實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠穴位定位的研究概況

程覓,張雪,史陽(yáng)琳,尚盼盼,樸耕希,徐玉東,3

(1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,上海 201203;2.慶云大學(xué),韓國(guó)龜尾 730-739;3.上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所,上海 200030)

針灸基礎(chǔ)科學(xué)研究需要以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及相關(guān)疾病模型為對(duì)象開(kāi)展針灸效應(yīng)機(jī)制以及經(jīng)穴特異性等方面的探索。目前,最常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物包括狗、貓、家兔、豚鼠、大鼠、小鼠等[1]。其中大鼠、小鼠等嚙齒類動(dòng)物與人類基因同源性較高,且繁殖能力強(qiáng),生長(zhǎng)發(fā)育成熟周期短,體型小易養(yǎng)殖[2],在針灸基礎(chǔ)研究中使用最多。在針灸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,精準(zhǔn)的穴位定位是針灸治療起效的基礎(chǔ),也是針灸科學(xué)研究的必要前提條件之一[3],但是實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠穴位定位尚無(wú)統(tǒng)一的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范化的穴位定位方法,在一定程度上影響了針灸現(xiàn)代化和國(guó)際化的發(fā)展。

筆者以“小/大鼠”“穴”“定位”作為中文文獻(xiàn)主題詞,“mouse/rats acupuncture” OR“mouse/rats acupoint”作為英文文獻(xiàn)主題詞分別檢索中國(guó)知網(wǎng)(CNKI)、重慶維普數(shù)據(jù)庫(kù)(CQVIP)、萬(wàn)方和PubMed數(shù)據(jù)庫(kù),檢索到公開(kāi)發(fā)表的大鼠、小鼠穴位定位方法類文獻(xiàn)共20篇,其中單穴定位文獻(xiàn)共15篇,系統(tǒng)穴位定位文獻(xiàn)共5篇(國(guó)內(nèi)3篇,國(guó)外2篇)。

本文將從穴位定位依據(jù)、穴位數(shù)量與分布、穴位解剖位置描述等方面梳理分析這些定位體系的差異、優(yōu)勢(shì)與不足,以期為大鼠、小鼠的穴位規(guī)范化準(zhǔn)確定位提供文獻(xiàn)參考,也為研制新的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位定位國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠穴位定位的研究概況

實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠系統(tǒng)穴位定位研究的文獻(xiàn)共5篇,4個(gè)研究團(tuán)隊(duì)。其中國(guó)內(nèi)分別以華興邦、鄭利巖研究員的團(tuán)隊(duì)研究為代表,國(guó)外則由慶熙大學(xué)針灸經(jīng)絡(luò)科學(xué)研究中心、釜山國(guó)立大學(xué)醫(yī)學(xué)部制定了相關(guān)定位方法(見(jiàn)表1)。

表1 國(guó)內(nèi)外大鼠、小鼠穴位定位基本情況

華興邦等根據(jù)大量針灸實(shí)驗(yàn)研究論文以及《中獸醫(yī)學(xué)》和人體經(jīng)穴確定了42個(gè)大鼠、20個(gè)小鼠針灸穴位,并對(duì)穴位名稱、定位描述、針刺方法、功能主治等進(jìn)行了研究[4],且繪制了大鼠、小鼠的針灸穴位圖譜[5],以往各版本《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》教材也多參考了該定位體系。鄭利巖等[6]采用皮膚電阻導(dǎo)電量測(cè)定及聲測(cè)經(jīng)絡(luò)技術(shù)驗(yàn)證了大鼠經(jīng)穴與人體經(jīng)穴具有相同的生物物理學(xué)特性,共確定大鼠穴位46個(gè),比華興邦團(tuán)隊(duì)定位的大鼠經(jīng)穴總數(shù)多4個(gè)。韓國(guó)與中國(guó)地理位置相近,有著悠久的文化和歷史交流,韓國(guó)針灸學(xué)者非常重視實(shí)驗(yàn)針灸的基礎(chǔ)研究,傾向于建立基礎(chǔ)理論、科學(xué)研究、術(shù)語(yǔ)、針灸技術(shù)等基礎(chǔ)學(xué)科。慶熙大學(xué)針灸經(jīng)絡(luò)科學(xué)研究中心的韓國(guó)學(xué)者Yin CS等[7]在該國(guó)學(xué)者前期工作基礎(chǔ)上,研究了大鼠、小鼠十二經(jīng)脈及任督二脈的穴位,并提出了一套121個(gè)穴位的小鼠和大鼠模型定位系統(tǒng),對(duì)其定位進(jìn)行了詳細(xì)描述。另外,釜山國(guó)立大學(xué)醫(yī)學(xué)部的研究者Koo ST等[8]就實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠研究中常用的穴位定位達(dá)成共識(shí),用英文描述ST36、LI4、PC6、SP6等22個(gè)穴位的位置,并配以解剖圖進(jìn)行說(shuō)明,這將為針灸學(xué)科國(guó)際化的進(jìn)一步發(fā)展奠定基礎(chǔ)。據(jù)統(tǒng)計(jì),5篇國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)共同記載的大鼠穴位有后三里、三陰交、陽(yáng)陵泉、環(huán)跳、太沖、曲池、少海、內(nèi)關(guān)、神門、合谷10個(gè),小鼠穴位有后三里、三陰交、環(huán)跳、內(nèi)關(guān)、胃俞、合谷6個(gè)(見(jiàn)圖1),這是針灸基礎(chǔ)研究中常用的一些穴位。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單穴定位的文獻(xiàn)僅涉及大鼠,共15篇,記載的腧穴包括人迎、肺俞、心俞、脾俞、腎俞、次髎、關(guān)元、神闕、命門、胃脘下俞、夾脊,總計(jì)11個(gè)。

圖1 系統(tǒng)穴位定位文獻(xiàn)中大鼠、小鼠穴位定位數(shù)據(jù)韋恩圖

2 實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠穴位定位依據(jù)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位的發(fā)展歷經(jīng)了從起步到逐漸規(guī)范的過(guò)程,其定位描述從粗略到詳細(xì),定位參考從龐雜到明確,均離不開(kāi)穴位定位參考依據(jù)作支撐。

華興邦等[5]關(guān)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位定位依據(jù)包括3類,①?gòu)V泛收集國(guó)內(nèi)外有關(guān)針灸實(shí)驗(yàn)研究資料,占比95%;②參照《中獸醫(yī)學(xué)》及其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位,占比19%;③從比較解剖學(xué)的角度,根據(jù)人體穴位所處部位按比例投影到動(dòng)物身上,并接納國(guó)內(nèi)部分著名針灸專家意見(jiàn)進(jìn)行修訂,占比21%。隨后,鄭利巖及其團(tuán)隊(duì)為了更客觀準(zhǔn)確地標(biāo)定出常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的經(jīng)穴,應(yīng)用皮膚電阻導(dǎo)電量測(cè)定及聲測(cè)經(jīng)絡(luò)技術(shù)來(lái)測(cè)定經(jīng)穴點(diǎn)[6]。韓國(guó)慶熙大學(xué)針灸經(jīng)絡(luò)科學(xué)研究中心[7]對(duì)大鼠、小鼠的穴位定位進(jìn)行了較為詳細(xì)的描述,其定位依據(jù)包括3類。①采用傳統(tǒng)獸醫(yī)針灸系統(tǒng)的動(dòng)物穴位;②根據(jù)穴位的生理特征來(lái)定位,如電阻抗降低或具有高密度神經(jīng)末梢易興奮的皮膚/肌肉-神經(jīng)復(fù)合體;③轉(zhuǎn)位法,將人體穴位的解剖位置相對(duì)應(yīng)轉(zhuǎn)位到動(dòng)物皮膚表面來(lái)進(jìn)行定位,在小鼠和大鼠模型中提出了一個(gè)121穴位轉(zhuǎn)位系統(tǒng)。Koo ST等[8]所采取的定位依據(jù)與Yin CS[7]等一致,并借用《世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)針灸經(jīng)穴定位》中關(guān)于人類穴位定位的專業(yè)術(shù)語(yǔ)來(lái)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的穴位定位進(jìn)行描述。其他單穴定位文獻(xiàn)一定程度上也參考了上述穴位定位依據(jù)。由此可見(jiàn),國(guó)內(nèi)外研究者均結(jié)合了《中獸醫(yī)學(xué)》、針灸、動(dòng)物解剖學(xué)及現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法作為實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠的穴位定位依據(jù)。

3 實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠穴位的分布

統(tǒng)計(jì)顯示,實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠穴位定位方法類的20篇文獻(xiàn)所記載穴位的分布涉及6個(gè)不同部位,包括頭面頸部、胸腹部、背腰部、前肢、后肢、尾部,而2篇韓國(guó)文獻(xiàn)均未記載尾部穴位(尾尖)(見(jiàn)表2)。其分布部位以大小鼠四肢、背腰部居多,其中大鼠四肢部及背腰部腧穴占比分別為46.9%和25.9%,小鼠分別為44.6%和25.4%,且4篇系統(tǒng)穴位定位文獻(xiàn)共同記載的10個(gè)大鼠穴位、6個(gè)小鼠穴位均分布在四肢部。四肢部穴位在實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠的針灸研究中出現(xiàn)頻次最高,可能與四肢部穴位的屬性有關(guān),如五輸穴、郄穴、下合穴、八脈交會(huì)穴等特定穴均分布在四肢肘膝關(guān)節(jié)以下,其治療作用廣泛[9],不僅可治療局部、鄰近、循經(jīng)的疾病,還可以用于全身疾病的治療。其次,四肢部位的骨性標(biāo)志較多,如橈骨莖突、肱骨外上髁、脛骨粗隆、腓骨頭、外踝、內(nèi)踝等,這些骨性標(biāo)志在四肢的體表形成較明顯的隆起或凹陷,有利于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的穴位定位。

表2 實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠穴位分布及數(shù)量

4 實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠穴位定位的描述

經(jīng)統(tǒng)計(jì)顯示,系統(tǒng)穴位定位研究的5篇文獻(xiàn)共同記載的大鼠穴位有10個(gè)、小鼠穴位6個(gè),對(duì)其作比較分析(見(jiàn)表3、表4)。而國(guó)內(nèi)外對(duì)動(dòng)物穴位定位的方法多有不同,以解剖學(xué)骨性標(biāo)志做參考,國(guó)內(nèi)多采用絕對(duì)的距離長(zhǎng)度進(jìn)行定位,而國(guó)外多以骨度分寸折量定位。

表3 不同文獻(xiàn)大鼠共有穴位名稱和位置

表4 不同文獻(xiàn)小鼠共有穴位名稱和位置

5 實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠穴位歸經(jīng)

統(tǒng)計(jì)顯示,系統(tǒng)穴位定位研究的5篇文獻(xiàn)中所記載的實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠穴位可歸屬于十四經(jīng),尚有部分經(jīng)外奇穴(見(jiàn)表5),其中歸屬于膀胱經(jīng)的穴位最多(總計(jì)27個(gè))。單穴定位研究文獻(xiàn)中記載的大鼠腧穴包括人迎、肺俞、心俞、脾俞、腎俞、次髎、關(guān)元、神闕、命門、胃脘下俞、夾脊,總計(jì)11個(gè),其中5個(gè)為背俞穴,歸屬于膀胱經(jīng)。因膀胱經(jīng)為循行路線最長(zhǎng)的經(jīng)脈,由頭走足,分行四肢,且膀胱經(jīng)背俞穴均有相應(yīng)的神經(jīng)后支伴行,與相應(yīng)內(nèi)臟所屬神經(jīng)節(jié)段具有一致性,主治范圍廣泛,因此研究者較多關(guān)注實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠膀胱經(jīng)上的穴位定位。此外,大鼠陽(yáng)經(jīng)穴位85個(gè),陰經(jīng)穴位49個(gè);小鼠陽(yáng)經(jīng)穴位80個(gè),陰經(jīng)穴位47個(gè)。實(shí)驗(yàn)大、小鼠固定后,陽(yáng)經(jīng)穴位多位于肢體外側(cè),便于定位取穴和針灸操作。

表5 實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠穴位歸經(jīng)

續(xù)表

6 討論

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是進(jìn)行針灸效應(yīng)探索的主要載體,而準(zhǔn)確的穴位定位是針灸治療起作用的一個(gè)關(guān)鍵因素,因此,動(dòng)物穴位的精確定位是針灸學(xué)科發(fā)展的必經(jīng)之路。但目前國(guó)內(nèi)外對(duì)大鼠、小鼠的穴位定位尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。有研究對(duì)2012年至2017年針灸基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中大鼠穴位使用情況做出統(tǒng)計(jì),以大鼠常用穴位“足三里”為例,僅以解剖形態(tài)作為定位標(biāo)志對(duì)大鼠“足三里”進(jìn)行定位的方法描述包括7種[10]。本文對(duì)比研究了國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)大鼠、小鼠穴位定位描述以及定位依據(jù)的異同,華興邦等[5]與鄭利巖等[6]研究的大鼠穴位,兩者共有的穴位35個(gè),但是只有太淵、神門、少海、昆侖、申脈5個(gè)穴位的定位描述是一致的。缺乏統(tǒng)一規(guī)范的大鼠、小鼠穴位定位方法,在針灸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中可能導(dǎo)致取穴偏差,無(wú)法真實(shí)體現(xiàn)針灸的效應(yīng),另外也使得研究結(jié)果缺乏可比性,一定程度上影響了針灸研究結(jié)果的科學(xué)性和可靠性。因此制定規(guī)范的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位定位標(biāo)準(zhǔn),是提高針灸學(xué)基礎(chǔ)研究水平和推動(dòng)針灸現(xiàn)代化、國(guó)際化的迫切需要[11]。

筆者綜合分析了國(guó)內(nèi)外的大鼠、小鼠穴位定位方法,發(fā)現(xiàn)在定位位置的測(cè)量和穴位定位理論依據(jù)等方面存在爭(zhēng)議和問(wèn)題。一是對(duì)于穴位定位的描述,國(guó)內(nèi)外多有不同,國(guó)內(nèi)多習(xí)慣用尺寸單位來(lái)表示,而國(guó)外以骨度分寸折量定位。相比較來(lái)說(shuō),骨度分寸折量法似乎更為科學(xué),因?yàn)楦鶕?jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬、性別、周齡、體質(zhì)量等的不同,其形體大小也有較大差異。有研究者對(duì)不同周齡期Wistar大鼠的身長(zhǎng)、體質(zhì)量、尾長(zhǎng)進(jìn)行研究[12],發(fā)現(xiàn)3周齡、6周齡、13周齡的雄性大鼠身長(zhǎng)分別是(1.38±0.81)cm、(14.97±0.83)cm、(20.60±0.69)cm,雌性大鼠身長(zhǎng)分別是(1.90±0.69)cm、(15.20±1.21)cm、(18.52±0.43)cm,提示不同周齡、不同性別間大鼠的身長(zhǎng)有顯著差異。若仍以尺寸單位進(jìn)行定位,結(jié)果必然存在偏差。有研究對(duì)解剖位置的表述進(jìn)行了深入討論,建議能以骨度分寸折量定位的穴位,將不再使用國(guó)際單位的尺寸,如小鼠“三陰交”穴如能確定在后肢內(nèi)踝尖與脛骨內(nèi)側(cè)髁下1/4與上3/4交點(diǎn)處,則不再定義為“位于內(nèi)踝尖上0.5 cm”。二是穴位定位依據(jù),國(guó)內(nèi)外研究者均結(jié)合了《獸醫(yī)針灸學(xué)》作為實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠的穴位定位依據(jù)?！东F醫(yī)針灸學(xué)》主要是古人對(duì)馬、牛等大型家畜疾病的針灸治療實(shí)踐中積累的經(jīng)驗(yàn)[13],具有幾千年的歷史。但把獸醫(yī)針灸應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有一定局限性[14],獸醫(yī)針灸的研究主要集中于大型家畜,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大多是嚙齒類動(dòng)物,其體型很小,這使得動(dòng)物精準(zhǔn)的穴位定位和針刺操作變得更加困難,通過(guò)模擬牛、馬的穴位進(jìn)行定位比較粗略模糊,不具有精準(zhǔn)性?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)脈循行線及穴位表現(xiàn)出低電阻高電容[15]、高振聲和聲信號(hào)[16]、熱學(xué)特性(經(jīng)絡(luò)穴位處皮膚溫度要比附近非經(jīng)穴部位高出0.5～1.0 ℃)[17]。因此,依據(jù)穴位的生物、物理和化學(xué)特性有助于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)確穴位定位[18]。但穴位的理化特性易受多種因素的干擾[19],如動(dòng)物穴位處皮膚的溫度、濕度以及被測(cè)量表面的清潔程度,以及動(dòng)物情緒、健康狀況等內(nèi)在因素,所以關(guān)于穴位的生理特征是否能準(zhǔn)確反映穴位,目前尚無(wú)定論。

針灸實(shí)驗(yàn)來(lái)源于臨床而最終又要回歸于臨床,在臨床上,針灸特定經(jīng)絡(luò)和穴位能夠產(chǎn)生相對(duì)特異的治療作用,因此經(jīng)穴效應(yīng)是驗(yàn)證穴位定位是否準(zhǔn)確的重要標(biāo)準(zhǔn)。有研究[20]對(duì)大鼠“人迎”穴進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定位,并通過(guò)針刺降壓效應(yīng)來(lái)驗(yàn)證,結(jié)果顯示,與針刺非穴位治療大鼠自發(fā)性高血壓相比,針刺“人迎”穴后血壓明顯下降,證實(shí)了“人迎”穴的準(zhǔn)確定位及確切的降壓效應(yīng)。魏媛媛等[21]研究發(fā)現(xiàn)針刺穴位組(穴取“水溝”)可以明顯縮小大腦中動(dòng)脈缺血模型(MCAO)大鼠病灶側(cè)腦梗死面積,效應(yīng)明顯優(yōu)于非穴位組(穴取患側(cè)肋下髂嵴上10 mm的固定點(diǎn)處)。徐朝霞等[22]采用電針刺激家兔“陽(yáng)陵泉”穴可使奧狄氏括約肌放電明顯增強(qiáng),而刺激“非經(jīng)非穴”點(diǎn)則無(wú)反應(yīng)。以上研究結(jié)果表明,與非穴點(diǎn)相比較,動(dòng)物經(jīng)穴點(diǎn)具有顯著的特異性效應(yīng),因此,應(yīng)當(dāng)以是否產(chǎn)生特異性效應(yīng)作為動(dòng)物穴位定位的重要標(biāo)準(zhǔn)。此外,目前已有的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位局部和深層解剖結(jié)構(gòu)研究還不充分,針灸科研人員在針刺操作過(guò)程中僅根據(jù)穴位的文字描述定位,大大增加了實(shí)際操作中的不確定性,影響針灸研究的可靠性。國(guó)內(nèi)部分研究探索通過(guò)參照大鼠的解剖圖譜對(duì)部分穴位進(jìn)行定位,如田環(huán)環(huán)等[23]根據(jù)《WISTAR大鼠解剖圖譜》中“髖結(jié)節(jié)平對(duì)第6腰椎”的描述,將其作為腰骶部的骨性標(biāo)志,并對(duì)“腎俞”進(jìn)行定位,向上順摸4個(gè)椎體即是第2腰椎,旁開(kāi)7 mm即是腎俞;劉海濤等[24]根據(jù)《大鼠的解剖與組織》中的描述,即T2位于頸胸彎曲的最低點(diǎn),在大鼠俯臥位時(shí)棘突最高,可將T2作為椎骨定位的體表標(biāo)志來(lái)確定“肺俞”“心俞”的位置;徐東升等[25]同時(shí)參考了《WISTAR大鼠解剖圖譜》和《大鼠斷層解剖彩色圖譜》進(jìn)行大鼠形體結(jié)構(gòu)圖的繪制,并按照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[26]中介紹的穴位名稱與定位來(lái)繪制實(shí)驗(yàn)大鼠穴位圖譜。這些研究將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位定位與現(xiàn)代解剖學(xué)相結(jié)合,為動(dòng)物穴位的定位提供了更詳細(xì)、客觀的解剖學(xué)依據(jù)。

綜上所述,準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位定位是針灸基礎(chǔ)研究中至關(guān)重要的一步,但目前實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠的穴位定位方法無(wú)規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn),一定程度上影響了針灸學(xué)科的發(fā)展水平,亟需制定大鼠、小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相關(guān)的穴位定位國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。筆者認(rèn)為,應(yīng)參考人體針灸穴位和獸醫(yī)針灸穴位,結(jié)合大鼠、小鼠解剖標(biāo)志物進(jìn)行大致的穴位轉(zhuǎn)位定位;在此基礎(chǔ)上,根據(jù)動(dòng)物經(jīng)穴效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),并結(jié)合現(xiàn)代解剖學(xué)、神經(jīng)、電生理和免疫學(xué)等研究,對(duì)大鼠、小鼠的穴位精確定位;進(jìn)一步制訂大、小鼠穴位定位的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),并繪制相應(yīng)的解剖圖譜,在世界范圍內(nèi)推廣和規(guī)范應(yīng)用,這將對(duì)促進(jìn)針灸學(xué)科的發(fā)展具有重要意義。