干式免疫熒光法在C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)中的應(yīng)用分析

陳維剛

(瀘縣第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 瀘州 646105)

0 引言

C-反應(yīng)蛋白(CRP) 是一種由肝臟合成的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，與全身性炎癥反應(yīng)過程密切相關(guān)，可激活補(bǔ)體和加強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬而起調(diào)理作用，清除侵入機(jī)體的病原微生物和損傷、壞死、凋亡的組織細(xì)胞，正常人血清含量低于10mg/L。在心肌梗塞、風(fēng)濕活動(dòng)、組織損傷、惡性腫瘤、手術(shù)創(chuàng)傷及各種急性或慢性感染等情況下，CRP 在4-6h 后可迅速增高，隨著病情的好轉(zhuǎn)，又會(huì)迅速下降至正常[1]。因此臨床對(duì)C-反應(yīng)蛋白值進(jìn)行檢測(cè)對(duì)于疾病的輔助診斷及病情的監(jiān)測(cè)具有重要意義。2019 年3 月，我院檢驗(yàn)科引入一臺(tái)國(guó)產(chǎn)干式熒光免疫分析儀進(jìn)行C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)，為探究干式免疫熒光法在C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)中的應(yīng)用效果，本次試驗(yàn)選取我院收治的50 例患者血液標(biāo)本作為觀察對(duì)象，采用干式免疫熒光法與免疫透射比濁法分別檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白并進(jìn)行對(duì)比分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年4 月至2019 年6 月間我院收治的接受C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)的50 例患者血液標(biāo)本作為觀察對(duì)象，50 例患者中有男性31 例，女性19 例，患者的年齡區(qū)間為18-74 歲，平均年齡(40.12±3.32) 歲，患者中病情包括高血壓、腫瘤、各類感染性疾病等，其中腫瘤患者已接受相關(guān)病理學(xué)檢查確診[2]。所有患者均分別接受免疫透射比濁法與干式免疫熒光法C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)。

1.2 方法

檢驗(yàn)前1d 叮囑患者不吃過于油膩、高蛋白食物，避免飲酒，血液中的乙醇成分會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。采血前一天的20:00 以后，應(yīng)開始禁食12 小時(shí)，以免影響檢測(cè)結(jié)果[3]。檢測(cè)當(dāng)天于患者空腹?fàn)顟B(tài)下取靜脈血5mL 分別置于專用檢測(cè)試管中分兩管保存，分別為未抗凝血(3mL) 與EDTA 抗凝血(2mL)，對(duì)未抗凝血進(jìn)行血清分離，其中EDTA 抗凝血用于干式免疫熒光法檢測(cè)，分離血清用于免疫透射比濁法檢測(cè)。分別應(yīng)用干式免疫熒光法與免疫透射比濁法對(duì)所有患者標(biāo)本進(jìn)行C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)。其中干式免疫熒光法檢測(cè)儀器為飛測(cè)FS-301 全自動(dòng)干式熒光免疫分析儀(廣州萬孚生物產(chǎn))，并結(jié)合配套試劑(熒光免疫層析法，批號(hào)：C1940F)、質(zhì)控品，按照SOP 文件及儀器使用說明書進(jìn)行操作；免疫透射比濁法采用BECKMAN COULTER 全自動(dòng)生化分析儀(AU680)，試劑為四川沃文特生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的C-反應(yīng)蛋白測(cè)定試劑盒(批號(hào)：1904011)，按照SOP 文件進(jìn)行操作，對(duì)患者的C-反應(yīng)蛋白進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)所有患者C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)結(jié)果中C-反應(yīng)蛋白值，記錄干式免疫熒光法與免疫透射比濁法檢測(cè)結(jié)果中陽性病例數(shù)的具體情況。在檢測(cè)結(jié)果中，免疫透射比濁法設(shè)定C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)值高于8mg/L 為陽性，干式免疫熒光法設(shè)定C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)值高于10mg/L 為陽性[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

將試驗(yàn)涉及數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)一處理，處理軟件為SPSS 21.00統(tǒng)計(jì)學(xué)信息軟件，輸入數(shù)據(jù)后，計(jì)數(shù)資料與檢驗(yàn)方式分別為χ2、%；計(jì)量資料與檢驗(yàn)方式分別為()、t檢驗(yàn)，P值表示組間數(shù)據(jù)的差異性，P＜0.05 時(shí)組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比兩種方法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白值結(jié)果

免疫透射比濁法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白值結(jié)果明顯低于干式免疫熒光法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白值結(jié)果，(P＜0.05)。見表1。

表1 兩種方法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白值結(jié)果比較

2.2 對(duì)比兩種方法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白陽性率

兩種方法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白陽性率結(jié)果相比無明顯差異，(P＞0.05)；但干式免疫熒光法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白靈敏度略高于免疫透射比濁法。見下表2。

表2 兩種方法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白陽性率對(duì)比

3 討論

C-反應(yīng)蛋白是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，與肺炎鏈球菌C多糖體反應(yīng)形成復(fù)合物，在組織損傷后迅速增加，其作用是激活補(bǔ)體；促進(jìn)單核細(xì)胞對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的破壞作用；促進(jìn)粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)與吞噬；影響淋巴細(xì)胞對(duì)促細(xì)胞分裂物質(zhì)的反應(yīng)性，并與部分T 淋巴細(xì)胞結(jié)合，抑制其功能；抑制混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)；對(duì)血小板凝集和血塊收縮有抑制作用[5-6]。

在當(dāng)前臨床C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)中有血清散射、透射比濁法、免疫熒光法機(jī)免疫擴(kuò)散法、化學(xué)發(fā)光法等多種方法，其中免疫透射比濁法利用抗原抗體反應(yīng)，人血清中C-反應(yīng)蛋白與其相應(yīng)抗體致敏的乳膠顆粒在液相中相遇發(fā)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生凝集，引起濁度上升，通過測(cè)定特定波長(zhǎng)吸光度變化值，與同樣處理的校準(zhǔn)品比較，即可計(jì)算出樣本中C-反應(yīng)蛋白濃度，采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單方便，具有較好的可重復(fù)性，能夠應(yīng)用于大部分批量測(cè)定中，檢測(cè)效果好[7]。干式免疫熒光法(熒光免疫層析法)采用免疫熒光雙抗體夾心法定量測(cè)定全血、血漿、血清樣本中C-反應(yīng)蛋白濃度，當(dāng)樣本與緩沖液混勻，并滴加到測(cè)試卡加樣孔后樣本中的C-反應(yīng)蛋白抗原與熒光標(biāo)記的C-反應(yīng)蛋白抗體結(jié)合形成反應(yīng)復(fù)合物，反應(yīng)復(fù)合物隨層析作用沿硝酸纖維素膜前移，被硝酸纖維素膜檢測(cè)線上的C-反應(yīng)蛋白抗體捕獲，樣本中的C-反應(yīng)蛋白捕獲量與熒光抗體的信號(hào)強(qiáng)度正相關(guān)，通過干式熒光免疫分析儀進(jìn)行檢測(cè)[8]，該方法靈敏度高，所需檢測(cè)血量較少，采用全血即可檢測(cè)，在門、急診快速單個(gè)測(cè)定中適用性較高。C-反應(yīng)蛋白作為一種存在血漿中的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，能夠在機(jī)體受到感染、組織挫傷等情況時(shí)激活補(bǔ)體，使細(xì)胞的吞噬作用增強(qiáng)，能夠有效清除機(jī)體入侵的病原微生物、損傷及凋零的細(xì)胞，從而達(dá)到調(diào)理作用，在機(jī)體的自身免疫調(diào)節(jié)體系中具有至關(guān)重要的作用。近年來，隨著臨床研究的逐漸深入，C-反應(yīng)蛋白在機(jī)體中的作用被越來越重視，C-反應(yīng)蛋白能夠在細(xì)菌感染、炎癥等心血管疾病的發(fā)病中起到關(guān)鍵作用，能夠作為細(xì)菌感染的首選鑒別指標(biāo)[9]。在本次研究中：免疫透射比濁法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白值結(jié)果明顯低于干式免疫熒光法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白值結(jié)果，(P＜0.05)；兩種方法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白陽性率結(jié)果相比無明顯差異，(P＞0.05)；但干式免疫熒光法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白靈敏度略高于免疫透射比濁法。本次試驗(yàn)結(jié)果表明免疫透射比濁法和干式免疫熒光法對(duì)于高血壓、腫瘤、各類感染性疾病的C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)結(jié)果差異并不明顯，因此在臨床應(yīng)用中，可在病情判定及預(yù)后過程中選擇同一種方法，進(jìn)而保證檢驗(yàn)的連貫性，從而減少檢驗(yàn)誤差的產(chǎn)生。

綜上所述，干式免疫熒光法與免疫透射比濁法在C-反應(yīng)蛋白的檢測(cè)中均具有較好的檢測(cè)效果，但干式免疫熒光法在C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)中標(biāo)本用量少，全血標(biāo)本即可檢測(cè)，檢測(cè)速度快，靈敏度高，線性范圍廣，對(duì)于門、急診快速單個(gè)測(cè)定中適用性較高。