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    一種棕色、富含γ-氨基丁酸蜜柑醋的制作及其品質(zhì)分析

    2021-06-04 14:03:30趙天行陳福生吳仁蔚陳世貴
    中國釀造 2021年5期

    趙天行,陳福生,陳 濤,吳仁蔚*,陳世貴

    (1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)學(xué)院湖北省傳統(tǒng)發(fā)酵食品國際科技合作基地,湖北 武漢 430070;2.湖北土老憨生態(tài)農(nóng)業(yè)科技股份有限公司,湖北 宜都 443000)

    溫州蜜柑(Citrus unshiu)作為湖北省主栽的一種鮮食水果,營養(yǎng)豐富,具有獨(dú)特的風(fēng)味,蜜柑中含有類胡蘿卜素、維生素、蛋白質(zhì)等多種營養(yǎng)物質(zhì)[1]。由于蜜柑成熟季節(jié)相對集中,鮮果貯藏期短,容易腐爛,導(dǎo)致柑農(nóng)賣果難。同時(shí)果品形狀、大小等品質(zhì)不同,占產(chǎn)量20%~30%的非標(biāo)果也降低了果農(nóng)的收入?;诿鄹痰募庸ぬ攸c(diǎn)開發(fā)高附加值的加工產(chǎn)品是促進(jìn)柑橘產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的有效途徑。以蜜柑作為釀造調(diào)味品和飲料的主要或補(bǔ)充原料,可充分利用蜜柑資源,增加農(nóng)民的收入,而且蜜柑中的功能成分、芳香成分,賦予產(chǎn)品特殊的營養(yǎng)和風(fēng)味[2],可以滿足人們更高層次的需求。

    食醋是以糧食、水果、酒類等含淀粉、糖類、酒精等物質(zhì)為原料發(fā)酵而成的一種酸性調(diào)味品。在數(shù)千年的生產(chǎn)過程中,世界各地形成了各具特色的生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品。中國的四大名醋(山西陳醋、鎮(zhèn)江香醋、福建紅曲醋、四川麩曲醋)和日本的黑醋,是以高粱、稻谷、小麥等谷物為原料釀造的。意大利的香醋、西班牙的雪莉醋和美國的蘋果醋等是以葡萄、蘋果等水果為原料釀造的[3]。按照醋酸發(fā)酵方式,可分為固態(tài)發(fā)酵醋和液態(tài)發(fā)酵醋。固態(tài)醋酸發(fā)酵是中國的獨(dú)特工藝,其產(chǎn)品具有色澤醬紅、風(fēng)味濃郁、口感醇厚、酸味柔和等優(yōu)點(diǎn)[4]。液態(tài)深層發(fā)酵食醋具有生產(chǎn)占地面積小、自動化程度高、勞動強(qiáng)度低、產(chǎn)酸快等優(yōu)點(diǎn),越來越被國內(nèi)食醋生產(chǎn)廠家所采用[5]。然而,液態(tài)發(fā)酵食醋的風(fēng)味單一、酸味刺激性強(qiáng),且色澤寡淡,不符合我國消費(fèi)者的消費(fèi)習(xí)慣[6]。所以目前我國液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)的食醋主要用作原料,通過與傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵食醋混合調(diào)配,或者添加食品增香劑和著色劑等方式來生產(chǎn)低端的食醋產(chǎn)品[7]。因此提高液態(tài)發(fā)酵食醋的風(fēng)味和色澤是我國液態(tài)發(fā)酵食醋迫切需要解決的問題。

    醋酸菌(acetic acid bacteria,AAB)是革蘭氏陰性的專性好氧細(xì)菌,可將糖(主要是單糖和雙糖)、糖醇或其他醇類氧化為相應(yīng)的有機(jī)酸、醛或酮等物質(zhì),是食醋釀造的關(guān)鍵微生物[8]。醋酸菌可產(chǎn)生多種有益的次級代謝產(chǎn)物,如葡萄糖酸、二羥基丙酮、維生素C、果聚糖等。陳亨業(yè)等[9]分離到一株產(chǎn)棕色素,并且風(fēng)味優(yōu)良的醋酸菌—葡糖桿菌(Gluconobactersp.)FBFS 82菌株,并將其應(yīng)用于食醋釀造。

    本研究以葡糖桿菌FBFS 82發(fā)酵柑橘果汁,生產(chǎn)色素發(fā)酵液,與液態(tài)發(fā)酵的原醋進(jìn)行調(diào)配,制作色澤和風(fēng)味優(yōu)良、營養(yǎng)豐富的釀造型蜜柑醋。并對產(chǎn)品的穩(wěn)定性、營養(yǎng)特性進(jìn)行分析,以期改善液態(tài)發(fā)酵食醋存在的色澤寡淡、酸味刺激性強(qiáng)等缺陷。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    葡糖桿菌(Gluconobactersp.)FBFS 82:由本實(shí)驗(yàn)室分離、鑒定并保存[9]。

    柑桔和液態(tài)發(fā)酵的原醋:由湖北土老憨生態(tài)農(nóng)業(yè)科技股份有限公司提供。

    5種液態(tài)發(fā)酵食醋:市售。

    1.2 儀器與設(shè)備

    UV-1750紫外可見分光光度計(jì):日本島津公司;GC-2010-DSQ Ⅱ氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS):美國Agilent 公司;BLBio-10SL液態(tài)發(fā)酵罐:上海百侖生物科技有限公司;Hitachi L-8900氨基酸測定儀:日本日立公司;50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取頭:美國Supelco公司。

    1.3 方法

    1.3.1 色素發(fā)酵液的制備

    柑桔去皮、榨汁,接種10%(V/V)已活化的FBFS 82菌液,于無菌的10 L發(fā)酵罐28 ℃發(fā)酵6 d,對色素發(fā)酵液的總酸、總糖和游離氨基酸進(jìn)行測定。色素發(fā)酵液經(jīng)多層紗布過濾,于密閉容器中,室溫儲存。

    1.3.2 蜜柑醋的配制

    將液態(tài)發(fā)酵的原醋、色素發(fā)酵液和無菌水進(jìn)行調(diào)配,制備蜜柑醋,使其酸度為5 g/100 mL,色素發(fā)酵液體積分?jǐn)?shù)分別為10%、15%、20%和25%(以蜜柑醋A、B、C和D表示)。蜜柑醋以封口的透明玻璃瓶盛裝,于自然條件下儲存。

    1.3.3 測定方法

    總酸測定:參照參考文獻(xiàn)[10]的方法;總糖測定:參照參考文獻(xiàn)[11]的方法。

    蜜柑醋的感官特性:參考GB/T 18187—2000《釀造食醋》對蜜柑醋的感官特性進(jìn)行評價(jià)[12]。

    色澤穩(wěn)定性:蜜柑醋在自然條件下儲存至60 d,每10 d取樣一次,檢測其色素在波長440 nm處的吸光度值(OD440nm值)[13],評價(jià)色素的穩(wěn)定性。

    游離氨基酸的測定:參考GB/T 30987—2020《植物中游離氨基酸的測定》[14],對色素發(fā)酵液、液態(tài)發(fā)酵的原醋,以A和C為代表的蜜柑醋進(jìn)行游離氨基酸的測定。

    揮發(fā)性成分分析:參考楊馥秀等[15]的方法,并略作改動,采用頂空固相微萃取與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法(headspace solidphasemicroextraction-gaschromatography-massspectrometry,HS-SPME-GC-MS)分析蜜柑醋中的揮發(fā)性成分。

    HS-SPME參數(shù)條件:取8mL稀釋后的蜜柑醋,加入20mL頂空瓶,并加入3.0 g氯化鈉,于60 ℃以200 r/min磁力攪拌,平衡15 min。將已活化的萃取頭插入頂空瓶中,推出纖維頭,吸附40 min。

    GC-MS參數(shù)及分析條件:GC進(jìn)樣口250 ℃,采用不分流進(jìn)樣,5 min后吹掃流量20 mL/min;載氣為高純氦氣,柱流量為1 mL/min;毛細(xì)管色譜柱為Agilent HP-5ms(30 m×250 μm×0.25 μm);離子源溫度230 ℃,單四極桿溫度150 ℃,離子傳輸管溫度280 ℃,電子電離(electron ionization,EI)源,電子能量70 eV,質(zhì)量掃描范圍35~600 m/z,全掃描模式。優(yōu)化后的程序升溫條件為:初始溫度40 ℃,保持5 min,以5 ℃/min 速率升至120 ℃,保持2 min;以5 ℃/min 升至140 ℃后再以10 ℃/min 升至250 ℃,保持1 min。后運(yùn)行條件為250 ℃,5 min。

    將測得物質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫NIST 8(national institute of standards and technology)中進(jìn)行對比分析,以匹配度大于80確證所檢出的各種化學(xué)成分。

    采用環(huán)己酮作為內(nèi)標(biāo)物,各化合物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比計(jì)算各化合物的含量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 色素發(fā)酵液的理化指標(biāo)分析

    對FBFS 82發(fā)酵柑橘汁的色素發(fā)酵液的理化指標(biāo)進(jìn)行分析,總糖含量為7%,總酸含量為1.23 g/100 mL,pH值為2.45,游離氨基酸含量為3693.43 mg/100 mL,其中γ-氨基丁酸含量為1 769.90 mg/100 mL。

    2.2 蜜柑醋的感官特性

    由圖1可知,液態(tài)發(fā)酵的原醋為淡黃色,滋味寡淡,有明顯的醋酸的刺激性氣味。蜜柑醋A為琥珀色,隨著色素發(fā)酵液含量的增加,顏色逐步加深,蜜柑醋D為紅棕色。與市售的5款液態(tài)發(fā)酵食醋相比,蜜柑醋的色澤有光鮮感,更誘人。同時(shí)蜜柑醋的滋味和氣味更豐富。蜜柑醋B、C、D均具有明顯的醬香味,酸味柔和,所有蜜柑醋均無異味。結(jié)果表明隨著色素發(fā)酵液含量的增加,感官特性明顯得到改善。

    圖1 蜜柑醋與幾種市售食醋色澤的比較Fig.1 Comparison of color between citrus vinegar and several commercial vinegar products

    2.3 蜜柑醋的色澤穩(wěn)定性

    由圖2可知,在自然條件下儲存,蜜柑醋A、B、C和D的OD440nm值均沒有明顯變化,說明葡糖桿菌FBFS 82的色素穩(wěn)定,光照、低酸對其色澤無影響。而且蜜柑醋體態(tài)透明澄清,僅蜜柑醋D有少量懸浮的顆粒。可能是因?yàn)樯匕l(fā)酵液未經(jīng)過過濾、澄清等處理。

    圖2 蜜柑醋的色澤穩(wěn)定性評價(jià)Fig.2 Evaluation of color stability of citrus vinegar

    2.4 蜜柑醋的氨基酸種類與含量

    對液態(tài)發(fā)酵的原醋,以蜜柑醋A和C為代表進(jìn)行氨基酸含量測定,結(jié)果見表1。

    表1 蜜柑醋游離氨基酸的種類與含量Table 1 Types and contents of free amino acid in citrus vinegar

    續(xù)表

    由表1可知,液態(tài)發(fā)酵的原醋中檢測到12種游離氨基酸(包括7種必需氨基酸),氨基酸總含量為(47.26±6.18)mg/100g。蜜柑醋A和C均含有18種游離氨基酸,組成蛋白質(zhì)的氨基酸為17種,含量分別為(892.46±19.1)mg/100 g和(1 811.90±22.72)mg/100 g,其中包含人體必需的8種氨基酸。李婷等[16]對我國四大名醋進(jìn)行分析,氨基酸含量分別為山西老陳醋(227.32~331.15)mg/100 mL、保寧醋(188.27~208.29)mg/100 mL、鎮(zhèn)江香醋(127.58~141.44)mg/100 mL,永春老醋(82.95~96.33)mg/100 mL。白燁[17]以巴氏醋桿菌單獨(dú)發(fā)酵,以及巴氏醋桿菌與植物乳桿菌混合發(fā)酵柑橘汁制備果醋,其游離氨基酸均為17種,含量分別為314.43 mg/100 g和322.92 mg/100 g。孫曉昕等[18]對市售的27種果醋進(jìn)行測定,僅4種檢測到低含量的游離氨基酸。上述結(jié)果表明,蜜柑醋在營養(yǎng)成分——游離氨基酸方面具有明顯的優(yōu)勢,而且蜜柑醋A和C(以氨基酸態(tài)氮計(jì))分別達(dá)到了鎮(zhèn)江香醋的一級產(chǎn)品和特級產(chǎn)品的水平[19]。

    此外,在蜜柑醋A和C中分別檢測到(182.27±8.68)mg/100 mL,(383.19±8.27)mg/100 mL的功能成分γ-氨基丁酸,γ-氨基丁酸的含量與色素發(fā)酵液的含量呈正比,而液態(tài)發(fā)酵的原醋中未檢測到該組分,說明γ-氨基丁酸來自色素發(fā)酵液。

    根據(jù)游離氨基酸風(fēng)味強(qiáng)度,將對風(fēng)味有貢獻(xiàn)的氨基酸分為鮮味氨基酸、甜味氨基酸和苦味氨基酸[20]。在檢測的蜜柑醋A和C中,甜味氨基酸占比為(與組成蛋白質(zhì)的氨基酸之比)均為65%;鮮味氨基酸占比分別為的15%和16%;苦味氨基酸的占比分別為18.45%和17.29%。說明蜜柑醋中呈味氨基酸多樣化,其滋味豐富。

    上述結(jié)果充分說明色素發(fā)酵液營養(yǎng)豐富,在氨基酸的種類和含量方面具有明顯的優(yōu)勢,特別是富含功能成分γ-氨基丁酸。γ-氨基丁酸在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中具有營養(yǎng)作用,是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子,同時(shí)也是強(qiáng)神經(jīng)抑制性氨基酸,具有鎮(zhèn)靜、降血壓、降低血氨、提高腦活力、促進(jìn)乙醇代謝、參與組織再生等多種生理作用[21-23]。本研究制作的釀造型蜜柑醋不僅可以用于飲料和調(diào)味料的二次開發(fā),在進(jìn)一步拓展保健醫(yī)藥作用方面具有良好的前景。

    2.5 蜜柑醋揮發(fā)性成分測定

    以蜜柑醋A和C為代表,采用HS-SPME-GC-MS對其揮發(fā)性成分進(jìn)行分析,經(jīng)NIST8譜庫檢索識別,鑒定出的揮發(fā)性成分及其含量見表2。

    表2 蜜柑醋A和C的揮發(fā)性成分及含量Table 2 Volatile components and contents in citrus vinegar A and C

    續(xù)表

    蜜柑醋A檢測到51種揮發(fā)性物質(zhì),包括酸類6種、酯類13種、醇類4種、醛類7種、酮類6種、酚類3種和其他物質(zhì)12種。蜜柑醋C檢測到60種揮發(fā)性物質(zhì),包括酸類7種、酯類18種、醇類4種、醛類9種、酮類5種、酚類5種和其他物質(zhì)12種。隨著色素發(fā)酵液含量的增加,揮發(fā)性香氣物質(zhì)的種類,說明色素發(fā)酵液提供了更多的香氣成分。

    酸味是食醋最基礎(chǔ)的味道,酸類也是影響食醋風(fēng)味和品質(zhì)的一類化合物[24]。蜜柑醋A和C中,共有的酸味物質(zhì)主要有醋酸、(-)-乙?;?l-酒石酸、辛酸等。醋酸是刺激氣味強(qiáng)烈的酸,是食醋經(jīng)典的氣味;而辛酸具有奶酪味及少許的澀味。根據(jù)其他學(xué)者對永春香醋和永春老醋[25]、水塔陳醋[15]等的分析,辛酸與食醋香氣有較高的相關(guān)性[26]。酯類化合物在香味的組成中占有特別重要的地位,大多具有花香、果香、酒香或蜜香香氣,是評價(jià)食醋產(chǎn)品的一個(gè)主要指標(biāo)。蜜柑醋A和C中酯類物質(zhì)的種類和含量在所有揮發(fā)性成分中占比最高,特別是乙酸乙酯,乙酸乙酯是引起果醋的發(fā)酵風(fēng)味的物質(zhì)之一[27]。此外,蜜柑醋中還含有豐富的醇酚類、醛酮類和雜環(huán)類等化合物,如乙偶姻、苯乙醇、壬醛、糠醛等,這些化合物共同賦予了蜜柑醋獨(dú)特的香味與營養(yǎng)[28-29]。其中乙偶姻作為一種食用級的香料,應(yīng)用廣泛[30];苯乙醇具有獨(dú)特風(fēng)味,如玫瑰香、紫羅蘭香、茉莉花香等[31];壬醛等醛類物質(zhì)具有良好的風(fēng)味特征,具有玫瑰花香[32]。

    3 結(jié)論

    本研究以葡糖桿菌FBFS82的色素發(fā)酵液與液態(tài)發(fā)酵的原醋調(diào)配制備蜜柑醋,結(jié)果表明,調(diào)配后能顯著改善產(chǎn)品的感官特性和營養(yǎng)特性。其中,含10%(V/V)色素發(fā)酵液的蜜柑醋A,色澤濃郁,優(yōu)于市售的5款液態(tài)發(fā)酵食醋;蜜柑醋A和C的游離氨基酸含量,達(dá)到(892.46±19.1)mg/100 g和(1 811.90±22.72)mg/100 g,特別是其富含具有生理活性的成分——γ-氨基丁酸((182.27±8.68)mg/100 mL和(383.19±8.27)mg/100 mL);蜜柑醋A和C分別含有51種和60種揮發(fā)性物質(zhì),包括酸類、酯類、醇類、醛類、酮類、酚類和其他物質(zhì),其中賦予香氣的酯類成分含量最高。本研究制作的蜜柑醋是色、香、味和營養(yǎng)俱佳的釀造型果醋。

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