2013-2020年廣西東興市禽流感病毒的監(jiān)測和分析

曹顯永,鄧佩文,童 彬,曹國敏

（1.廣西壯族自治區(qū)東興市動物疫病預防控制中心，廣西 東興 538100；2.廣西壯族自治區(qū)防城港市畜牧站，廣西 防城港 538001）

東興市位于廣西壯族自治區(qū)南部，與越南的芒街口岸經(jīng)濟特區(qū)僅一河之隔。東興市沿邊、沿江又沿海，中越邊境貿(mào)易與民間交往非常頻繁，動物及動物產(chǎn)品流通給邊境動物疫病防控帶來隱患。東興市境內(nèi)的北侖河口國家級自然保護區(qū)是國際間候鳥遷徙的重要通道，是候鳥的重要繁殖地和遷徙停歇地，這也給東興市的禽流感防控帶來了壓力。

多年來，東興市一直是中越邊境重大動物疫病防控阻截帶建設項目實施地，從2013年開始，國家和自治區(qū)就在東興市的養(yǎng)殖場、活禽銷售市場和候鳥棲息地開展禽流感監(jiān)測和流行學調(diào)查?，F(xiàn)將監(jiān)測和流行病學調(diào)查結(jié)果進行分析，以期掌握東興市的禽流感流行狀況。

1 材料與方法

1.1 材料

H1—H16亞型禽流感標準陽性血清由中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供；RNA提取試劑盒TaKaRa MiniBEST ViralRNA/DNA Extraction KitVer.5.0：購自大連寶生物工程有限公司；禽流感病毒H1～H16亞型核酸檢測試劑盒（熒光PCR 法）：購自上海之江生物科技股份有限公司；SPF雞胚：購自北京梅里亞維通實驗動物技術(shù)有限公司。

1.2 樣品采集

2013年12月～2020年10月，在東興市的6個活禽交易市場、10個鴨場和9個雞場以及北侖河口自然保護區(qū)，共采集樣品 6161份，其中包括4830份家禽拭子，1331份環(huán)境拭子(包含飲水、籠具、地面、污水、野鳥糞便等)。

1.3 病原分離和鑒定

病毒分離和鑒定：在哈爾濱國家禽流感參考試驗室進行。將拭子樣品接種SPF雞胚進行增毒，再用血凝試驗（HA）、血凝抑制試驗（HI）和熒光RT-PCR 方法鑒定流感病毒及亞型。

1.4 統(tǒng)計分析方法

利用 Microsoft Excel軟件對病毒分離率分別按照樣品來源地區(qū)、樣品采集時間、樣品采集地點和樣品來源禽類等進行分類統(tǒng)計和分析。

2 結(jié)果

2.1 禽流感病毒監(jiān)測總體情況

從2013年10月到2020年10月份，共進行了25次采樣，共采集樣品6161份，共分離到禽流感病毒796株，陽性率為12.92%，分離到病毒亞型有H1、H3、H4、H6、H7、H9、H10 和 H11 等多種亞型，其中以 H3、H6和H9亞型最多。

2.2 禽流病毒的分布特征

2.2.1 時間分布。東興市一年四季都有病毒循環(huán)，10-12月份樣品的陽性率處在一個較高的水平，5-6月份樣品的陽性率較低。詳見圖1。

圖1 東興市AIV時間分布情況

如果按季節(jié)區(qū)分，春季（1～3月）病毒分離率為9.78%（125/1278），夏季（4～6 月）為 7.77%（126/1622），秋季（7～9 月）為 13.56%（61/450），冬季（10～12 月）為17.22%（484/2811）。夏季的病毒分離率最低，顯著低于冬季。

2.2.2 空間分布。在禽流感監(jiān)測中，只有在活禽交易和養(yǎng)殖環(huán)節(jié)檢測到AIV，而在候鳥棲息地沒有檢測到AIV。

在活禽市場分離到763株AIV病毒，陽性率為21.72%，市場場間陽性率為100%(6/6)。市場環(huán)境AIV陽性率（30.82%）顯著高于市場中家禽AIV陽性率（20.77%），表明AIV在市場環(huán)境中的循環(huán)蓄積嚴重。

在養(yǎng)殖場分離到33株病毒，陽性率為2.00%。其中，雞場陽性率為0.13%（1/751），雞場場間陽性率為11.11%（1/9）；鴨場陽性率為 3.56%（32/899），鴨場場間陽性率為60.00%(6/10)。

2.2.3 群間分布。分離出病毒的陽性樣品來源包括：雞、鴨、鵝和環(huán)境，水禽樣品的陽性率顯著高于雞(見圖2)，不同種類的家禽分離出禽流感病毒亞型及陽性率有所不同。雞樣品分離到的病毒亞型：H3、H4、H6、H9、H10，陽性率為 7.12%（157/2206）；鴨樣品分離到的病毒亞型：H1、H3、H6、H7、H9、H11 等， 陽性率為32.13%（440/2168）；鵝樣品分離到的病毒亞型：H3、H6、H9 等，陽性率為 21.27%（97/456）。

圖2 東興市AIV群間分布情況

3 討論

根據(jù)東興市的禽流感監(jiān)測結(jié)果顯示，活禽銷售市場禽流感病毒陽性率 （21.72%）顯著高于養(yǎng)殖場(2.00%)，這說明活禽銷售市場流感病毒污染嚴重,是禽流感傳播的高風險點。而候鳥棲息地沒有檢出病毒，這是因為采樣偏差，還是如雷富民、趙德龍等[1-2]提出的很難斷定候鳥在禽流感傳播過程中的作用，這需要繼續(xù)跟蹤監(jiān)測和調(diào)查。

水禽樣品禽流感樣品陽性率（20.46%）顯著高于雞的陽性率(7.12%),養(yǎng)殖環(huán)節(jié)分離的AIV幾乎都來源于水禽，而且一些亞型禽流感病毒(如H3、H6)也以水禽來源為主，這表明一些亞型AIV對宿主有一定的偏嗜性，也揭示水禽是流感病毒的重要宿主[3-4]。另外，我們的監(jiān)測調(diào)查結(jié)果表明水禽免疫率都相對較低，抗體水平不高，所以水禽在禽流感的傳播過程中是較為主要的傳播宿主[5]，水禽的免疫工作不容忽視。

根據(jù)東興市歷年氣象統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，12月至次年2月是一年中溫度較低的時期，其中1月份的平均氣溫最低，低溫有利于禽流感病毒的生存。但監(jiān)測結(jié)果顯示，10月和11月份的病毒分離率最高，而且在4月份和9月份也有一個不小的升幅。這幾個月病毒分離率的升高都發(fā)生在活禽市場，原因有以下幾點：一是家禽的集中上市。東興市的小規(guī)模養(yǎng)殖場（戶）一般都是在4-5月份期間進苗飼養(yǎng)，肉雞養(yǎng)殖150天左右上市，而蛋鴨一般在產(chǎn)蛋期結(jié)束后銷往市場；二是節(jié)假日消費需求量增大，4月前后有清明節(jié)和勞動節(jié)，9月份過后有國慶節(jié)和中秋節(jié)。節(jié)日前，百姓往往準備大量的食材，以備歡慶聚餐食用，使得家禽的流通量大增[4]。這幾個月氣溫較低，加之市場不休市、清洗消毒，節(jié)日過后市場里的病毒依然存在。這說明氣溫不是決定AIV分布的唯一因素，需要綜合考慮社會、環(huán)境和經(jīng)濟等多方面因素。

4 結(jié)論

經(jīng)過長期系統(tǒng)的監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，東興市活禽市場和養(yǎng)殖場均有禽流感病毒循環(huán)，多種亞型病毒共存。活禽市場污染嚴重，水禽隱性帶毒現(xiàn)象嚴重，因此活禽市場和水禽養(yǎng)殖場是東興市禽流感防控的關(guān)鍵。同時東興市處于邊境和候鳥遷徙線上，地理位置特殊。因此需要對東興市的禽流感防控多加重視，加強針對禽流感的監(jiān)測力度，提高市場的動物衛(wèi)生監(jiān)管，加強水禽的免疫力度。