一例散養(yǎng)蛋雞發(fā)生馬立克氏病的診斷與思考

唐娟 劉華棟 王彩先 李婷婷 陸冰洋 丁樹榮

摘要：針對(duì)本地某雞場蛋雞出現(xiàn)發(fā)病和死亡情況，通過聽取養(yǎng)殖人員的描述，對(duì)臨床癥狀和病理變化的觀察，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室方法診斷，最終確定為馬立克氏病。經(jīng)過綜合防控措施，最終控制住疫情發(fā)展和蔓延。

關(guān)鍵詞：蛋雞;馬立克氏病;疫苗

2019年9月太原市某養(yǎng)雞場散養(yǎng)蛋雞發(fā)生疑似馬立克氏病，養(yǎng)殖場主帶2只發(fā)病雞和2只病死雞來山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究室進(jìn)行診斷和咨詢。通過臨床診斷、病理變化觀察，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷，最終確診為馬立克氏病。以下為具體情況：

1發(fā)病情況

雞場所養(yǎng)雞為蛋雞，雞群分兩批日齡，一批為73日齡，另一批為187日齡，兩批雞的場地之間有網(wǎng)相隔，均采用散養(yǎng)的養(yǎng)殖方式。近期不斷有187日齡的產(chǎn)蛋雞出現(xiàn)零星死亡，死亡數(shù)量也越來越多。而后73日齡的雞也開始出現(xiàn)零星死亡。對(duì)發(fā)病雞采取群體喂藥的方式進(jìn)行治療，均沒有明顯效果。使用的藥物有清瘟敗毒散、黃芪多糖、青霉素、強(qiáng)力霉素等。

2臨床癥狀

病雞最初表現(xiàn)為精神萎靡，垂頭閉眼，類似打盹;雙翅下垂;對(duì)刺激反應(yīng)遲鈍;食欲下降，有的病雞完全廢絕;常可見在角落里蹲臥。病雞拉黃綠色或灰白色稀便。產(chǎn)蛋量下降，有的雞停止產(chǎn)蛋。發(fā)病嚴(yán)重的病雞會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，如頭頸扭轉(zhuǎn)，劈叉、站立不穩(wěn)，轉(zhuǎn)圈等。出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的病雞很快就會(huì)死亡。

3病理變化

對(duì)病雞進(jìn)行剖檢，可見肝臟腫大，肝臟上密布白色的結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)大小不等。脾臟腫大，表面長有結(jié)節(jié)，嚴(yán)重時(shí)結(jié)節(jié)長滿，看不出原來脾臟的外觀和顏色，幾乎成為白色（如圖1）。腺胃乳頭有少量出血點(diǎn)，腺胃和肌胃的交界處發(fā)紅。腸道內(nèi)有點(diǎn)狀出血。雙側(cè)盲腸扁桃體出血。

4診斷

由于馬立克氏病的經(jīng)典診斷方法為瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，由此，本次實(shí)驗(yàn)室診斷采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，方法參照萬曉星[1]等的方法。將病雞富含羽髓的羽根剪下后放置于滅菌的試管內(nèi)，往其中加入2滴PBS后用玻璃棒擠壓羽根，當(dāng)試管中的液體變的渾濁后，將羽根去除，試管中的溶液為羽囊浸液。而后制備厚度約為2～3mm的瓊脂板，參照銀梅[2]等的方法，將含有氯化鈉的PBS配置成為瓊脂溶液。其中氯化鈉為80g/L，PBS為0.01mol/L，配制后的瓊脂為10g/L。將瓊脂加熱融化后應(yīng)用脫脂棉過濾，將濾液倒入平皿中備用。將冷卻后的瓊脂在室溫下打孔，剔除孔內(nèi)瓊脂，將瓊脂板置于火焰上加熱，將孔周圍瓊脂熔化來封底。而后用移液器向中央孔中滴入MD陽性血清，周圍孔中選中其中1孔滴加陽性抗原，其余孔內(nèi)均滴加羽囊浸液。給孔內(nèi)滴加液體時(shí)，以液面不溢出為正好。滴完液體后蓋上平皿蓋，將瓊脂平板放入一濕盤中，置于37℃溫箱中孵育24～72h，每24h需要取出觀察，并嚴(yán)格記錄。經(jīng)過72h的觀察，可見在標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔和受檢的羽囊浸液的中間出現(xiàn)有比較清晰的沉淀線。表明在羽囊中含有馬立克氏病病毒，由此可以確診本病。

5防控

針對(duì)本次發(fā)病，淘汰發(fā)病雞群和疑似雞群，在距離養(yǎng)殖場較遠(yuǎn)的位置深埋和無害化處理。未發(fā)病雞群隔離至消毒好的雞舍內(nèi)，進(jìn)行舍內(nèi)養(yǎng)殖，并每天帶雞消毒。對(duì)散養(yǎng)養(yǎng)殖區(qū)也要進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，盡量做到不留有死角。群體飲用黃芪多糖、電解多維和青霉素，后未見有新的發(fā)病和死亡病例。

6討論和思考

發(fā)病雞場所養(yǎng)的散養(yǎng)雞在1日齡時(shí)均已免疫過馬立克氏病疫苗，而本次仍然發(fā)生馬立克氏病懷疑是受到強(qiáng)毒攻擊或者免疫失敗。孟慶華等[3]也通過報(bào)道分析了免疫失敗是馬立克氏病在免疫后仍然發(fā)病的主要原因。尤其是疫苗的使用使得病毒在不斷發(fā)生變異，在變異過程中毒力越來越強(qiáng)，而且出現(xiàn)了超強(qiáng)毒株[4]。高婷婷等[5]也報(bào)道在從未發(fā)生過馬立克氏病的雞場出現(xiàn)感染。在2013年Gong等[6]報(bào)道了在免疫雞場發(fā)生了馬立克氏病超強(qiáng)毒感染，即vvMDV。用CVI988疫苗免疫后對(duì)超強(qiáng)毒株的保護(hù)力比較低，保護(hù)指數(shù)僅為66.7[7]。vv/vv+MDV已經(jīng)在我國開始流行[8]。本次雞場出現(xiàn)發(fā)病，雖然并未進(jìn)行病毒的分離鑒定，但由于同一批雞苗，其他養(yǎng)殖場并未發(fā)生本病，由此可以推測本例雞場發(fā)病并非免疫失敗導(dǎo)致，而是強(qiáng)毒或者超強(qiáng)毒的病毒感染所致，其感染后突破疫苗的免疫保護(hù)，引起雞群發(fā)病并出現(xiàn)大批死亡。

雞場在發(fā)生本病后，通常采用的方式是撲殺并進(jìn)行無害化處理，并對(duì)雞場進(jìn)行凈化。本次發(fā)病由于是散養(yǎng)雞場，雞的活動(dòng)范圍較大，所以很難能夠達(dá)到嚴(yán)格的消毒和徹底凈化。通過一系列的技術(shù)措施，5d后再?zèng)]有出現(xiàn)新病例，說明達(dá)到預(yù)期效果。

感染MDV的雞會(huì)引起嚴(yán)重的免疫抑制[9]。MDV感染導(dǎo)致發(fā)病雞的法氏囊和胸腺萎縮，抑制了細(xì)胞介導(dǎo)的免疫和體液免疫，這樣就容易造成其他病原繼發(fā)感染。所以在預(yù)防本病的同時(shí)，要注意防控其他病原感染，導(dǎo)致病情復(fù)雜，影響診斷和防控。█

參考文獻(xiàn)：

[1]萬曉星，高宇軒，黃新月，等.一例蛋雞馬立克氏病的診斷[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2020（2）：14-16.

[2]銀梅，高金海.雞馬立克氏病病毒的分離與初步鑒定[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展， 2005（1）：102-103.

[3]孟慶華，劉金彪，高清清.一例雞馬立克氏病的病理組織學(xué)診斷[J].中國家禽，2010，32（5）：52-53.

[4] MUNIYELLAPPA H K， SATYANARAYANA M L， ISLOOR S， et al. Mareks disease outbreak among vaccinated commercial layer flocks in the mining area of Karnataka， India [J]. The Veterinary Record， 2013， 172（17）：452.

[5]高婷婷，孟祥凱，成子強(qiáng)，等.中國蘆花雞中出現(xiàn)馬立克氏病[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008（4）：725-729.

[6] Gong Z， Zhang L， Wang J. Isolation and analysis of a very virulent Mareks disease virus strain in China [J]. Virology Journal 2013， 10： 155-155.

[7] Zhang， Y P， Li， Z J， Bao， K Y. Pathogenic characteristics of Mareks disease virus field strains Prevalent in China and the effectiveness of existing vaccines against them [J]. Veterinary Microbiology， 2015a， 177： 62-68.

[8]呂紅超.雞馬立克氏病病毒中國分離毒株分子進(jìn)化研究[D].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2016.

[9]祖銘.一株馬立克氏病病毒野毒株的分離鑒定及其對(duì)海蘭褐蛋雞的致病性分析[D].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017.