肝癌組織中血管內(nèi)皮生長因子、胰島素樣生長因子-Ⅱ的表達(dá)情況及影響因素分析

鄭 碩，黃奕紅

(1.福州市二醫(yī)院肝膽外科，福建 福州 350007；2.福州市二醫(yī)院超聲診斷科，福建 福州 350007)

原發(fā)性肝癌(PHC)是全球最常見的惡性腫瘤之一，具有起病隱匿、發(fā)展速度快、臨床預(yù)后差的特點(diǎn)。研究顯示，PHC患者自然生存期平均僅為4.3個月，即使手術(shù)切除仍具有較高的復(fù)發(fā)率及致死率，術(shù)后5年復(fù)發(fā)率仍高達(dá)70%以上，是導(dǎo)致患者預(yù)后不良的重要因素，患者5年生存率僅為37.2%[1]。PHC屬于典型多血管腫瘤，發(fā)生、進(jìn)展、復(fù)發(fā)與血管生成密切相關(guān)[2]。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是最重要的血管生長因子之一，能通過刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖進(jìn)而促進(jìn)腫瘤新生血管生成，也能抑制樹突狀細(xì)胞進(jìn)而影響機(jī)體抗腫瘤免疫功能，在腫瘤細(xì)胞生成、遷移及侵襲過程中扮演重要角色[3]。胰島素樣生長因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)是一種功能復(fù)雜的生長調(diào)控因子，會引起細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的動態(tài)平衡破壞，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分化、生長，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等過程密切相關(guān)[4]。目前，臨床關(guān)于PHC患者肝癌組織中VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)情況的變化及其機(jī)制少見報(bào)道，為此本研究旨在探討探討肝癌組織中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、胰島素樣生長因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)的表達(dá)水平及影響因素，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料:選擇我院收治的82例接受手術(shù)治療的原發(fā)性肝癌(PHC)患者作為研究對象，符合以下入組標(biāo)準(zhǔn)：①符合PHC的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，經(jīng)病理證實(shí)；②術(shù)前未接受放化療及介入治療；③均實(shí)施肝癌切除術(shù)治療；④患者知情同意。82例患者中男48例，女34例；年齡：<60歲35例、≥60歲47例；腫瘤直徑：<5 cm 28例、≥5 cm 54例；分化程度：低分化26例、中分化36例、高分化20例；TNM分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期45例、Ⅲ期27例；肝功能Child-Pugh分級：A級47例、B級35例；AFP水平：<400 μg/L 49例、≥400 μg/L 33例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例。術(shù)后收集82例PHC患者的肝癌組織及癌旁組織(距肝癌組織2～5 cm)，癌旁組織病理證實(shí)沒有腫瘤細(xì)胞浸潤，未見增生性病變。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。

1.2方法

1.2.1臨床資料收集：采用自行設(shè)計(jì)調(diào)查表收集患者一般資料、臨床病理特征，包括性別(男、女)、年齡(<60歲、≥60歲)、腫瘤直徑(<5 cm、≥5 cm)、腫瘤包膜(有、無)、分化程度(低分化、中分化、高分化)、TNM分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)、肝功能分級(A級、B級)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是、否)、甲胎蛋白(AFP)水平(<400 μg/L、≥400 μg/L)。

1.2.2VEGF、IGF-Ⅱ檢測：收集肝癌組織及癌旁組織(距肝癌組織2-5cm)，使用石蠟包埋，連續(xù)切片，采用免疫組織化學(xué)法檢測VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)情況，經(jīng)免疫組化染色后使用Nikon YS100光學(xué)顯微鏡觀察染色情況，每張切片選取5個高倍視野進(jìn)行觀察，參考文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)[6]根據(jù)陽性細(xì)胞比例評分×著色強(qiáng)度評分將表達(dá)結(jié)果分為陰性(-)、弱陽性(+)、中度陽性(++)、強(qiáng)陽性(+++)。

1.3觀察指標(biāo)：①比較肝癌組織和癌旁組織VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)陽性率差異,總陽性率為弱陽性(+)率、中度陽性(++)率、強(qiáng)陽性(+++)率之和；②分析一般資料、臨床病理特征與VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)陽性率的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，組間進(jìn)行χ2分析，采用單因素χ2分析及多因素Logistic回歸分析VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)影響因素，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1肝癌組織及癌旁組織VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)比較：癌組織中VEGF表達(dá)陽性率為65.85%(54/82)、IGF-Ⅱ表達(dá)陽性率為68.29%(56/82)，均明顯高于癌旁組織28.05%(23/82)、26.83%(22/82)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.526、28.262，均P<0.01)，見表1～2。

表1 肝癌組織及癌旁組織VEGF表達(dá)比較[例(%)]

表2 肝癌組織及癌旁組織IGF-Ⅱ表達(dá)比較[例(%)]

2.2VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)影響因素分析:單因素分析顯示，不同腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、肝功能分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AFP水平患者癌組織VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。多因素分析顯示，腫瘤直徑(OR=1.645,95%CI=1.102～3.783)、分化程度(OR=1.943,95%CI=1.203～4.004)、TNM分期(OR=2.018,95%CI=1.287～4.742)、肝功能分級(OR=1.865,95%CI=1.134～3.953)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(OR=2.121,95%CI=1.303～4.944)、AFP水平(OR=1.809,95%CI=1.129～3.887)是影響癌組織VEGF表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)； 腫瘤直徑(OR=1.672,95%CI=1.112～3.896)、分化程度(OR=1.958,95%CI=1.212～4.116)、TNM分期(OR=2.042,95%CI=1.272～4.778)、肝功能分級(OR=1.927,95%CI=1.156～3.971)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(OR=2.166,95%CI=1.324～4.967)、AFP水平(OR=1.659,95%CI=1.130～3.967)是影響癌組織IGF-Ⅱ表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3～5。

表3 VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)影響因素的單因素分析[例(%)]

表4 VEGF表達(dá)影響因素的多因素分析

表5 IGF-Ⅱ表達(dá)影響因素的多因素分析

3 討論

PHC早期癥狀不明顯，病情進(jìn)展迅速，確診時多為局部晚期及晚期，部分發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，部分患者喪失手術(shù)切除的機(jī)會。因而，PHC早期診治具有重要意義。目前，PHC診斷仍以檢測甲胎蛋白(AFP)為主，但具有較高的漏診率，其中40%的早期肝癌和15%～20%的晚期肝癌患者AFP檢測結(jié)果為陰性。尋找具有更高靈敏度和特異度的腫瘤標(biāo)記物來彌補(bǔ)AFP不足，以提高早期肝癌的診斷率，實(shí)現(xiàn)PHC早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療，成為臨床研究的重要課題。

VEGF是多功能的血管生長因子，能夠與血管內(nèi)皮細(xì)胞膜絡(luò)氨酸激酶受體結(jié)合，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞分化、增殖，促進(jìn)腫瘤新生血管形成，是血管增生的強(qiáng)烈刺激因子，與肺癌、腸癌、肝癌等多種腫瘤發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)[7]。研究顯示，腫瘤患者癌組織中的VEGF表達(dá)明顯增加，表明VEGF在腫瘤發(fā)病過程發(fā)揮重要作用。VEGF表達(dá)增加能夠血管生成，從而為腫瘤細(xì)胞提供充足的血液供應(yīng)，保證腫瘤細(xì)胞生長及增殖所需的營養(yǎng)，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞生長，另外VEGF表達(dá)增加能夠使血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)發(fā)生降解，削弱血管屏障作用，導(dǎo)致癌細(xì)胞血管滲透，致使癌細(xì)胞通過血流擴(kuò)散，引起腫瘤轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，癌組織中VEGF表達(dá)陽性率為65.85%(54/82)，明顯高于癌旁組織28.05%(23/82)，與文獻(xiàn)研究[8]相符，提示PHC患者癌組織中VEGF呈高表達(dá)，與PHC發(fā)病密切相關(guān)。

IGF-Ⅱ大部分由肝臟合成，是細(xì)胞增殖的重要調(diào)控因子，具有多重的生物效應(yīng)。IGF-Ⅱ過度表達(dá)會破壞細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的動態(tài)平衡，放大腫瘤細(xì)胞持續(xù)生長信號的傳遞，刺激癌前期的肝細(xì)胞增殖失控而發(fā)生腫瘤，同時也在一定條件下加速高增殖活性狀態(tài)的癌前肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致肝癌發(fā)生[9-10]。研究顯示，IGF-Ⅱ與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可作為肝癌診斷及評判治療效果的新腫瘤標(biāo)記物，能夠使AFP陰性的PHC患者獲得進(jìn)一步明確診斷。本研究結(jié)果顯示，癌組織中IGF-Ⅱ表達(dá)陽性率為68.29%(56/82)，明顯高于癌旁組織26.83%(22/82)，提示PHC患者癌組織中IGF-Ⅱ呈高表達(dá)，與PHC發(fā)病密切相關(guān)，與文獻(xiàn)研究[11]相符。

本研究結(jié)果顯示，腫瘤直徑≥5 cm、低分化程度、高TNM分期、肝功能Child-Pugh分級差、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AFP≥400 ug/L是導(dǎo)致癌組織VEGF、IGF-Ⅱ達(dá)增加的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表明癌組織VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)與肝癌生物學(xué)行為有關(guān)。VEGF、IGF-Ⅱ高表達(dá)則會誘導(dǎo)血管生成，能夠維持腫瘤的持續(xù)生長，促使腫瘤直徑持續(xù)增大。低分化程度患者則腫瘤惡性程度越高，腫瘤的新生血管數(shù)量越多，VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)增加越顯著，臨床預(yù)后也越差。高TNM分期及高肝功能Child-Pugh分級患者肝功能受損更加嚴(yán)重，提示腫瘤侵襲性更強(qiáng)，肝癌細(xì)胞生長速度更快，局部缺氧、缺血狀況更明顯，進(jìn)而刺激癌細(xì)胞分泌大量的VEGF、IGF-Ⅱ，使癌組織VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)增加。VEGF、IGF-Ⅱ高表達(dá)可促進(jìn)淋巴管生成，癌細(xì)胞進(jìn)入淋巴管后向管腔內(nèi)聚集，侵襲淋巴結(jié)致淋巴結(jié)受累。AFP水平與肝癌的惡性程度呈正相關(guān)，AFP水平越高，則肝癌的惡性程度越高，則VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)增加越顯著。

綜上所述，PHC患者肝癌癌組織中VEGF、IGF-Ⅱ表達(dá)明顯增加，其表達(dá)水平與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分化程度、TNM分期、肝功能分級、血清AFP水平存在相關(guān)性。