮膚乳頭瘤、口腔乳頭瘤、疣狀表皮增生、病毒色素斑、鱗狀細(xì)胞癌等[1]。受CPV感染的犬常會(huì)自發(fā)恢復(fù)，而且體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體可以保護(hù)它們不受再次感染，所以CPV感染通常不被認(rèn)為是一種危及生命的疾病[2]，但最近有研究表明，CPV引起的良性乳頭瘤可惡性轉(zhuǎn)化為鱗狀細(xì)胞癌[3]，并且PVs感染對(duì)免疫功能低下的動(dòng)物形成更大的威脅，比如在嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)犬內(nèi)生性乳頭瘤中發(fā)現(xiàn)的CPV2，其在免疫能力強(qiáng)的動(dòng)物中沒(méi)有誘發(fā)乳頭瘤，同樣在實(shí)驗(yàn)性接種的犬中也沒(méi)有引起類(lèi)型特異性免疫反應(yīng)[4]。該病毒感染后可影響犬的外貌、導(dǎo)致疼痛，在感染嚴(yán)重的情況下可造成犬的死亡，損害實(shí)驗(yàn)犬飼養(yǎng)公司的經(jīng)濟(jì)效益，而且影響利用犬類(lèi)進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)獲得相關(guān)數(shù)據(jù)的可靠性。此外，由于犬的自身狀況及周?chē)h(huán)境因素的影響，病毒也會(huì)隨新的宿主環(huán)境改變而進(jìn)化，從而出現(xiàn)越來(lái)越多的突變體?；诖耍疚膶?duì)于該病毒的生物學(xué)特征、流行情況、感染所致疾病及并發(fā)癥進(jìn)行綜述，提高對(duì)該病毒及所致疾病的認(rèn)識(shí)，為后期的基礎(chǔ)及臨床研究奠定理論基礎(chǔ)，同時(shí)提示需要對(duì)該病毒進(jìn)行更進(jìn)一步臨床及預(yù)防研究。

1 犬乳頭瘤病毒基本生物學(xué)特征

CPV為環(huán)狀、閉合、雙鏈DNA病毒，屬于乳頭瘤病毒科。病毒特征為無(wú)囊膜僅衣殼包裹的球形病毒粒子，呈典型對(duì)稱(chēng)的二十面體，直徑約為40 nm～60 nm，其基因組大小約為7.7 kb～8.0 kb，是目前所知的PVs中基因組最大的病毒。CPV基因組編碼區(qū)含有7個(gè)～8個(gè)開(kāi)放閱讀框(open-reading frames,ORF)，按照功能的不同主要分為3個(gè)部分：(1)早期轉(zhuǎn)錄E區(qū)(early-regions,ERs)：主要編碼非結(jié)構(gòu)的早期蛋白El、E2、E4、E5、E6、E7，參與病毒的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄及基因的表達(dá)調(diào)控[5]。(2)編碼晚期蛋白L區(qū)(late-regions,LRs)：編碼結(jié)構(gòu)蛋白L1和L2，其中L1為主要衣殼蛋白，有種屬、類(lèi)型特異性和中和抗體抗原表位，可自組裝成類(lèi)似病毒的VLPs，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生L1型特異性的中和抗體，具有較強(qiáng)的免疫原性；L2是次要衣殼蛋白，有種屬特異性抗原表位；兩者共同參與病毒的組裝與釋放[6-7]。(3)非編碼區(qū)(non-coding-regions,NCRs)：即長(zhǎng)調(diào)控區(qū)(long-control-regions,LCRs)區(qū)，位于早期和晚期區(qū)之間，該區(qū)域不編碼任何蛋白，但調(diào)節(jié)病毒基因轉(zhuǎn)錄，是CPVs變異最多的區(qū)域[7]。

迄今為止，已鑒定出的23種CPVs類(lèi)型分布于3個(gè)不同的屬中：Lambdapapillomavirus(CPV1、CPV6)；Taupapillomavirus(CPV2、CPV7、CPV13、CPV17、CPV19、CPV21、CPV22、CPV23)；Chipapillomavirus(CPV3、CPV4、CPV5、CPV8、CPV9、CPV10、CPV11、CPV12、CPV14、CPV15、CPV16、CPV18、CPV20)。每一種CPV類(lèi)型都與特定的病變有關(guān)，如在Lambdapapillomavirus屬中，CPV1是最常見(jiàn)的類(lèi)型，除可引起口腔乳頭瘤病，還與皮膚乳頭瘤和鱗狀細(xì)胞癌有關(guān)[8-9]。在Taupipillomavirus屬中，CPV2、7、13、17和19在內(nèi)生和外生乳頭瘤、口腔乳頭瘤病和鱗狀細(xì)胞癌中均有報(bào)道[13-16]。皮膚色素斑塊與Chipapillomavirus所有類(lèi)型相關(guān)[9-12,17-20,]。

2 犬乳頭瘤病毒流行概況

由于犬乳頭瘤被認(rèn)為是一種不危及生命的疾病，因此全球?qū)PV流行病學(xué)進(jìn)行調(diào)查不多，相應(yīng)的CPV流行病學(xué)數(shù)據(jù)及報(bào)道極少。CPV感染在大多數(shù)犬群中是地方性的[21]，所以需要在不同的國(guó)家進(jìn)一步開(kāi)展與CPV相關(guān)的流行病學(xué)調(diào)查，特別是在臨床表現(xiàn)和易感犬種方面。

現(xiàn)有的PVs流行病學(xué)調(diào)查顯示，并非所有的自然感染都會(huì)引起明顯的癥狀，而且病毒DNA可以在人類(lèi)和一些動(dòng)物(如犬)的臨床健康群體中檢測(cè)到。如一項(xiàng)研究報(bào)告表明有超過(guò)50%健康犬皮膚上可檢測(cè)到CPV-DNA的存在[22]，目前尚不清楚屬于亞臨床感染病例，或只是在其皮膚上攜帶CPV核酸。在研究中發(fā)現(xiàn)CPV1和CPV2是典型犬乳頭瘤的主要病毒，其中口腔以CPV1感染為主，其他部位以CPV2感染為主。盡管CPV具有多樣性，但也可能是共生的，尤其是CPV2感染的犬比例偏高，將可能會(huì)增加癌變的風(fēng)險(xiǎn)[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道CPV在純種犬中的感染可能比混合品種更為普遍，同時(shí)，CPV引起疾病的發(fā)生率與狗的年齡和性別之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著相關(guān)性(P>0.05)[21]。但另一團(tuán)隊(duì)在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，雄性犬患CPV的感染率(60%)高于雌性犬(40%)[23]。因此，在CPV感染流行病學(xué)的各方面研究尚需更大規(guī)模的調(diào)查分析?，F(xiàn)有犬乳頭瘤病零星報(bào)道總結(jié)如表1中。

表1 現(xiàn)有犬乳頭瘤病流行概況

3 犬病毒性乳頭瘤臨床癥狀

乳頭瘤是一種增生性上皮病變，通常發(fā)生于鱗狀上皮或粘膜上皮，許多是由PVs引起的，所以也被稱(chēng)為病毒性乳頭瘤。CPV誘發(fā)的臨床癥狀具有如下特點(diǎn)：(1)CPV感染可能是亞臨床的，也可能引起微小病變或良性腫瘤；(2)受影響部位包括犬的陰莖、外陰、皮膚和結(jié)膜等[25]；(3)病毒性乳頭瘤可能是內(nèi)生的或外生的，典型地表現(xiàn)為病毒性細(xì)胞病變的形態(tài)學(xué)特征，包括發(fā)育異常、胞漿空泡化、細(xì)胞增生、肉芽腫、核內(nèi)包涵體、蘇木精和伊紅(HE)染色的藍(lán)灰色胞質(zhì)變性；(4)這些病變大多是暫時(shí)性的，但仍有一些持續(xù)存在并有可能逐漸發(fā)展為惡性鱗狀細(xì)胞癌，如人類(lèi)和動(dòng)物中有一部分HPV和動(dòng)物PVs明顯與癌癥的發(fā)生有關(guān)，因此將這些PVs稱(chēng)為高危型乳頭瘤病毒；(5)有數(shù)據(jù)表明CPV類(lèi)型與病變類(lèi)型及其進(jìn)展之間存在一定的相關(guān)性[26]。

CPV誘發(fā)的臨床癥狀大致可以分為口腔乳頭瘤(Oral papillomatosis)、皮膚乳頭瘤(Cutaneous papillomas)、病毒色素斑(Viral pigmented plaques)、鱗狀細(xì)胞癌(Squamous cell carcinomas)、疣狀表皮增生(Epidermodysplasia verruciformis)。在目前的23種CPV類(lèi)型中，最常見(jiàn)的是Chipapillomavirus屬，它們都是從帶有色素斑塊的犬組織中分離出來(lái)的，其中一些新的突變株引起的癥狀會(huì)發(fā)展為鱗狀細(xì)胞癌[26-28]，具體的臨床癥狀如表2所示。

表2 CPV誘發(fā)的臨床癥狀

4 犬乳頭瘤病毒檢測(cè)方法

多種方法包括電鏡、原位雜交、滾環(huán)擴(kuò)增、PCR、ELISA和NGS等，并結(jié)合臨床表現(xiàn)、流行病學(xué)、病理學(xué)觀察等用于檢測(cè)和確診犬CPV相關(guān)乳頭瘤病。這些方法各有所長(zhǎng)，比如免疫組織化學(xué)需要相當(dāng)數(shù)量的病毒蛋白來(lái)提供陽(yáng)性信號(hào)從而清楚地顯示病毒的活性；原位雜交不僅可以確定病毒核酸在固定組織中的定位，從而確定感染的組織和細(xì)胞，還可靶向RNA時(shí)顯示病毒的轉(zhuǎn)錄；電子顯微鏡可實(shí)視化病毒特征性結(jié)構(gòu)，并證明生產(chǎn)性感染；滾環(huán)擴(kuò)增法可用于新鮮但不固定的樣本(乳頭瘤病毒的環(huán)狀DNA未降解)，是一種獨(dú)立于序列而擴(kuò)增整個(gè)病毒基因組的方法，有助于檢測(cè)和鑒定PVs。PCR及組織病理學(xué)常被用來(lái)對(duì)CPV進(jìn)行分析和型別鑒定。下面簡(jiǎn)要介紹幾種常用的CPV檢測(cè)方法：

4.1 聚合酶鏈反應(yīng)

傳統(tǒng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)技術(shù)通過(guò)對(duì)CPV-DNA中某一特定核苷酸序列進(jìn)行擴(kuò)增，然后通過(guò)凝膠電泳技術(shù)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行定性分析。因此PCR引物設(shè)計(jì)尤為重要，目前有通用引物和特異引物，前者靶向CPV亞型L1-ORFs的保守序列，后者針對(duì)CPV各基因型E1基因保守序列的差異而設(shè)計(jì)[26]。

PCR檢測(cè)CPV步驟包括：(1)從疑似樣品中分離出犬基因組和病毒DNA；(2)利用犬GAPDH引物對(duì)進(jìn)行PCR確認(rèn)和分析核酸質(zhì)量；(3)利用靶向L1基因的簡(jiǎn)并引物對(duì)進(jìn)行PCR，擴(kuò)增潛在的乳頭瘤病毒基因組片段；(4)利用特異性CPV亞型引物進(jìn)行PCR確定所屬亞型；(5)確定亞型需要進(jìn)行多次PCR，并且不能確定新的CPV類(lèi)型或反饋假的結(jié)果，此情況下，可使用多引物滾環(huán)擴(kuò)增(multiple-primed rolling-circle amplification,RCA)，然后將目的片段克隆再進(jìn)行測(cè)序分析[32]。此外，在PCR過(guò)程中，采用較低的退火溫度，如50℃左右，可以擴(kuò)增出范圍更廣的DNA模板[33]。因此，有必要設(shè)計(jì)更靈敏可靠的PCR引物，優(yōu)化反應(yīng)條件。

4.2酶聯(lián)免疫吸附法

PVs在傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)中不易復(fù)制，而血清學(xué)檢測(cè)可基于異源表達(dá)的病毒抗原。PVs結(jié)構(gòu)蛋白L1的獨(dú)特性如可自組裝形成病毒樣顆粒(VLPs)及表現(xiàn)出的高度免疫原性，使得L1-VLP可用于疫苗接種和作為抗原進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)[34]。研究表明，GST標(biāo)記的L1蛋白同樣可以自發(fā)形成五聚體和VLP，并且這種表達(dá)技術(shù)的結(jié)果與桿狀病毒表達(dá)VLP的替代系統(tǒng)相同[27]。Lange C E等[29]將異源表達(dá)的CPV衣殼蛋白L1-N端與GST融合制備的蛋白作為抗原，建立了可同時(shí)鑒別兩種不同類(lèi)型CPV抗體的酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法，在檢測(cè)的血清中發(fā)現(xiàn)了針對(duì)COPV和CPV3的特異性抗體，也發(fā)現(xiàn)了大量對(duì)這兩種抗原都呈陽(yáng)性的抗體。而未來(lái)需要產(chǎn)生和驗(yàn)證其它基于CPV-L1的ELISA方法，以便用于CPV的檢測(cè)和研究。

4.3 免疫組化

研究人員對(duì)3種形式的犬SCCs(黏膜、皮膚和原位SCCs)樣本(通過(guò)PCR檢測(cè)含有PVs-DNA)進(jìn)行了免疫組化(immunohistochemistry,IHC)分析，發(fā)現(xiàn)黏膜SCCs和皮膚SCCs在臨床上和組織學(xué)上相似，都表現(xiàn)為增生性、外生性和侵襲性，均有侵入真皮的非典型細(xì)胞索或島狀細(xì)胞組成，所有病例均有大核、核仁突出，并有大量核分裂，大多樣品中也存在過(guò)早的角化細(xì)胞。而原位SCCs在臨床中出現(xiàn)大量色素沉著、鱗狀斑、斑塊(伴有潰爛)和結(jié)節(jié)(潰瘍性結(jié)節(jié))；組織病理學(xué)上可見(jiàn)明顯的角化過(guò)度棘皮病和角膜結(jié)塊，表皮有大量不典型細(xì)胞和早期角化；異型性包括巨核細(xì)胞增多癥、不等核細(xì)胞增多癥、高色素、著絲過(guò)度、核仁突出、多核細(xì)胞和異常的有絲分裂，但基底膜完整，真皮未受影響[36-37]。

4.4 二代測(cè)序

二代測(cè)序(next generation sequencing techno-logy,NGS)技術(shù)的發(fā)展與進(jìn)步，使得一次檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)新的和多種病原體變得更加容易。例如Tarka等人[38]通過(guò)NGS調(diào)查了一家犬舍幼犬胃腸炎的可能感染原因種，發(fā)現(xiàn)犬星狀病毒是這些幼犬腹瀉的原因外，還檢測(cè)到其他病毒感染，包括一些CPV和一種犬細(xì)小病毒(疫苗株)以及一種非常低水平的彎曲桿菌。這項(xiàng)研究表明，NGS在獸醫(yī)診斷中既可以檢測(cè)共感染，也可以提供潛在有用的流行病學(xué)信息，以確定這些感染的可能來(lái)源。但是，高昂的成本使得NGS未能成為首檢CPV的有效手段。

5 犬乳頭瘤病毒疫苗研制情況

犬乳頭瘤病是一種以感染幼犬或免疫缺陷犬為主的自限性疾病。大多數(shù)病犬在不經(jīng)治療或干預(yù)的情況下會(huì)自行緩解，但病情嚴(yán)重時(shí)，手術(shù)無(wú)法徹底根除，不僅影響動(dòng)物機(jī)體的正常功能，而且容易引起繼發(fā)感染和種群間傳播。目前預(yù)防和治療CPV感染的方法主要包括疫苗預(yù)防法、外科手術(shù)摘除法、中藥治療法等，均有一定的治療效果，但臨床創(chuàng)面容易受到飼養(yǎng)環(huán)境限制，引起繼發(fā)炎癥反應(yīng)，造成預(yù)后不良，且多有復(fù)發(fā)[12]。因此，疾病主要以疫苗預(yù)防為主，同時(shí)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。

5.1 自體疫苗

自體疫苗，在疣病臨床治療中很常見(jiàn)，將被移除的疣制成一個(gè)粗制的疫苗，并注射到同一個(gè)動(dòng)物體內(nèi)。據(jù)報(bào)道，該方法在治療犬乳頭瘤方面是有一定療效，用粗糙的疣提取液和佐劑，經(jīng)肌肉或皮下注射到犬體內(nèi)，2周～3周后，口腔黏被病毒感染時(shí)，阻止了疣的發(fā)展[39]。同樣使用滅活的粗疣提取物也對(duì)預(yù)防口腔乳頭瘤病具有效果，試驗(yàn)研究顯示99只比格犬接種了經(jīng)福爾馬林滅活的COPV疣粗勻漿物，1個(gè)月后，接種疫苗的犬能夠?qū)Σ《靖腥酒鸬揭欢ǖ牡挚棺饔?，而?duì)照組不能抵抗病毒的入侵，都感染出現(xiàn)疣。隨后，超過(guò)6萬(wàn)只比格犬接種了該疫苗，并沒(méi)有出現(xiàn)不良反應(yīng)，但是，接種滅活的COPV提取物后，在注射部位偶爾會(huì)出現(xiàn)各種上皮性腫瘤，比如SCCs[39]。

5.2 COPV-L1-VLPs疫苗

重組CPV病毒衣殼蛋白L1在體外表達(dá)，并且能夠自組裝成病毒樣顆粒(VLPs)，這使得新一代安全高效的COPV-L1-VLPs疫苗得以開(kāi)發(fā)并可預(yù)防犬感染。在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中，體外表達(dá)的COPV主要衣殼蛋白L1形成VLPs，當(dāng)注射到犬的足墊時(shí)，來(lái)自免疫犬的血清在被動(dòng)轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中對(duì)實(shí)驗(yàn)犬提供了完全保護(hù)[40]。并且發(fā)現(xiàn)這種免疫需要正確折疊顯示構(gòu)象表位的VLP，因?yàn)樽冃缘腖1蛋白產(chǎn)生的抗體則不能保護(hù)動(dòng)物免受感染。Chen Y等人制備了突變型的COPV-L1-VLPs，該突變株雖然組裝成VLPs，但不表達(dá)中和構(gòu)象表位[41]。即使蛋白質(zhì)被截短，以消除中和構(gòu)象表位的表達(dá)，形成VLPs的能力仍然存在。形成VLPs的能力和表達(dá)重要構(gòu)象表位的能力之間的區(qū)別在疫苗設(shè)計(jì)中至關(guān)重要，這表明并非所有VLPs都具有預(yù)防作用。PVs衣殼表面的構(gòu)象依賴(lài)性抗原表位的鑒定對(duì)于了解病毒與宿主的早期相互作用以及開(kāi)發(fā)有效的PVs疫苗具有重要意義。

5.3 GST-COPV-L1融合蛋白疫苗

目前臨床試驗(yàn)中的預(yù)防性PVs疫苗是由病毒L1衣殼蛋白在真核表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生，并以VLPs的形式純化而成，但是表達(dá)效率低，為了評(píng)價(jià)VLPs是否可用于有效的疫苗接種，Yuan H[42]等人在大腸埃希氏菌中將L1蛋白表達(dá)為GST融合蛋白，發(fā)現(xiàn)GST-COPV-L1融合蛋白可形成五聚體。盡管這些衣殼樣結(jié)構(gòu)并沒(méi)有組裝成VLPs，但在先前驗(yàn)證VLPs疫苗有效性的COPV模型中檢測(cè)到其免疫原性，并且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示GST-COPV-L1五聚體完全保護(hù)犬免受高劑量病毒對(duì)其口腔黏膜的感染[42]。該研究表明雖然缺乏VLPs的形成，但GST-COPV-L1融合蛋白仍然保留其天然的構(gòu)象?？傊?，這是一種新的疫苗，可以保護(hù)犬免受CPVs感染。GST標(biāo)記既不干擾顆粒組裝，也不干擾表位表達(dá)，GST-L1制劑作為疫苗具有保護(hù)作用。該疫苗基于GST-L1融合蛋白在細(xì)菌中的表達(dá)，為生產(chǎn)CPV疫苗提供了一種簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的替代方法，同時(shí)，可以作為第二代PVs疫苗的良好候選者。

5.4 COPV-L1-DNA疫苗

DNA可以通過(guò)針頭注射而在肌肉內(nèi)傳遞，也可以通過(guò)顆粒介導(dǎo)的DNA遞送(particle-mediated DNA delivery,PMDD)到表皮內(nèi)，每種途徑都能誘導(dǎo)細(xì)胞和體液免疫，但PMDD提供了強(qiáng)大的細(xì)胞和體液反應(yīng)[43]。研究人員用低劑量的COPV-L1-DNA免疫比格犬，并通過(guò)PMDD方式將COPV-L1-DNA遞送到皮膚和口腔黏膜，發(fā)現(xiàn)可產(chǎn)生適度的全身抗體和T細(xì)胞淋巴細(xì)胞增殖性免疫反應(yīng)，從而完全保護(hù)比格犬免受高劑量傳染性COPV的攻擊[43]。DNA疫苗的操作相對(duì)簡(jiǎn)單，也是預(yù)防高危型PV的有效策略，它能編碼多種抗原，在多價(jià)疫苗免疫中可以對(duì)抗多種PVs。同時(shí)，多核苷酸疫苗抗原的長(zhǎng)期持續(xù)表達(dá)可使T細(xì)胞產(chǎn)生持久的反應(yīng)，建立免疫記憶。

6 展望

CPV引發(fā)的犬乳頭瘤病是一種傳染性較強(qiáng)的疫病，其不僅對(duì)犬本身產(chǎn)生影響，而且對(duì)基于犬進(jìn)行科學(xué)研究造成不良后果。隨著生活水平的提高和生活方式的改變，未來(lái)人們對(duì)于伴侶犬?dāng)?shù)量和質(zhì)量要求增加，因此有必要加強(qiáng)對(duì)于CPV的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研發(fā)。首先，需針對(duì)當(dāng)前國(guó)內(nèi)外CPV流行病學(xué)資料嚴(yán)重缺失的狀況，開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查，從而對(duì)CPV流行程度做到心中有數(shù)。其次，CPV基因型的豐富性和高度的異質(zhì)性導(dǎo)致PVs的分子檢測(cè)一直是獸醫(yī)學(xué)的一個(gè)挑戰(zhàn)，在感染檢測(cè)方面除了改進(jìn)現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)之外，還需要取長(zhǎng)補(bǔ)短，使不同檢測(cè)技術(shù)和不同學(xué)科之間的探索更加深入，將不同的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行融合應(yīng)用，研發(fā)更快速、靈敏和高特異性的新型檢測(cè)技術(shù)。再者，盡管在CPV預(yù)防疫苗方面進(jìn)行了一些有益的嘗試，但仍未有任何一種商業(yè)化的疫苗產(chǎn)品面世。此外，除了研發(fā)預(yù)防性疫苗外，還需要研發(fā)治療性疫苗。雖然COPV-VLPs在動(dòng)物預(yù)防接種中的作用已經(jīng)被證實(shí)，但全長(zhǎng)COPV-L1蛋白對(duì)VLPs的形成不是必需的，通過(guò)用其他病毒蛋白替換L1蛋白的非必需區(qū)域來(lái)制造嵌合型VLPs顆粒從而具有多種抗原活性，而VLPs似乎能夠針對(duì)MHCⅠ和MHCⅡ抗原處理途徑的表位，表明利用這種技術(shù)開(kāi)發(fā)治療性疫苗是可行的。最后，動(dòng)物乳頭瘤病毒感染的預(yù)防性疫苗接種的成功，將為HPV感染疾病的預(yù)防策略提供很好的借鑒，因此，有效預(yù)防、治療性疫苗接種及其他治療方法的研制將是乳頭瘤病毒研究的重要目標(biāo)。