HIV感染急性期及慢性期T淋巴細(xì)胞對(duì)HBV反應(yīng)能力的比較研究

朱志強(qiáng)，宋 兵，姜太一，汪 雯，張 愚

由于HIV與HBV具有相同的傳播途徑，HIV合并HBV感染比較常見。目前HIV合并HBV感染對(duì)HIV疾病進(jìn)程的影響報(bào)道不一[1-2]，有些研究認(rèn)為合并HBV感染對(duì)HIV疾病的進(jìn)程沒有影響，有些報(bào)道認(rèn)為合并HBV感染促進(jìn)了HIV疾病的進(jìn)程。但一般報(bào)道均認(rèn)為HIV合并HBV感染對(duì)HBV疾病進(jìn)程影響較大[3]，HIV合并HBV感染的患者肝硬化和肝癌的發(fā)生率明顯增加[3]。因此了解HIV與HBV共感染的特點(diǎn)及尋找相應(yīng)的預(yù)防措施有重要意義。

研究發(fā)現(xiàn)HIV感染者的HBV的合并感染率明顯高于非HIV感染人群，可能是HIV和HBV具有相同的傳播途徑導(dǎo)致的。因?yàn)镠IV感染急性期沒有特異的臨床表現(xiàn)，急性期感染者難以獲得，因此絕大多數(shù)都是針對(duì)HIV感染慢性期患者進(jìn)行的研究和報(bào)道[4]。本團(tuán)隊(duì)在北京市科委的支持下，從2006年開始建立了HIV感染的急性期隊(duì)列，團(tuán)隊(duì)前期對(duì)HIV感染急性期人群的研究表明， HIV感染急性期患者的HBV合并感染率明顯低于HIV感染慢性期的患者。由此推測可能隨著HIV疾病的進(jìn)展，HIV感染者的免疫力明顯下降，對(duì)HBV的免疫反應(yīng)及清除能力明顯降低。雖然很多科學(xué)家及臨床工作者均推測在HIV感染急性期對(duì)HBV的清除能力要高于HIV感染慢性期，但關(guān)于HIV感染急性期及慢性期T淋巴細(xì)胞對(duì)HBV的反應(yīng)能力的比較尚無報(bào)道。因此，本研究通過入組HIV感染急性期及慢性期合并HBV感染的患者，對(duì)比分析2種不同時(shí)期HIV感染T細(xì)胞對(duì)HBV反應(yīng)能力的差異。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 患者來自2006年起首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院建立的男男同性HIV感染急性期及慢性期的大隊(duì)列患者[5-7]。HIV感染急性期的定義參照Fiebig分期[5-7]，HIV感染慢性期的患者為HIV感染確診半年以上的患者。所有的患者均為HBsAg、HBeAg及HBcAb 3項(xiàng)陽性并能檢測到HBV DNA水平的患者。其中，HIV感染急性期合并HBV感染者10例，年齡為31（19～59）歲，HIV感染慢性期合并HBV感染者15例，年齡為32（22～60）歲。另外，選取與其年齡相匹配的健康者15例作為正常對(duì)照，年齡為32（21～55）歲。所有患者均未經(jīng)過抗病毒治療，未合并嚴(yán)重的機(jī)會(huì)性感染，無惡病質(zhì)。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬簽署知情同意書。

1.2 HIV RNA檢測 HIV載量檢測采用羅氏cobas TaqMan病毒載量檢測系統(tǒng)進(jìn)行病毒載量檢測。

1.3 HBV DNA檢測 血清中HBV DNA的檢測利用羅氏檢測試劑盒進(jìn)行。

1.4 CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測 利用BD公司CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測試劑盒進(jìn)行檢測，通過BD FACSCalibur全自動(dòng)雙激光四色流式細(xì)胞儀進(jìn)行獲取和分析。

1.5 體外刺激培養(yǎng) 1×106外周血單個(gè)核細(xì)胞在含有10%的胎牛血清的10 ml 1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，用1 mg/ml的HBsAg重疊肽（來自牛津大學(xué)）進(jìn)行刺激培養(yǎng)72 h后收集細(xì)胞，CD3-PerCP、 IFN-γ-PE、CD8-FITC和CD4-APC染色后進(jìn)行上機(jī)分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 25.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，用±s表示，符合非正態(tài)分布用中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示，組間比較采用t檢驗(yàn)或U檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析來進(jìn)行。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HBV DNA水平與HIV載量及CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)之間的相關(guān)性分析 對(duì)入組患者HBV DNA水平與HIV載量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)HBV DNA水平與HIV RNA水平呈明顯的正相關(guān)（r=0.502，P=0.011，圖1A），HBV DNA水平與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.409，P=0.042，圖1B）。

圖1 HBV DNA水平與HIV載量和CD4+ T細(xì)胞計(jì)數(shù)的相關(guān)性分析Figure 1 Correlation analysis of HBV DNA level with HIV viral load and CD4+ T cell count level

2.2 HIV感染急性期及慢性期CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ能力的比較 研究對(duì)比分析了刺激后CD4+T細(xì)胞（圖2A）及CD8+T細(xì)胞（圖2B）分泌IFN-γ的能力，發(fā)現(xiàn)HIV感染急性期患者經(jīng)HBsAg重疊肽刺激后CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ的能力（分別為9.1%±3.9%及4.4%±1.8%）明顯高于HIV感染慢性期的患者（分別為5.7%±2.5%及2.7%±1.4%）。

圖2 HBsAg重疊肽刺激后，CD4+ T及CD8+ T細(xì)胞分泌IFN-γ在正常對(duì)照、HIV感染急性期患者及HIV感染慢性期患者之間的比較Figure 2 Comparison of IFN- secreted by CD4+ T and CD8+ T cells after stimulation by HBsAg overlapping peptide among normal persons,HIV patients at acute and chronic stages

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，在HIV感染過程中，HIV合并HBV感染的患者，HBV DNA水平與HIV RNA水平呈正相關(guān)，而與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)。HIV RNA水平及CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)是反映HIV疾病進(jìn)展的兩個(gè)最重要的指標(biāo)，本研究結(jié)果表明在HIV感染中，隨著疾病的進(jìn)展，機(jī)體對(duì)HBV的清除能力逐漸降低。這可能是HIV合并HBV感染的患者，HBV疾病進(jìn)展速度較快的原因。很多人設(shè)想在HIV疾病進(jìn)展過程中機(jī)體對(duì)HBV的清除能力是降低的，本研究利用已有的隊(duì)列和標(biāo)本對(duì)此進(jìn)行了證實(shí)。因此對(duì)合并HBV感染的HIV感染者早發(fā)現(xiàn)及早治療可能有效抑制HBV疾病的進(jìn)展。但也有研究報(bào)道， HIV感染極晚期的患者機(jī)體B細(xì)胞反應(yīng)能力非常低下，通過檢測抗原和抗體的水平不能很好地反映HBV感染情況，須要進(jìn)一步檢測HBV DNA的水平來進(jìn)行評(píng)價(jià)[8]。

健康成人急性HBV感染后大部分能夠自愈，而嬰幼兒急性HBV感染后，因其免疫力低下不能有效清除病毒而成為慢性HBV攜帶者。我國通過對(duì)新生兒接種乙型肝炎疫苗來控制乙型肝炎的成效非常顯著。HIV感染者中，合并慢性HBV感染率明顯高于非HIV感染者。在本研究中利用HBsAg重疊肽刺激發(fā)現(xiàn)，與急性期感染者相比，HIV感染慢性期患者CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的能力較低，表明隨著HIV疾病的進(jìn)展，機(jī)體對(duì)HBV的清除能力逐漸降低。HIV感染人群隨著疾病的進(jìn)展，HBV合并感染率增加，感染率增加是因HIV感染者隨疾病的進(jìn)展，機(jī)體對(duì)急性期HBV感染的清除能力降低導(dǎo)致HBV感染進(jìn)入慢性期，還是因患者隨著機(jī)體抗HBV能力的降低，機(jī)體潛在的HBV復(fù)制增加導(dǎo)致，值得進(jìn)一步研究。此外，隨著免疫系統(tǒng)的損傷，機(jī)體感染HBV后易慢性化，對(duì)這類人群接種乙型肝炎疫苗可能會(huì)有預(yù)防HBV合并感染的作用。

總之，本研究在HIV感染急性期及慢性期隊(duì)列的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)隨著HIV疾病的進(jìn)展，HBV DNA水平逐漸升高。CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ的能力逐漸降低。但本研究也有一些不足，因?yàn)榛颊唠y以獲得，受細(xì)胞量及流式細(xì)胞儀檢測的限制，本研究只檢測了CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ的能力，沒有直接檢測細(xì)胞對(duì)HBV感染細(xì)胞的殺傷及清除作用，后期如有相應(yīng)的標(biāo)本，進(jìn)行更詳細(xì)的研究將會(huì)有助于進(jìn)一步揭示HIV感染者感染HBV后慢性化的機(jī)制。