富源某養(yǎng)殖場豬鏈球菌病診斷體會

晏 波，荀紹雄，李華高，付兆金，雷洪梅，潘 基，李方志

（1.富源縣大河鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務中心，云南富源 655000；2.富源縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局動物疫病預防控制中心，云南富源 655000）

1 前言

富源縣某養(yǎng)殖場2019年8月存欄數(shù)340頭，母豬42頭，仔豬172頭，小肥豬126頭。8月16日2頭母豬高發(fā)病，體溫41.2℃，8月17日突然死亡，未見任何癥狀。8月20日，仔豬突然死亡12頭，小肥豬9頭。8月21日至9月2日，陸續(xù)有有豬死亡，癥狀均不明顯。經(jīng)剖檢，肝臟明顯腫大，脾臟正常，腸系膜了針尖大小出血點，腹股溝淋巴結(jié)腫大、血性浸潤，胸腔可見少量黃色滲出物。采集豬腎臟、脾臟、淋巴等組織樣品編為病料1號，豬全血編為病料樣品2號，送檢云南農(nóng)業(yè)大學動物健康檢測與評價與評價云中心。

2 材料與方法

2.1 檢測項目

豬瘟病毒抗原、豬偽狂犬病毒抗原、豬藍耳病毒抗原。

2.2 檢測方法

2.2.1 豬瘟病毒抗原檢測。采取送檢病料，用TAKARA試劑盒法提取樣品中RNA，進行RT-PCR反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，使用TAKARA公司rTaq，加入PCR擴增相應特異性片段。擴增產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像儀照像。

2.2.2 豬偽狂犬病毒抗原檢測。采取送檢病料，采用TaKaRa DNA提取試劑盒提取樣品組織中的DNA，加入PCR 擴增相應特異性片段。擴增產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像儀照像。

2.2.3 豬藍耳病毒抗原檢測。采取送檢病料，用TAKARA試劑盒法提取樣品中 RNA，進行RT-PCR反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，使用TAKARA公司rTaq，加入PCR擴增相應特異性片段。擴增產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像。

3 結(jié)果

3.1 豬瘟病毒抗原結(jié)果

目的條帶大小為：272bp，本次檢測結(jié)果未檢出豬瘟病毒抗原。

3.2 豬偽狂犬病毒抗原結(jié)果

豬偽狂犬病毒目的條帶：343bp，本次檢測結(jié)果病料未檢出豬偽狂犬病毒抗原。

3.3 豬藍耳病毒抗原結(jié)果

豬藍耳病毒目的條帶：835bp，本次檢測結(jié)果病料1和病料2均未檢出豬藍耳病毒抗原陽性。

4 結(jié)果分析

結(jié)果表明檢測的豬瘟病毒抗原、豬偽狂犬病毒抗原為陰性、豬藍耳病毒抗原均為陰性。3種需檢測的結(jié)果均為陰性，進行梳理后，做豬鏈球菌檢驗。細菌初培養(yǎng)：嚴格的無菌操作下剪切組織病料，放入營養(yǎng)肉湯的EP管中，在37℃搖床培養(yǎng)過夜。細菌的鑒別培養(yǎng)：取菌液劃線接種于兔血液瓊脂培養(yǎng)基，37℃過夜培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)，革蘭氏染色后鏡檢。檢測結(jié)果：1號細菌并未出現(xiàn)溶血；2號細菌在血平板上生長良好，并出現(xiàn)淺灰色、圓整濕潤的露滴樣優(yōu)勢菌落，周圍有溶血現(xiàn)象，革蘭氏染色后鏡檢后觀察到球狀陽性菌，判定為鏈球菌。結(jié)論：經(jīng)培養(yǎng)鑒定以及鏡檢判斷，樣品中鏈球菌陽性。

5 結(jié)語

該養(yǎng)殖場之所以出現(xiàn)鏈球菌病，導致巨大的經(jīng)濟損失，甚至面臨清場，其原因有下列幾個方面：（1）該養(yǎng)殖場管理混亂，檔案不齊全，生產(chǎn)區(qū)、生活區(qū)，管理區(qū)三位一體。（2）環(huán)境衛(wèi)生極差，生物安全控制基本為零。（3）基礎免疫雖然做了，但對非洲豬瘟防控意識不到位。（4）沒有基本的消毒設施，保險公司查勘理賠人員任意進出養(yǎng)殖場，病原微生物帶進養(yǎng)殖場內(nèi)在所難免。