無(wú)創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測(cè)篩查胎兒染色體異常的臨床價(jià)值分析

景麗麗 ，胡昭昭

（1.武漢市青山區(qū)婦幼保健院，湖北 武漢 430080；2.武漢市漢陽(yáng)區(qū)婦幼保健院，湖北 武漢 430050）

0 引言

染色體疾病是一大類(lèi)遺傳疾病，不僅危害個(gè)人生長(zhǎng)發(fā)育、智力問(wèn)題，還可能涉及到多個(gè)器官、系統(tǒng)的形態(tài)功能異常。在某些遺傳性疾?。ɡ纾築loom綜合征、范可尼貧血、唐氏綜合征）中，DNA修復(fù)過(guò)程存在缺陷，染色體易發(fā)生突變，因此以上患兒發(fā)生急性白血病及淋巴瘤的危險(xiǎn)性極高，染色體異常的影響不可小覷[1]。據(jù)2012年《中國(guó)出生缺陷防治報(bào)告》顯示，我國(guó)出生缺陷發(fā)生率在5.6%左右[2]，在醫(yī)療衛(wèi)生層面還需提升臨床篩查與診斷能力。處于二級(jí)預(yù)防的無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)是基于細(xì)胞核型水平，對(duì)母體外周血中胎兒的DNA構(gòu)建單倍體型，不僅位點(diǎn)準(zhǔn)確而且準(zhǔn)確度高?；诖?，本文將探討唐篩高風(fēng)險(xiǎn)、MOM值異常等高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)婦的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)，確定精確度的范圍。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取我院于2018年1月至2020年1月收治的82例孕婦為研究對(duì)象，孕周期均滿(mǎn)5周以上，且經(jīng)過(guò)B超檢測(cè)存在胎心和卵黃囊。年齡23～43歲，平均（28.14±5.34）歲，孕周13～26周，根據(jù)孕婦個(gè)人情況分為以下五組：①唐篩高風(fēng)險(xiǎn)組：16例，均篩查血清檢查標(biāo)志物后確定唐篩NTD高風(fēng)險(xiǎn)數(shù)據(jù)[3]；②直接DNA監(jiān)測(cè)組：20例，孕20+6w以上錯(cuò)過(guò)血清學(xué)篩查最佳時(shí)間；③唐篩MOM值異常組：23例，危險(xiǎn)性高于1/270，血漿蛋白a值和絨毛膜促性腺激素等數(shù)值不正常；④B超監(jiān)測(cè)超常組：10例，宮腔內(nèi)可見(jiàn)妊娠殘留物或?qū)m壁可見(jiàn)內(nèi)為混雜回聲的包塊；⑤高齡組：13例。

1.2 方法。無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)法：抽取孕婦肘靜脈血5 mL，離心，提取孕婦血漿中游離態(tài)DNA；使用試劑盒（購(gòu)自于華大生物科技（武漢）有限公司）對(duì)孕婦待測(cè)血清中游離態(tài)的DNA 進(jìn)行測(cè)序，采用最新MGISeq-2000 測(cè)序系統(tǒng)（購(gòu)自華大基因）檢測(cè)，獲取每條染色體上分布的確切的核酸序列，對(duì)樣本序列進(jìn)行比對(duì)，計(jì)數(shù)染色體后生成報(bào)告。羊水/臍血細(xì)胞染色體培養(yǎng)檢查：確定高風(fēng)險(xiǎn)后，在超聲儀器的精準(zhǔn)定位下，針頭穿過(guò)子宮肌層，避免接觸胎兒，且確認(rèn)胎兒有無(wú)異常舉動(dòng)，找準(zhǔn)胎盤(pán)位置，再進(jìn)行穿刺抽取羊水，輔助QF-PCR技術(shù)及CMA芯片批量檢測(cè)細(xì)胞，對(duì)染色體進(jìn)行染色、觀察、分析、審核的操作后，識(shí)別24條染色體形態(tài)特征及顯帶分布，得出診斷比例，當(dāng)比例錯(cuò)誤如母血細(xì)胞的污染需重新取樣。如果錯(cuò)過(guò)最初產(chǎn)檢診斷，采用臍帶血穿刺方式。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 遵循 NIPT最新指南：該指南指出無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)是指針對(duì)羊水/臍血穿刺而言的一種產(chǎn)前保護(hù)性預(yù)判，通過(guò)綜合高通量測(cè)序技術(shù)與遺傳與變異理論基礎(chǔ)，對(duì)18、21、13三對(duì)染色體個(gè)數(shù)進(jìn)行篩查，并報(bào)以謹(jǐn)慎態(tài)度尋其假陽(yáng)性和假陰性的可能[4]。

1.3.2 以完整度高的樣本信息為基礎(chǔ)：首先在首次陽(yáng)性篩查確定高風(fēng)險(xiǎn)后，還需以“金標(biāo)準(zhǔn)”二次復(fù)查，即通過(guò)羊水穿刺對(duì)全基因組的缺失重復(fù)等情況下診斷。其次對(duì)產(chǎn)程需要較好的把握，嚴(yán)格記錄孕周及年齡等一般資料；產(chǎn)后按時(shí)隨訪陰性樣本，結(jié)合影像學(xué)檢測(cè)二次排除陽(yáng)性可能。

2 結(jié)果

2.1 82例孕婦無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)篩查陽(yáng)性情況。五組孕婦中染色體篩查陽(yáng)性的有12例，具體患有的疾病風(fēng)險(xiǎn)分布如表1。

2.2 82例孕婦完善羊水/臍血穿刺后檢查結(jié)果比對(duì)。四者核型在完善羊水/臍血穿刺后檢出率均為100%，無(wú)創(chuàng)檢查21-三體核型異常的準(zhǔn)確率為64.52%；18-三體、13-三體和XXY核型的準(zhǔn)確率分別為83.33%、100.00%、100.00%，見(jiàn)表2。

表1 82例孕婦無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)篩查陽(yáng)性情況

表2 82例孕婦完善羊水/臍血穿刺后檢查結(jié)果比對(duì)

3 討論

為貫徹落實(shí)《健康中國(guó)行動(dòng)（2019-2030年）》，規(guī)范二級(jí)預(yù)防的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)，我們需關(guān)注無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)的適用人群及把控正確率。無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)是將血液中的少量胎兒DNA游離、富集，通過(guò)PCR擴(kuò)增技術(shù)比對(duì)樣本序列，程度較為簡(jiǎn)單[5-6]。相比于以往的血清篩查對(duì)孕周有嚴(yán)格要求，且對(duì)于假陽(yáng)性率為3.5%～8%的局限，無(wú)創(chuàng)檢測(cè)所滿(mǎn)足的孕周范圍更大，滿(mǎn)足12～24周的條件內(nèi)即可得出風(fēng)險(xiǎn)率，且檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血清篩查[7-8]。

本文針對(duì)臨界高風(fēng)險(xiǎn)孕婦作單倍體型的構(gòu)建，高級(jí)篩查出12例單基因遺傳性問(wèn)題，總陽(yáng)性率為14.63%，再對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)人群作羊水或臍血穿刺，以對(duì)全基因組的缺失重復(fù)等情況下作診斷，提示18-三體、13-三體和XXY核型的準(zhǔn)確率分別為83.33%、100.00%、100.00%。這得益于減少了兩次純化的PCR擴(kuò)增最大限度的保留的胎兒游離DNA，減少了樣本間的污染。研究表明，胎兒游離DNA片段長(zhǎng)度較小，純化過(guò)程中更容易丟失，因此通過(guò)簡(jiǎn)化血漿DNA測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建流程使得精準(zhǔn)度增加。而通過(guò)直接建立PCR-free庫(kù)抑制PCR固有慣性擴(kuò)增，改善短片段DNA結(jié)構(gòu)變化的缺陷，可真實(shí)反映原始樣本。此外，無(wú)創(chuàng)DNA對(duì)染色體微缺失或重復(fù)等100多中染色體病同樣具有檢測(cè)效應(yīng)，根據(jù)10余萬(wàn)臨界危險(xiǎn)孕婦檢測(cè)回訪數(shù)據(jù)得，對(duì)某種微缺失疾?。―iGeorge）的檢測(cè)率高達(dá)94.20%，這無(wú)異是跳出了傳統(tǒng)篩查僅可檢測(cè)出21/18/13三體的局限。

站在臨界高風(fēng)險(xiǎn)孕婦的角度而言，無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)帶來(lái)精確度高的同時(shí)也減少了不必要的損傷及風(fēng)險(xiǎn)。孕產(chǎn)婦對(duì)于孕育健康兒童的需求不斷提高，部分孕婦在羊水穿刺可能面臨的流產(chǎn)、感染甚至損傷胎兒的可能性感到恐懼，無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)的出現(xiàn)為不想有創(chuàng)的孕婦提供了第二個(gè)選擇。因此，胎兒游離DNA補(bǔ)缺臨床無(wú)創(chuàng)的篩查空白，起到對(duì)現(xiàn)有診斷技術(shù)體系的有效補(bǔ)充。

綜上所述，無(wú)創(chuàng)DNA的基因檢測(cè)技術(shù)為出生缺陷防控帶來(lái)了極大的積極作用，大大提升了準(zhǔn)確率，推進(jìn)了無(wú)創(chuàng)檢測(cè)的發(fā)展。