慢性丙型肝炎患者血清GP73水平與肝功能及HCV-RNA的相關(guān)分析*

林桂花，楊曉冬，鐘 文，葉仁清△

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬寧德市醫(yī)院：1.輸血科；2.檢驗(yàn)科，福建寧德 352100)

當(dāng)機(jī)體受到丙型肝炎病毒(HCV)感染后，如未得到及時(shí)有效的治療，勢(shì)必會(huì)從最初的急慢性肝臟炎癥發(fā)展成為肝臟纖維化、肝硬化甚至原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)[1]。有60%～80%的HCV感染者會(huì)發(fā)展成為慢性感染，嚴(yán)重影響了我國(guó)居民的身體健康[2]。高爾基體蛋白73(GP73)作為一種新型的血清標(biāo)志物，對(duì)于診斷肝臟疾病及HCC具有一定的靈敏度[3]。HCV病毒載量則可反映患者的病程進(jìn)展及HCV復(fù)制的活躍度，常被用于丙型肝炎的診斷及衡量治療有效率的指標(biāo)[4-5]。本研究通過(guò)回顧性收集分析84例慢性丙型肝炎(CHC)患者的血清GP73水平、肝功能相關(guān)指標(biāo)水平及HCV-RNA載量的相關(guān)性，以為CHC的診斷及療效評(píng)估等提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2012年8月至2018年9月收治的84例CHC患者為研究對(duì)象。患者丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)多呈輕度和中度升高，抗-HCV和HCV-RNA陽(yáng)性。HCV-RNA常在ALT恢復(fù)正常前轉(zhuǎn)陰，但也有ALT恢復(fù)正常而HCV-RNA持續(xù)陽(yáng)性者。診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的《丙型肝炎防治指南(2015更新版)》中的CHC診斷標(biāo)準(zhǔn)。按照HCV-RNA水平分為HCV-RNA陰性組(HCV-RNA<5.0×102IU/mL，n=23)和HCV-RNA陽(yáng)性組(HCV-RNA≥5.0×102IU/mL，n=61)。HCV-RNA陰性組：男13例，女10例；年齡19～75歲，平均(45.59±2.37)歲。HCV-RNA陽(yáng)性組：男32例，女29例；年齡19～75歲，平均(45.59±2.37)歲。選擇同期84例健康體檢者為對(duì)照組，其中男42例，女42例；年齡21～73歲，平均(44.62±3.08)歲。3組對(duì)象性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有CHC患者均符合我國(guó)2015版《丙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，溝通能力良好，愿意配合完成本研究；(2)對(duì)照組為健康體檢者無(wú)潛在疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)其他類(lèi)型肝炎病毒感染及肝膽疾??；(2)惡性腫瘤；(3)重要臟器功能障礙和衰竭。

1.2 方法

1.2.1標(biāo)本采集及檢測(cè)方法

CHC患者及對(duì)照組健康體檢者均禁食、水12 h，采集其空腹肘靜脈血液于促凝管中，用于檢測(cè)患者血清GP73、ALT、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)及HCV-RNA水平；待血液凝固后，以4 000 r/min的離心5 min，將上部血清取出，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)血清GP73水平，試劑盒購(gòu)自北京熱景生物技術(shù)股份公司，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒方法，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，確保結(jié)果的可靠性；肝功能指標(biāo)水平檢測(cè)采用羅氏診斷產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)生化分析儀Cobas8000進(jìn)行檢測(cè)，ALT、AST 及TBIL試劑盒購(gòu)自羅氏診斷產(chǎn)品有限公司；HCV-RNA檢測(cè)，采用BIO RAD公司生產(chǎn)的Light Cycler實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測(cè)儀，開(kāi)展熒光定量HCV-RNA檢測(cè)，采用RT-qPCR法檢測(cè)HCV-RNA載量，Step.one實(shí)時(shí)熒光 PCR儀購(gòu)自艾康生物有限公司，試劑盒購(gòu)自艾康生物有限公司，檢測(cè)靈敏度：5.0×102IU/mL。另外,所有患者還需要接受?chē)?guó)產(chǎn)英特龍300萬(wàn)U，肌內(nèi)注射，每2天1次，利巴韋林每天900 mg，分3次口服，療程為1年。治療第1周，復(fù)查ALT和AST 1次，ALT和AST正常之后，隨著其他項(xiàng)目一起復(fù)查，外周血細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)為每?jī)芍軓?fù)查1次，對(duì)于下降不明顯的每個(gè)月復(fù)查1次。治療前3個(gè)月，每月復(fù)查患者的HCV-RNA和HCV等1次，之后和完成治療后每6個(gè)月隨訪復(fù)查1次。

1.2.2觀察指標(biāo)

(1)觀察HCV-RNA陰性組、HCV-RNA陽(yáng)性組及對(duì)照組血清GP73及肝功能指標(biāo)水平；(2)依據(jù)GP73水平，將61例HCV-RNA陽(yáng)性CHC患者分為高GP73組(>82.50 ng/mL)、中GP73組(57.98～82.50 ng/mL)及低GP73組(<57.98 ng/mL)，分析各組患者肝功能相關(guān)指標(biāo)及HCV-RNA水平與血清GP73水平的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 3組對(duì)象血清GP73及肝功能相關(guān)指標(biāo)水平比較

與對(duì)照組比較，HCV-RNA陽(yáng)性組和陰性組患者血清GP73(t=87.355、123.472，P<0.001)、ALT(t=35.823、90.348，P<0.001)、AST(t=114.895、177.349，P<0.001)、TBIL(t=23.560、45.399，P<0.001)均明顯升高；HCV-RNA陽(yáng)性組GP73、ALT、AST、TBIL水平均高于HCV-RNA陰性組(t=18.385、22.741、23.795、15.242，P<0.001)，見(jiàn)表1。

表1 各組對(duì)象血清GP73及肝功能相關(guān)指標(biāo)水平比較

2.2 HCV-RNA陽(yáng)性3個(gè)亞組肝功能及HCV-RNA水平比較

與中GP73組及低GP73組比較，高GP73組ALT(t=5.578、7.324,P<0.001) 、AST(t=5.889、7.925,P<0.001)、TBIL(t=6.834、8.327,P<0.001)、HCV-RNA(t=3.245、2.899,P<0.001)水平明顯升高；中GP73組ALT、AST、TBIL、HCV-RNA水平均高于低GP73組(t=3.012、3.289、4.089、2.887,P<0.001)， 見(jiàn)表2。

表2 HCV組不同濃度GP73的3組肝功能及HCV-RNA水平對(duì)比

2.3 血清GP73水平與肝功能相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性

相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清GP73水平與ALT、AST、TBIL及HCV-RNA均呈明顯的正相關(guān)(r=0.621、0.652、0.604、0.618，P<0.05)。

3 討 論

CHC是感染HCV所致。HCV是一種小RNA病毒，分類(lèi)為黃病毒科肝病毒屬。由于肝臟的巨大代償能力，大部分人感染HCV后沒(méi)有任何癥狀，常常偶然在體檢時(shí)發(fā)現(xiàn)，或者很多年后出現(xiàn)不適癥狀時(shí)才發(fā)現(xiàn)。大約85%的人在感染HCV后發(fā)展成CHC。因此，防控丙型肝炎最有效的手段是盡早對(duì)患者進(jìn)行準(zhǔn)確診斷和干預(yù)[6-9]。HCV-RNA載量對(duì)患者體內(nèi)病毒水平及病毒復(fù)制活躍程度可以有較好的反映，我國(guó)新近的丙型肝炎防治指南中也有提到HCV-RNA定量檢測(cè)可以用于HCV感染的確認(rèn)及抗病毒治療過(guò)程的應(yīng)答評(píng)估[10-11]。GP73是近年發(fā)現(xiàn)的一種高爾基體Ⅱ型跨膜糖蛋白，正常情況下 GP73位于高爾基體膜囊，僅在膽囊上皮細(xì)胞中有所表達(dá)，當(dāng)肝細(xì)胞組織受到感染，發(fā)生損傷時(shí)可出現(xiàn)GP73高表達(dá)，臨床常將其作為比甲胎蛋白及白細(xì)胞介素-6更為敏感的肝癌診斷標(biāo)志物，有研究報(bào)道，慢性肝病患者的血清GP73隨著疾病進(jìn)展逐漸升高，可作為慢性肝病的血清標(biāo)志物[12-15]。但早期診斷HCV需要綜合考慮多個(gè)因素，聯(lián)合檢測(cè)并探討各個(gè)指標(biāo)間的相關(guān)性可使診斷結(jié)果更加客觀有效。

本研究通過(guò)對(duì)HCV-RNA陽(yáng)性、HCV-RNA陰性CHC患者及健康對(duì)照人群血清GP73分析發(fā)現(xiàn)，兩組CHC患者血清GP73、肝功能相關(guān)指標(biāo)水平均高于對(duì)照組，說(shuō)明HCV感染患者血清GP73表達(dá)水平增高，同時(shí)其肝功能受損，分析其原因可能與CHC患者由于感染HCV后其肝功能受到損傷，引起GP73表達(dá)增高。HCV-RNA陽(yáng)性CHC患者血清GP73、肝功能相關(guān)指標(biāo)水平高于HCV-RNA陰性CHC患者，提示HCV-RNA陽(yáng)性患者肝功能低于HCV-RNA陰性CHC患者，其血清GP73水平也高于HCV-RNA陰性CHC患者，分析其原因可能是因?yàn)镠CV-RNA陽(yáng)性CHC患者體內(nèi)HCV-RNA的復(fù)制，導(dǎo)致患者體內(nèi)病毒水平增加，引起肝臟產(chǎn)生炎癥，逐步發(fā)展為肝纖維化，進(jìn)而導(dǎo)致患者的肝功能損傷程度明顯高于HCV-RNA陰性患者，引起患者血清AST、 ALT、 TBIL等肝功能相關(guān)指標(biāo)的升高，進(jìn)而引起患者血清GP73升高。將61例HCV-RNA陽(yáng)性CHC患者依據(jù)血清GP73水平分組，結(jié)果顯示高GP73組肝功能指標(biāo)及HCV-RNA水平高于中、低GP73組(P<0.001)，中GP73組肝功能指標(biāo)及HCV-RNA水平高于低GP73組(P<0.001)。提示高GP73 HCV-RNA陽(yáng)性CHC患者其體內(nèi)HCV-RNA水平升高，同時(shí)其肝功能指標(biāo)數(shù)值均較高，血清GP73水平與ALT、AST、TBIL及HCV-RNA水平的變化具有一定的關(guān)系，血清GP73水平的高低與肝臟的受損程度密切相關(guān)，血清GP73水平越高，則肝損傷程度越重。分析其原因可能是因?yàn)檎Ｇ闆r下 GP73位于高爾基體膜囊，僅在膽囊上皮細(xì)胞中有所表達(dá)，當(dāng)肝細(xì)胞組織受到感染，發(fā)生損傷時(shí)可出現(xiàn)GP73高表達(dá)，HCV-RNA的復(fù)制導(dǎo)致了患者肝組織受到感染GP73增高，同時(shí)患者肝功能降低。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，血清GP73水平與ALT、AST、TBIL及HCV-RNA水平呈正相關(guān)，充分顯示了血清GP73與CHC患者HCV-RNA及肝功能損傷程度具有密切關(guān)系，有可能作為輔助CHC診斷的一個(gè)標(biāo)志物，同時(shí)在HCV-RNA陽(yáng)性CHC患者的病情評(píng)估、治療效果評(píng)估方面也具有重要作用。

本研究通過(guò)分析HCV-RNA陽(yáng)性CHC患者血清GP73水平，為HCV-RNA陽(yáng)性患者的早期診斷、療效評(píng)估及預(yù)后等方面提供了一定的依據(jù)，同時(shí)也促進(jìn)了CHC研究的發(fā)展，另外，本研究將GP73應(yīng)用于CHC患者的診斷和病情評(píng)估中，因當(dāng)前在國(guó)內(nèi)關(guān)于這方面的研究鮮有報(bào)道，而開(kāi)展本研究具有一定的創(chuàng)新性，可彌補(bǔ)已有研究當(dāng)中在這方面的不足之處，從而豐富相關(guān)理論體系。

綜上所述，CHC患者血清GP73水平與患者肝功能及HCV-RNA具有一定相關(guān)性，可以為CHC患者的確定和改善預(yù)后提供重要的價(jià)值，具有明顯的診斷和鑒別價(jià)值。