野蠶豆根總環(huán)烯醚萜苷對非酒精性脂肪肝大鼠肝臟功能的影響

李 莉 單 蕊 陳 燕 朱 瑛 杜 冰 李海寧 姚 政*

1. 云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南 昆明 650500;2. 重慶市開州區(qū)中醫(yī)院，重慶 405400;3. 安徽省宣城市中心醫(yī)院，安徽 宣城 242000

野蠶豆根，又名化血丹、小紅藥、金貓頭(廣西)、靈芝草(云南)，原植物來源于玄參科(Scrophulariaceae) 胡麻草屬(Centranthera) 植物大花胡麻草CentrantheragrandifloraBenth，主要分布于云南、貴州、廣西等地，越南、緬甸、印度也有分布[1]。野蠶豆根主要含有環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類、類胡蘿卜素類、紫羅蘭酮苷類、單萜苷類等化合物[2]，桃葉珊瑚苷是野蠶豆根中含量最高的環(huán)烯醚萜苷類成分[3]。

環(huán)烯醚萜苷廣泛存在于自然界許多植物種屬中，在車前科、玄參科、杜仲科、忍冬科等植物中均有發(fā)現(xiàn)，具有降糖、保肝、抗炎、抗凝血等作用，還可發(fā)揮DNA合成酶抑制劑的作用[1]。

野蠶豆根在其產(chǎn)地云南省紅河州常被用于防治心腦血管疾病，收效甚好。其主要的化學(xué)成分為環(huán)烯醚萜苷，但有關(guān)野蠶豆根的藥理作用研究卻十分有限，關(guān)于其藥理藥效方面的研究甚少。因此，對野蠶豆根藥物作用效果及其起效機制進(jìn)行深入研究是很有必要的。課題組前期對野蠶豆根有效藥物成分進(jìn)行了提取，發(fā)現(xiàn)其總環(huán)烯醚萜苷具有抗炎和抗氧化活性[5-6]。本研究取野蠶豆根2年生根，提取其中的總環(huán)烯醚萜苷進(jìn)行動物實驗，觀察其降脂及保肝作用。

1 材料、儀器與試劑

1.1 實驗動物 雄性SD大鼠共21只，體重160～200 g，由長沙市天勤生物科技有限公司提供，許可證號：SCXK(湘)2014-0011。分組情況：正常組7只，模型組7只，總環(huán)烯醚萜苷組7只。飼養(yǎng)于云南中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心，自由飲食，實驗動物房12 h光照12 h黑暗，溫度控制為22～27 ℃，濕度控制為40%～60%。

1.2 實驗藥物及飼料 野蠶豆根采自云南省紅河州屏邊縣國云種植有限公司(1號、2號種植基地)，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)李海寧老師鑒定為玄參科胡麻草屬植物大花胡麻草CentrantheragrandifloraBenth.的根及根莖。

總環(huán)烯醚萜苷的制備：取2年生的野蠶豆根藥材(粗粉)，用60%的乙醇超聲得到浸膏，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到正丁醇部分浸膏(總環(huán)烯醚萜苷)。

普通飼料配方：玉米粉33%、小麥粉10%、麩皮18%、大米10%、豆粕16%、魚粉3%、雞肉粉2%、骨粉3%、脂肪5.8%。

高脂飼料配方：10%豬油+2%膽固醇+88%普通飼料。

飼料及墊料均購自江蘇美迪生物醫(yī)藥有限公司。

1.3 實驗儀器 電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司，DZKW-D-4)、YD1508B輪式切片機(浙江金華益迪醫(yī)療設(shè)備廠)、HI1220烘片機(德國LEICA公司)、HI1210攤片機(德國LEICA 公司)、Nikon ECLIPSE E200顯微鏡(日本Nikon公司)、全自動生化分析儀cobas c311(瑞士羅氏公司)。

2 實驗方法

2.1 非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立 正常組給予普通飼料喂養(yǎng)，模型組、總環(huán)烯醚萜苷組給予高脂飼料喂養(yǎng)，飼養(yǎng)于云南中醫(yī)藥大學(xué)動物房，飼養(yǎng)時間共8周。于第8周末取材。

2.2 動物給藥劑量方法 模型組、總環(huán)烯醚萜苷組于第4周開始灌胃給藥，持續(xù)4周，劑量參考李儀奎主編的《中藥藥理實驗方法學(xué)》，大鼠50 mg/kg·d。正常組灌胃給同等劑量生理鹽水。

2.3 大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)觀察 大鼠剖殺后，取肝臟樣本在10%福爾馬林溶液中浸泡24 h，使肝臟組織充分固定，切割至2mm×4mm×2 mm大小，流水沖洗2～3 h。脫水后，進(jìn)行石蠟包埋，切片，HE染色，病理圖片拍攝。

2.4 大鼠血清生化指標(biāo)檢測 提取血清，采用全自動生化儀測定血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)含量。

3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

4 實驗結(jié)果

4.1 各組大鼠體重變化 正常組大鼠體重增長趨勢較為平穩(wěn)，模型組大鼠體重整體增長最快，總環(huán)烯醚萜苷組體重整體增長較模型組慢。

4.2 肝體指數(shù) 肝體指數(shù)(%)=(肝臟濕重/體重)×100%。模型組與正常組肝體指數(shù)相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。總環(huán)烯醚萜苷組與模型組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

4.3 大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)觀察 從HE染色結(jié)果可以看出：正常組肝細(xì)胞大小正常，肝索分布清晰，肝細(xì)胞細(xì)胞核大小正常，無細(xì)胞脂肪變性；模型組出現(xiàn)較多脂肪空泡，肝索、肝細(xì)胞排列開始紊亂，表明NAFLD大鼠模型復(fù)制成功?？偔h(huán)烯醚萜苷組存在小脂肪空泡，與模型組相比空泡變小變少。

4.4 各組大鼠血清生化指標(biāo)檢測 生化分析儀檢測各組大鼠8周末血清生化指標(biāo)：模型組與正常組比較，血清LDL-C、ALT升高，HDL-C降低，差異有顯著性(P<0.05)；總環(huán)烯醚萜苷組與模型組比較，血清TG、LDL-C、ALT均降低，HDL-C升高，差異有顯著性(P<0.05)?？偔h(huán)烯醚萜苷組ALT和TBIL接近正常組水平。

表1 各組大鼠血清生化指標(biāo)檢測結(jié)果

5 討論

野蠶豆根在云南省紅河州一帶資源豐富，是當(dāng)?shù)孛缱迕耖g常用植物藥，常用于心血管系統(tǒng)疾病的防治。野蠶豆根具有抗氧化、抗炎、保肝、抗菌、抗糖尿病、神經(jīng)保護(hù)、抗腫瘤、保護(hù)心血管、促進(jìn)傷口愈合等作用[7]?！吨腥A本草》記載：味酸、微辛，性溫；具有消腫止痛、散瘀止血的功效。主要治療咳血、咯血、吐血、風(fēng)濕痹痛、跌打骨折、內(nèi)傷瘀血[8]。現(xiàn)代藥理研究[9-10]表明：野蠶豆根用藥安全，無明顯毒性反應(yīng)；對大鼠急性缺血模型所致心肌損傷有保護(hù)作用，此外，還有抗凝血及抗炎活性。

野蠶豆根主要化學(xué)活性物質(zhì)為以桃葉珊瑚苷為主的環(huán)烯醚萜苷類化合物。桃葉珊瑚苷味甘、淡，性溫，具有消腫止痛、散瘀止血的功效，是一類特殊的具有縮醛或半縮醛結(jié)構(gòu)的單萜化合物[11]。有研究[12-16]顯示，桃葉珊瑚苷可抗凝血、抗炎、抗氧化、抗凋亡，同時可調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬水平，具有抗腫瘤、保肝、降糖、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等作用。桃葉珊瑚苷還具有抑制肝細(xì)胞中Ⅰ型膠原纖維、Ⅲ型膠原纖維和基質(zhì)金屬蛋白酶-2( MMP-2)的表達(dá)，減輕肝纖維化的作用[20]。本實驗所用藥物為2年生野蠶豆根中制備的總環(huán)烯醚萜苷，其中有較高含量的桃葉珊瑚苷。在成功制備了非酒精性脂肪肝大鼠的基礎(chǔ)上進(jìn)行給藥觀察，病理結(jié)果顯示，總環(huán)烯醚萜苷可使脂肪肝大鼠肝細(xì)胞中的脂滴減少；血清生化結(jié)果顯示，總環(huán)烯醚萜苷可以降低非酒精性脂肪肝大鼠血清TG、ALT、HDL-C、LDL-C、TBIL水平。可看出，總環(huán)烯醚萜苷可有效改善非酒精性脂肪肝大鼠肝功能，減輕肝細(xì)胞中的脂質(zhì)沉積，降低血脂水平，起到一定的降脂、保肝作用。

本研究結(jié)果顯示野蠶豆根在降脂、保肝方面具有較好的藥用價值，可作為防治脂肪肝及心腦血管類疾病的候選新藥。本研究可對野蠶豆根的藥物開發(fā)利用提供一定指導(dǎo)，并為民族民間藥物的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。