宮頸癌中腫瘤免疫細胞浸潤模式與預(yù)后價值分析

余志輝

（佛山市第五人民醫(yī)院，廣東 佛山 528211）

0 引言

本文研究中，采用CIBERSORT法對宮頸癌腫瘤樣本中免疫細胞類型比例進行分析，觀察探討宮頸癌中腫瘤免疫細胞浸潤模式與預(yù)后價值，現(xiàn)在總結(jié)如下。

1 資料及方法

1.1 采集數(shù)據(jù)。通過TCGA官網(wǎng)，即https：//protal.gdc.cancer.gov，下載TCGA-CESC基因表達數(shù)據(jù)與臨床數(shù)據(jù)，共納入238例宮頸癌腫瘤樣本，臨床數(shù)據(jù)涉及有年齡、分期、生存時間、病理學(xué)類型與存活狀態(tài)等。

1.2 腫瘤浸潤免疫細胞組成。采用CIBERSORT法，檢測22種腫瘤浸潤免疫細胞類型在每一個腫瘤組織中的相對分數(shù)，對于CIBERSORT算法，需在1000個排列中，通過LM22標記矩陣中進行計算。借助R軟件，運行CIBERSORT，經(jīng)由CIBERSORT網(wǎng)站（https：//cibersort.stanford.edu）下載源代碼。其中，22種免疫細胞的類型如表1所示。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理。總生存率以診斷日期至死亡日期的時間間隔為準，采用Kaplan-Meier法生成生存曲線，通過Log-rank test法分析差異。Cox回歸分析法，評估免疫細胞的類型、基因表達水平和OS之間的關(guān)系。多因素Cox回歸分析，采用向后LR法予以觀察。通過Spearman的相關(guān)性與統(tǒng)計學(xué)意義評估基因表達以及與免疫細胞的相關(guān)性。采用SPSS 22.0以及GraphPad Prism 5法進行統(tǒng)計學(xué)分析，P＜0.05提示差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料。238例宮頸癌患者，年齡24～87歲，平均（46.92±5.93）歲，121例年齡≤46歲，117例年齡＞46歲。分析組織學(xué)類型、臨床分期，如表2所示。

2.2 宮頸癌腫瘤浸潤免疫細胞。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，宮頸癌腫瘤浸潤免疫細胞中，巨噬細胞所占比例最高，其次是rδT細胞，嗜酸性粒細胞最低。如表3所示。

2.3 宮頸癌中免疫細胞類型和預(yù)后之間的關(guān)系?；罨腃D4+記憶性T細胞高水平，和較長OS存在相關(guān)性（P=0.002）；未活化的CD4+記憶性T細胞高水平，和較短OS存在相關(guān)性（P=0.007）?；罨姆蚀蠹毎咚剑洼^短OS存在相關(guān)性（P=0.004）；未活化的肥大細胞高水平，與較長OS存在相關(guān)性（P=0.018）。CD8+T細胞高水平，和較長OS存在相關(guān)性（P=0.006）。多因素Cox回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于免疫細胞，活化的CD4+記憶性T細胞以及活化的肥大細胞是宮頸癌預(yù)后的獨立因素（P=0.002；P=0.004），如表4所示。

表1 22種免疫細胞類型分析

表2 238例宮頸癌組織學(xué)類型以及臨床分期[n（%）]

表3 宮頸癌腫瘤浸潤免疫細胞的構(gòu)成分析

表4 宮頸癌免疫細胞的多因素Cox回歸分析結(jié)果

2.4 免疫檢查點分子表達和免疫細胞浸潤水平關(guān)系及預(yù)后分析。數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，免疫檢查點分子表達和CD4+記憶性T細胞浸潤水平呈現(xiàn)出正相關(guān)關(guān)系（P＜0.001）；除了CD274，其余免疫檢查點分子表達和活化肥大細胞浸潤水平呈現(xiàn)出負相關(guān)關(guān)系（P＜0.001）。Cox regression單因素分析發(fā)現(xiàn)，PDCD1、ICOS以及CTLA4和宮頸癌的生存存在一定關(guān)系（P＜0.05）。多因素分析發(fā)現(xiàn)，ICOS是宮頸癌預(yù)后的獨立因素（P＜0.05），如表5所示。

表5 免疫檢查點分子多因素分析

3 討論

宮頸癌中95%是由于持續(xù)感染致癌人乳頭瘤病毒所致，控制病毒感染中，免疫系統(tǒng)的作用至關(guān)重要，故而為宮頸癌免疫治療提供可能性[1]。免疫檢查點療法，借助共抑制或者共刺激等信號，調(diào)節(jié)T細胞活性，提高抗腫瘤免疫反應(yīng)，但這一療法總體反應(yīng)率僅僅是17%～27%，治療成本高，存在潛在免疫相關(guān)毒性[2]。故此，尋找預(yù)測免疫治療療效的生物學(xué)標志，成為學(xué)者專家們探討的新課題之一。腫瘤浸潤免疫細胞，是腫瘤微環(huán)境的構(gòu)成要素，和腫瘤細胞增殖、治療反應(yīng)、預(yù)后存在關(guān)聯(lián)[3]。臨床上，關(guān)于腫瘤浸潤免疫細胞在宮頸癌中預(yù)后價值的研究并不多。其中，CIBERSORT，是借助標準化基因表達數(shù)據(jù)，評估免疫細胞組成的一種生物信息學(xué)方法[4]。CIBERSORT，通過反褶積算法，根據(jù)基因表達譜，對不同免疫細胞亞群相對比例進行評估，在一定程度上，可克服免疫組化法存在的缺陷與不足，適用于乳腺癌、腎癌、肺癌以及肝癌與結(jié)直腸癌等[5]。記憶性T細胞浸潤和多種腫瘤存在較好的預(yù)后關(guān)系，是新生物學(xué)標志。宮頸癌研究顯示，記憶性T細胞對白介素2、干擾素r以及腫瘤壞死因子，抑制腫瘤細胞增殖與遷移[6]。本研究表明，高水平活化CD4+記憶性T細胞和高生存率有關(guān)。肥大細胞，屬于先天免疫細胞，可調(diào)節(jié)宿主對癌癥所產(chǎn)生的反應(yīng)，影響預(yù)后。肥大細胞和腫瘤預(yù)后之間的關(guān)系結(jié)果存在差異，不同腫瘤中表現(xiàn)不一。本研究顯示，活化的肥大細胞和較差預(yù)后有關(guān)，可能是因為被激活的肥大細胞分泌出系列因子，與免疫細胞、腫瘤細胞產(chǎn)生相互作用，形成免疫抑制環(huán)境，增強腫瘤細胞活性，預(yù)后欠佳。ICOS屬于T細胞特異性共刺激分子，其扮演著促癌與抑癌的雙重角色[7]。本研究中，ICOS高表達和宮頸癌預(yù)后良好有關(guān)，提示ICOS在宮頸癌中扮演抑癌角色?？傊瑢m頸癌中腫瘤免疫細胞浸潤與預(yù)后有關(guān)，需引起重視。