新疆北疆地區(qū)規(guī)?；鰝魅拘誀倥８篂a分析

居馬別克·夏拉巴依，馬曉艷，阿曼古麗·加孜，美熱木古麗·巴依待拉提，任 娟，王 文，李 舵

(1.新疆維吾爾自治區(qū)動物疾病預防控制中心，烏魯木齊 830011)

犢牛腹瀉是多種病因引起的一種臨床常見疾病，也是導致犢牛死亡的重要原因，可以概括的分為非傳染性腹瀉和傳染性腹瀉[1]。非傳染性腹瀉是由飼養(yǎng)管理不善、營養(yǎng)缺失、飼料調配不合理、飼料中毒、天氣變化和長途運輸?shù)炔⒎遣≡腥疽蛩匾鸬母篂a。傳染性腹瀉是由病毒(如冠狀病毒、輪狀病毒)、細菌(如產氣莢膜梭菌、沙門氏菌、大腸桿菌等致病菌)、寄生蟲(如微小隱孢子蟲、球蟲、線蟲)等病原體引起的腹瀉[2，3]。該病在犢牛中均為常見疾病，多發(fā)生于2月齡內的犢牛，造成1月齡以下犢牛死亡的主要原因之一，嚴重時可導致70%的犢牛發(fā)病，病死率高達50%[4，5]。本文選擇新疆北疆地區(qū)9個規(guī)?；?，開展牛傳染性犢牛腹瀉調查與實驗室檢測，分析牛場傳染性犢牛腹瀉發(fā)病情況，為臨床防治提供數(shù)據支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2018年10月31日至2019年6月20日，分別在新疆北疆伊犁州、阿勒泰、塔城每個區(qū)選擇2～3個規(guī)模化養(yǎng)牛場及養(yǎng)殖合作社，以詢問或查閱資料方式，填寫犢牛傳染性腹瀉流行病學調查情況表，重點采集新生犢牛有腹瀉，糞便呈稀軟、水樣狀態(tài)，后期食欲減退，難以站立或出現(xiàn)昏迷等癥狀的樣品，在伊犁州新源縣、塔城市、阿勒泰市的3個種牛場、6個規(guī)模場采集有上述癥狀的牛糞便或肛門拭子樣品共234份。

1.2 試劑和儀器

消化道ELISA抗原檢測試劑盒購自青島瑞爾生物技術有限公司，生產批號:DIG17K30；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、血瓊脂等培養(yǎng)基、蓋玻片、10種藥敏紙片購自烏魯木齊天和眾鑫商貿有限公司；麥康凱瓊脂、SS瓊脂、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、革蘭氏染色試劑盒、焦性沒食子酸購自烏魯木齊牧源康獸藥器械經銷部。

1.3 檢測方法

1.3.1 細菌培養(yǎng)

1.3.1.1 增菌培養(yǎng) 無菌抽取采集阿勒泰地區(qū)、伊犁州新褐牛場、塔城地區(qū)種牛場的犢牛糞便進行增菌培養(yǎng)，無菌取0.5 g接種至9 mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)12～24 h；同時挑取糞便，無菌取0.5 g接種至7 mL厭氣肝湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24～48 h。24 h后觀察是否有菌落產生，如果有，再進行培養(yǎng)、純化。

1.3.1.2 鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng) 繼續(xù)用接種環(huán)無菌取以上兩種培養(yǎng)后的增菌液，每份分別劃線接種在麥康凱瓊脂平板、血瓊脂平板和SS瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24 h。

1.3.1.3 染色鏡檢 以上三種培養(yǎng)基上生長的典型菌落，用接種環(huán)取涂片革蘭氏染色后鏡檢觀察。

1.3.1.4 生化試驗 按照細菌微量生化反應管(購自杭州微生物試劑有限公司)，對分離到的菌株進行生化指標檢測，操作方法與判定結果參照說明書。

1.3.2 藥敏試驗

采用紙片法對分離到的致病菌進行10種常見抗生素藥敏紙片藥敏試驗。按照K-B法試驗要求，每張紙片間距不得少于24 mm，紙片中心距離平皿邊緣不少于15 mm。同時做兩個平板，進行重復試驗，平皿置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察記錄結果。

1.3.3 消化道ELISA與球蟲檢測

采集糞便樣品前處理，按照消化道ELISA抗原檢測試劑盒說明書操作，該試劑盒可以鑒別檢測輪狀病毒、冠狀病毒、大腸桿菌F5(K99)、微小隱孢子蟲，同時采集的樣品用漂浮法對樣品進行球蟲檢測。

2 結 果

近1年時間，奔赴新疆北疆三個地區(qū)，到伊犁州、塔城地區(qū)、阿勒泰地區(qū)的3個種畜場、6個規(guī)模場共9個場點，采集糞便234份，如下表1顯示。

2.1 牛場流行病學調查情況

根據規(guī)?；隽餍胁W調查情況分析發(fā)現(xiàn)，新疆北疆片區(qū)大部分規(guī)模牛場及養(yǎng)牛合作社都有犢牛腹瀉病例發(fā)生，發(fā)病率40%左右、死亡率14%左右。在9個牛場的1月齡以內的犢牛腹瀉2017年的發(fā)病率為45.64%，死亡率為13.67%，2018年的發(fā)病率為39.4%，死亡率為13.87%，2019年4個規(guī)?；龅?月齡以內的犢牛腹瀉發(fā)病率為32.86%，死亡率為14.14%。

2.2 細菌學檢測

2.2.1 細菌培養(yǎng)結果

24 h后觀察菌落形態(tài)，有138份樣品在麥康凱瓊脂平板上出現(xiàn)紅色或粉紅色菌落、有5份出現(xiàn)透明發(fā)白小菌落；有123份樣品在SS瓊脂平板上出現(xiàn)粉紅色菌落、有1份出現(xiàn)透明發(fā)白小菌落，麥康凱和SS瓊脂生長的發(fā)白小菌落在后期增菌培養(yǎng)沒有得到相應菌株，其余4份無菌落；在血瓊脂平板上有15份出現(xiàn)乳白色小菌落β溶血。

2.2.2 鏡檢

在3種鑒別培養(yǎng)基上挑取接種典型的菌落、將菌落涂片革蘭氏染色后鏡檢觀察，大多是短粗狀桿菌，從培養(yǎng)基生長特性和鏡檢結果可確定15株致病性大腸桿菌。如圖1-圖4。

圖1 麥康凱培養(yǎng)基菌落

圖2 SS瓊脂培養(yǎng)基菌落

圖3 致病菌在血瓊脂培養(yǎng)基菌落

圖4 顯微鏡觀察結果（大腸桿菌）

2.2.3 藥敏試驗結果

觀察藥敏片周圍有沒有肉眼可見生長物區(qū)域為抑菌圈，使用游標卡尺測量抑菌圈直徑，根據抑菌圈直徑大小判斷細菌對抗菌藥的敏感性(見表2)，結果分為高敏感、中敏感、耐藥。藥敏試驗結果是大腸桿菌對卡那霉素、磺胺嘧啶、頭孢噻呋敏感、替米考星和氟苯尼考中敏感，其它藥物都表現(xiàn)為耐藥。

表2 藥敏試驗判斷結果

2.3 消化道ELISA抗原檢測結果

由于采集樣品數(shù)量較多，挑取有臨床癥狀非常明顯的樣品，用消化道ELISA抗原試劑盒進行檢測。檢測試劑盒通過用腹瀉病病原特異性抗體包被96孔微量板，抗體可以捕獲糞便中相應的致病病原。

隨機選取不同采集點有腹瀉癥狀的234份樣品，經ELISA檢測，沒有檢測到冠狀病毒抗原，檢測到15份輪狀病毒抗原，檢測到20份微小隱孢子蟲抗原，檢測到7份大腸桿菌F5抗原。其中伊犁州的種牛場、規(guī)模場共47份樣品均沒有檢測到輪狀病毒、冠狀病毒、大腸桿菌F5、微小隱孢子蟲抗原，阿勒泰地區(qū)、塔城地區(qū)牛場檢出不同數(shù)量的大腸桿菌F5、微小隱孢子蟲抗原和輪狀病毒，其中微小隱孢子蟲檢出的陽性率最高，所有糞便樣品檢測結果如下表3、圖5所示。

圖5 北疆規(guī)模化牛場消化道ELISA抗原陽性率結果

表3 新疆北疆三個地區(qū)糞便樣品ELISA檢測結果（份）

3 討論與分析

犢牛傳染性腹瀉是危害犢牛的常見病之一，有明顯的季節(jié)性，常發(fā)于冬季和春季，還可以導致地方性流行［6，7］。本文流行病學調查發(fā)現(xiàn)阿勒泰地區(qū)有的規(guī)模化牛場夏季也有病例發(fā)生(10月份至次年的6月份)。

腹瀉犢牛臨床癥狀主要表現(xiàn)為出現(xiàn)白色或者黃色糞便，水樣棕色糞便為主，發(fā)生的日齡在1～28 d的范圍內。導致犢牛腹瀉的原因很多，其中大腸桿菌是犢牛腹瀉的主要原因之一。大腸桿菌作為腸道菌群的重要組成部分，一般是非致病的，一些特殊血清型的大腸桿菌可導致家畜的腹瀉及敗血，對家畜具有致病性［8，9］。大腸桿菌經藥敏試驗，挑選出卡那霉素、磺胺嘧啶、頭孢噻呋三種高敏感藥物，為臨床提供可行性治療藥物［10］。

從上述三個地區(qū)發(fā)病情況來看，阿勒泰地區(qū)犢牛腹瀉感染陽性率較塔城、伊犁州高，一方面是臨床獲取的樣本量少，臨床判定的疏漏和檢測方法的差異，不能整體反映三個地區(qū)各個牛場陽性率情況；另一方面是和養(yǎng)殖場飼養(yǎng)管理水平有關系，在飼養(yǎng)條件、圈舍消毒、殺蟲、疫病防治等方面都有所改善，犢牛傳染性腹瀉還需與其他常見病開展鑒別診斷。

4 結 論

本次調查新疆北疆規(guī)?；雠魅拘愿篂a感染情況不容忽視，所有樣品經細菌培養(yǎng)檢測到大腸桿菌15株，經藥敏試驗，對磺胺嘧啶、卡那霉素、頭孢噻呋高敏感、替米考星和氟苯尼考中敏感，用消化道ELISA抗原試劑盒沒有檢測到冠狀病毒抗原，檢測到15份輪狀病毒抗原，陽性率為6.41%，20份微小隱孢子蟲抗原，陽性率為8.54%，7份大腸桿菌F5抗原，陽性率為2.99%；所有糞便樣品均沒有檢測到球蟲，此次調查結果可以為北疆牛場犢牛腹瀉提供臨床治療方案。

以上檢測結果分析顯示：經輪狀病毒感染的犢牛樣品主要采自阿勒泰地區(qū)的規(guī)?；B(yǎng)殖場及養(yǎng)殖合作社的一個月齡以內的犢牛都有腹瀉癥狀，大腸桿菌、微小隱孢子蟲感染陽性動物臨床癥狀不明顯。為系統(tǒng)性地研究牛場犢牛腹瀉感染情況，后期加大北疆地區(qū)牛場樣本量，涵蓋引起犢牛腹瀉的檢測項目如牛病毒性腹瀉等，結合飼養(yǎng)管理因素，更能客觀的反映牛場犢牛腹瀉發(fā)生情況，為預防本病發(fā)生提供臨床數(shù)據。