血清半乳糖凝集素-9水平與宮頸癌患者化療耐藥性的相關(guān)性

李艷

(長(zhǎng)垣市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 新鄉(xiāng) 453400)

化療是部分中期和晚期患者主要治療方法之一，可有效緩解患者主要癥狀，延長(zhǎng)生存時(shí)間，并為尚可接受手術(shù)治療的患者提供機(jī)會(huì)[1]。但有部分宮頸癌患者會(huì)出現(xiàn)化療耐藥性，導(dǎo)致治療效果下降，甚至治療失敗，從而影響疾病恢復(fù)[2]。因此，早期預(yù)測(cè)、判斷患者化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)很有必要。研究[3]表明，腫瘤對(duì)化療的耐藥與細(xì)胞凋亡抑制、表觀遺傳學(xué)及DNA損傷修復(fù)機(jī)制等多個(gè)方面有關(guān)。目前，臨床已有研究[4]指出，P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-trans-ferase，GST)與宮頸癌化療耐藥有關(guān)，但具體機(jī)制也仍尚未明確，且上述指標(biāo)檢測(cè)操作復(fù)雜，不易檢測(cè)。半乳糖凝集素(galectin，Gal)是動(dòng)物凝集素家族的成員之一，其在腫瘤、免疫等信號(hào)傳導(dǎo)中占據(jù)重要角色，尤其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用[5]。其中Gal-9是Gal家族成員之一，可參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、腫瘤轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)活動(dòng)[6]。由此推測(cè)，宮頸癌患者血清Gal-9水平與宮頸癌患者化療耐藥性可能存在一定關(guān)系。本研究選取120例宮頸癌患者作為研究對(duì)象，重點(diǎn)分析宮頸癌患者血清Gal-9水平與宮頸癌化療耐藥性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年1月至2019年12月長(zhǎng)垣市人民醫(yī)院接受化療的120例宮頸癌患者作為研究對(duì)象，年齡43～55歲，平均(49.12±1.63)歲；鱗癌930例，腺癌27例；根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)[7]病理分期標(biāo)準(zhǔn)：ⅡB期11例，Ⅲ期40例、Ⅳ期69例。全部患者及其家屬均簽署研究同意書。本研究獲得長(zhǎng)垣市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[8]中宮頸癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)宮頸活檢、陰道鏡等檢查確診；②首次接受化療；③腫瘤分期≥ⅡB期。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①近2周內(nèi)使用抗生素治療；②合并尿毒癥、糖尿??；③急性附件炎、盆腔炎等；④經(jīng)期或?qū)m腔流血量較多；⑤伴有真菌、細(xì)菌感染急性期等急性炎癥疾?。虎奁渌l(fā)性惡性腫瘤；⑦既往有盆腹腔手術(shù)史；⑧既往有放、化療史。

1.3 方法

1.3.1化療方法 全部患者均接受TP化療方案：采用全身靜脈滴注化療，紫杉醇(海口市制藥廠有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字10980170，規(guī)格30 mg∶5 mL)135 mg·m-2～175 mg·m-2+順鉑(云南植物藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H53021740，規(guī)格2 mL∶10 mg)75 mg·m-2，每3周進(jìn)行1次，3周為1個(gè)療程，共化療4個(gè)療程，每個(gè)療程之間間隔10 d。

1.3.2化療耐藥性評(píng)估及分組方法 化療結(jié)束后，結(jié)合婦科和影像學(xué)檢查判定耐藥性情況。評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)[9]：完全緩解(complete remission，CR)為腫瘤體積肉眼完全消失，持續(xù)至少1個(gè)月；部分緩解(partial response，PR)為腫瘤體積縮小>50%，且無新發(fā)病灶，持續(xù)至少1個(gè)月；腫瘤穩(wěn)定(stable disease，SD)為腫瘤體積縮小<50%，但無新發(fā)病灶，持續(xù)至少1個(gè)月；腫瘤進(jìn)展(progression disease，PD)為腫瘤體積無縮小或有新發(fā)病灶。將療效為CR和PR的患者納入敏感組，SD、PD患者納入耐藥組。

1.3.3基線資料調(diào)查方法 自制基線資料調(diào)查問卷，記錄患者一般情況，包括年齡、體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤直徑、病理類型、飲酒史(飲酒時(shí)間>5 a，每次攝入酒精量>10 g)、吸煙史(連續(xù)或累計(jì)吸煙6個(gè)月或以上)。

1.3.4實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)方法 (1)血清Gal-9：分別采集患者化療前清晨空腹靜脈血3 mL，進(jìn)行離心處理，以3 500 r·min-1的離心速度共離心15 min，離心完畢后取上清液待檢。使用武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司的試劑盒，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清Gal-9水平。(2)腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)：分別采集患者化療前的空腹外周靜脈血，進(jìn)行離心處理，設(shè)置離心速度為2 000 r·min-1，共離心30 min，離心完畢后取上清液待檢。選用上海晶抗生物工程有限公司提供的試劑盒，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)定TNF-α水平。(3)血清糖類抗原(carbohydrate antigen，CA)125、CA199：采集患者清晨空腹靜脈血5 mL，進(jìn)行離心處理，設(shè)置離心速度為8 000 r·min-1，共離心6 min，離心完畢后取上清液待檢。使用上海酶聯(lián)生物的試劑盒測(cè)定血清CA125、CA199水平。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌化療耐藥性情況本研究納入的120例患者中，經(jīng)4個(gè)療程化療后，有43例CR，53例PR，17例SD，7例PD，分別為35.83%(43/120)、44.17%(53/120)、14.17%(17/120)、5.83%(7/120)。

2.2 不同化療耐藥患者的基線資料、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)耐藥組血清Gal-9水平低于敏感組，TNF-α水平高于敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，組間其他資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組不同化療耐藥情況患者基線資料、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

2.3 宮頸癌患者化療耐藥與血清Gal-9、TNF-α的相關(guān)性分析經(jīng)Kendall’s tau-b相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，宮頸癌化療耐藥與血清Gal-9水平呈負(fù)相關(guān)(r<0，P<0.05)，與TNF-α水平呈正相關(guān)(r>0，P<0.05)。見表2。

表2 宮頸癌患者化療耐藥與血清Gal-9、TNF-α的相關(guān)性分析結(jié)果

2.4 血清Gal-9、TNF-α水平預(yù)測(cè)宮頸癌患者化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)的效能分析將宮頸癌患者化療前的血清Gal-9、TNF-α水平作為檢驗(yàn)變量，化療耐藥性情況作為狀態(tài)變量(1=耐藥，0=敏感)，繪制ROC曲線，結(jié)果顯示，血清Gal-9、TNF-α水平預(yù)測(cè)宮頸癌患者化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)的AUC均>0.70，預(yù)測(cè)價(jià)值較理想，且血清Gal-9的預(yù)測(cè)AUC高于TNF-α。見圖1。各指標(biāo)對(duì)應(yīng)最佳閾值、特異度、敏感度及約登指數(shù)見表3。

表3 血清Gal-9、TNF-α水平預(yù)測(cè)宮頸癌患者化療耐藥性高風(fēng)險(xiǎn)的效能分析結(jié)果

Gal-9為半乳糖凝集素-9；TNF-α為腫瘤壞死因子-α。

3 討論

有研究指出，化療雖是宮頸癌主要治療手段之一，但部分患者仍對(duì)藥物的應(yīng)用存在耐藥情況，這將影響化療效果；化療耐藥的存在，不僅影響化療效果，同時(shí)患者在治療期間因?qū)λ幬锊幻舾?，還可能存在耽誤治療，導(dǎo)致疾病進(jìn)一步進(jìn)展的情況發(fā)生[10-11]。為降低宮頸癌患者化療耐藥性，可早期預(yù)測(cè)患者化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)，并給出針對(duì)性建議。

吳少敏等[12]研究指出，30%左右的中晚期宮頸癌患者存在化療耐藥現(xiàn)象。本研究結(jié)果顯示，化療后，出現(xiàn)化療耐藥的患者24例，耐藥率為20.00%，低于上述研究結(jié)果，分析原因可能與本研究納入的樣本量、入選標(biāo)準(zhǔn)限制等原因有關(guān)。但仍表明宮頸癌患者化療耐藥性較高，腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)高，故本研究著重分析可能與宮頸癌化療耐藥相關(guān)的因子。研究指出，免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡等機(jī)制在調(diào)節(jié)機(jī)體抗腫瘤免疫的同時(shí)，還參與調(diào)控腫瘤化療耐藥[13]。TNF-α是一種炎癥因子，可促進(jìn)T細(xì)胞合成分泌多種炎癥因子，繼而引發(fā)炎癥反應(yīng)，且TNF-α在腫瘤耐藥方面也發(fā)揮關(guān)鍵作用[14]。研究指出，抑制TNF-α可增強(qiáng)抗癌藥物在腫瘤細(xì)胞中的敏感性[15-16]，分析機(jī)制可能與抑制TNF受體、絲/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白、核因子-κB信號(hào)通路有關(guān)。TNF-α在本研究被證實(shí)與化療耐藥有關(guān)，但該指標(biāo)檢測(cè)時(shí)容易受其他感染性疾病、患者自身情況等多種因素影響，早期應(yīng)用價(jià)值不高，所以本研究未將其作為主要的指標(biāo)說明。

半乳糖凝集素在多種動(dòng)物體內(nèi)廣泛存在，對(duì)β半乳糖苷具有特殊的親和力，在細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)等多種生理、病理過程中發(fā)揮重要作用。Gal-9是半乳糖凝集素家族的成員之一，是T細(xì)胞黏蛋白-3(T-cell Ig-mucin-3，Tim-3)的天然配體，二者結(jié)合后可誘導(dǎo)免疫耐受，抑制輔助性T細(xì)胞1和輔助性T細(xì)胞12細(xì)胞因子釋放，并促使調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)展，激活抗病原體的免疫系統(tǒng)，從而抑制TNF-α、白細(xì)胞介素-12等炎癥因子的表達(dá)上調(diào)[17]。同時(shí)，研究指出，細(xì)胞凋亡機(jī)制在腫瘤發(fā)生發(fā)展和化療耐藥等方面占據(jù)重要角色[18]。而Gal-9可與細(xì)胞外和細(xì)胞表面糖蛋白、糖脂上的特殊糖類配體相互結(jié)合，繼而控制細(xì)胞凋亡。因此，結(jié)合上述，推測(cè)Gal-9與宮頸癌化療耐藥性存在一定的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，耐藥組血清Gal-9水平低于敏感組，且經(jīng)Kendall’s tau-b相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，宮頸癌化療耐藥與血清Gal-9水平呈負(fù)相關(guān)。分析血清Gal-9異常表達(dá)影響患者化療耐藥的可能原因如下：Gal-9能夠抑制脂多糖所引起TNF-α和IL-12等炎癥因子的合成分泌，阻止大量TNF-α釋放，從而減少由TNF-α所引起的化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)[19]。并且，Gal-9可通過半胱天冬酶8、9、3參與的細(xì)胞凋亡途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制，而半胱天冬酶結(jié)構(gòu)缺陷和激活阻斷等因素可導(dǎo)致對(duì)化療藥物的抵抗和耐受，因而Gal-9降低可導(dǎo)致化療耐藥[20]。最后本研究對(duì)血清Gal-9預(yù)測(cè)患者化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)繪制了ROC曲線，結(jié)果顯示，血清Gal-9預(yù)測(cè)宮頸癌患者化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)的AUC>0.80。上述結(jié)果證實(shí)，血清Gal-9低表達(dá)與宮頸癌患者化療耐藥有關(guān)。雖本研究得到了血清Gal-9與腫瘤化療耐藥存在相關(guān)性，但該相關(guān)性結(jié)果可能受納入樣本量、納入標(biāo)準(zhǔn)等因素影響，導(dǎo)致研究結(jié)果呈弱相關(guān)性，相關(guān)性較低，加之目前與之相關(guān)的研究較少，尚無較多的循證學(xué)結(jié)果可以支持本研究結(jié)論，二者間具體的關(guān)系仍需要在未來展開大樣本、前瞻性、多中心的研究加以明確。

綜上所述，宮頸癌患者化療實(shí)施前血清Gal-9表達(dá)與化療耐藥存在一定聯(lián)系，臨床可考慮通過檢測(cè)宮頸癌患者化療前血清Gal-9表達(dá)，輔助評(píng)估分析患者化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)。